耐高温β-葡聚糖酶产生菌株的筛选及酶学性质的研究

从云南安宁温泉周围土壤中筛选到1株热稳定性能较好的β-葡聚糖酶产生菌W-9.其发酵条件及酶学特性为:发酵 72h,在pH6.0、70℃条件下,酶活性为82.64u/mL.分子生物学及其生理生化鉴定,该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).W-9产β-葡聚糖酶的酶学性质结果显示,其产β-葡聚糖酶的最适反应pH为6.0,最适反应温度为70℃,在70℃条件下保温时,酶活基本稳定.     

产β-环状糊精葡萄糖基转移酶高产菌株XW-6-66发酵条件和酶学性质的研究

以一株β-环状糊精葡萄糖基转移酶高产菌株XW-6-66为研究对象,对其发酵条件及酶学特性进行了初步研究.该酶的最适反应温度为70℃,最适反应pH为9.0,酶学特性非常适合于环状糊精的工业化生产.对该茵发酵培养基的碳源、氮源及pH进行了单因子分析,采用3个因素正交实验确定该茵的最佳发酵培养基配方为:0.3%可溶性淀粉,1.0%牛肉浸膏,1%蛋白胨,0.2%Na2CO3,0.13%K2HPO4·3H2O,0.02%MgS04·7H2O,pH为9.0.在该条件下,茵株XW-6-66产8-CGTase的酶活由优化前2173.33 u/mL提高到3622.94 u/mL.     

重组脂肪酶X12-5的大规模发酵及其酶学性质研究

实验室保藏的一株产脂肪酶基因工程菌X12-5,经过摇瓶发酵,测得酶活力为65U/mL。为进一步提高酶活力,应用于工业生产,将其进行上罐(180L)发酵。大规模发酵后,酶活高达220000U/g,实现了脂肪酶的高效表达。对其酶学性质研究表明,最适温度和pH分别为45℃和7.0;pH在4.0～7.0,温度在50℃以下酶活相对稳定;Mg2+、Mn2+、Ca2+对酶活有明显促进作用。由该脂肪酶的酶学性质初步判断其在制革工业上具有潜在的应用价值。     

黑根霉Q3Y在旱胁迫效应下的菌丝生长特性及糖化产物

选取产糖化酶较强和糖化能力较高的黑根霉（Rhizopus nigricans）Q3Y进行菌丝体的抗旱逆境液态发酵培养,分析了菌株Q3Y菌丝生长状况及菌丝对糯米的利用。结果表明,在土豆汁培养基中添加0.50%的琼脂,使其黏度达到500 mPa·s,黑根霉菌Q3Y在该培养基中菌丝生长状态良好,细胞分散均匀;在料水比为6∶10（g∶mL）,含水量为62.5%糯米培养液中,黑根霉菌株Q3Y菌丝体能得到更好的生长,培养72 h还原糖、可溶性总糖及糖化酶酶活分别达到26 g/100mL、32 g/100mL、23.0 U/mL。     

白曲霉Asp-amy1固体发酵生产酸性淀粉酶的初步研究

利用白曲霉菌株Asp-amy1进行固体发酵生产酸性淀粉酶,对白曲霉固体发酵条件进行了优化,初步确定菌株产酶的优化培养基为:7.5%的玉米粉,1.5%的蛋白胨,发酵曲含水量为50%,发酵起始pH5.5.菌株的最佳接种量为40%(干基计),发酵时间由72 h缩短到48 h,菌体生长迅速,产酶能力强,酶活达1000 U/g干曲.薄层层析生成的液化产物,主要以G2-G7为主,淀粉液化后都生成了小分子的糊精和寡糖类;产物薄层分析可初步确定所产酶为液化型酶.     

耐高温中性纤维素酶高产菌的筛选及发酵条件研究

从云南大马尖山土壤中筛选到一株热稳定性能好的纤维素酶高产细菌菌株D-9,并对其发酵条件进行研究,该菌株发酵72h在pH6.0、70℃条件下发酵液酶活为24.23IU/mL,酶学特性非常适合于纺织行业.通过分子生物学及其生理生化鉴定,该菌株为类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii).此外,分别对该菌发酵培养基的初始pH、碳源、氮源、装液量、接种量及产酶进程进行了分析.     

魔芋寡糖的膜分离及产物组成分析

本文采用高速离心、无机陶瓷微孔滤膜、超滤纳滤对250 g/L(w/v)的高浓度魔芋精粉的酶解液进行分离、过滤、浓缩、制备魔芋寡糖,分析了甘露聚糖酶水解催化高浓度魔芋粉形成的具有一定粘性的寡糖溶液,对过滤通量、寡糖的回收率和寡糖产物组成的影响。结果表明,150 g/L的寡糖混合物通过超滤膜过滤,寡糖回收率能达到86%以上;组合纳滤膜能使寡糖混合物进行有效浓缩,可以去除溶液中的金属离子、有机酸小分子和溶剂水,提高寡糖溶质纯度。100~5000 Da的魔芋寡糖混合物通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)分析发现,寡糖的构成比例中三糖为最高单一组分,含量为21.5%,二糖~十四糖的总含量达到90%,十五糖-二十糖的含量为9%。因此,采用膜过滤技术用于魔芋寡糖分离、提纯和浓缩工艺是可行的。     

低温脂肪酶酶促酯交换制备生物柴油

以菜籽油为原料,实验室自制脂肪酶为催化剂,对在低温条件下甲醇与菜籽油进行酯交换反应制备生物柴油的工艺进行了探索研究.通过单因素实验和正交实验,重点考察了醇油摩尔比、酶添加量、反应时间、反应温度和水添加量等因素对酯交换反应的影响.结果表明,反应的最佳优化条件为:醇油摩尔比4∶1,酶添加量105 U/g,反应温度20℃,反应时间12 h,水添加量为油质量的20％.在此条件下,菜籽油的脂肪酸甲酯转化率可达97％左右.     

脂肪酶催化地沟油生产生物柴油的新工艺研究

试验研究了以地沟油为原料,在脂肪酶作用下与甲醇发生酯交换反应制备生物柴油的工艺条件,通过单因素试验和正交试验对该工艺的操作条件进行优化,得到最佳的工艺条件为醇油摩尔比为2∶1,脂肪酶催化剂用量按每克油脂90 U添加,正己烷和水添加量均为油重的10%,反应温度为20℃,反应时间为28 h,甲酯得率为97.12%。该新工艺与传统工艺相比,具有操作简单,转化率高,成本低,可重复性好等优点,有利于为酶法制备生物柴油的产业化发展提供一定理论基础。     

白曲霉产中温酸性α-淀粉酶组成成分分析及酶学性质的研究

对高产白曲霉菌株产生中温酸性α-淀粉酶进行了酶学性质研究,试验表明该酶最适作用温度为60℃,最适作用pH为5.0,该酶在pH4.5～7.0范围内酶活较稳定,金属离子对此酶几乎没有激活作用,Hg＋、Fe3＋对酸性α-淀粉酶有明显的抑制作用。酸性α-淀粉酶的Vmax为311.53mg/（u·min）,Km为2.18mg/（u·min）。该酶具有较好的耐热性和耐酸性,能在同一pH条件下进行淀粉的液化和糖化作用,具有较好的应用前景。