海洋Arthrobacter protophormiae CDA2-2-2产几丁质脱乙酰酶发酵条件优化

对海洋Arthrobacter protophormiae CDA2-2-2产几丁质脱乙酰酶发酵培养基和发酵条件进行优化,提高发酵产酶水平。在单因素实验优化的基础上,利用PB试验筛选显著影响菌株发酵产酶酶因素,进一步利用响应面法优化这些因素,获得最佳发酵培养基和培养条件。利用单因素实验优化获得碳源、氮源、金属离子、发酵温度、发酵时间、装液量、初始pH和转速的最佳条件。PB试验筛选获得显著影响发酵产酶的因素为MgSO₄、发酵温度和葡萄糖。运用Box-Behnken设计,通过响应面法对上述3因素进行优化,获得Arthrobacter protophormiae CDA2-2-2最佳培养基配方为:葡萄糖0.5%,酵母粉1%,MgSO₄ 0.015%;发酵条件为:发酵温度38 ℃,初始pH7.0,转速140 r/min,发酵时间84 h,接种量2%,装液量40%。在此条件下Arthrobacter protophormiae CDA2-2-2产几丁质脱乙酰酶酶活为14.58 U/mL,较优化前提高了2.5倍。本研究结果为Arthrobacter protophormiae CDA2-2-2几丁质脱乙酰酶的进一步开发和应用奠定试验基础。     

复合氨基酸锌、铁螯合物的制备及抗菌和抗氧化性研究

通过水体系合成法由8种人体必需氨基酸制备复合氨基酸锌和复合氨基酸铁，利用试管二倍稀释法测定其对菌株 Lysinibacillus macrolides、Bacillus cereus、Bacillus subtilis、Staphylococcus aureus、Pseudomonas aeruginosa、Escherichia coli、Zygosaccharomyces rouxii、Saccharomyces cerevisiae、Aspergillus flavus、Penicillium expansum 和 Aspergillus niger的抗菌活性，进一步测定其对DPPH·、O2-·和·OH的清除率。复合氨基酸锌和复合氨基酸铁的螯合率为81.27%和68.19%。二者对供试细菌和酵母菌具有显著抗菌活性，其中，对B.subtilis、S.aureus抑制作用最显著，最小抑菌浓度均为0.313 mg/mL；对供试霉菌无显著抑制作用。二者对DPPH·、O2-·和·OH有清除能力，且随着浓度的增加而增强。2.5mg/mL复合氨基酸锌和复合氨基酸铁对DPPH·、O2-·和·OH的清除率分别为34.52%、23.93%、22.36%和30.46%、20.63%、20.05%。     

一株产几丁质脱乙酰酶海洋细菌的Rhodococcus hoagii筛选、鉴定及酶学性质

从连云港高公岛海域采集的海泥中使用平板变色圈法初筛和摇瓶发酵复筛后,获得一株产几丁质脱乙酰酶的菌株MCDAⅡ-2。综合形态学特征以及16SrDNA序列分析最终将菌株MCDAⅡ-2鉴定为Rhodococcus hoagii。进而研究其酶学性质,得该几丁质脱乙酰酶最适催化温度为35℃,最适pH为8.0。Na^+、Mg^2+、Li+、Sr^2+对酶促反应起到促进作用,Ca^2+、Ba^2+、Co^2+、Cd^2+、Fe^2+及EDTA对酶促反应起到了抑制作用,而K^+对酶促反应影响较小。酶在25℃~35℃时较稳定,在中性和弱碱性条件下稳定性较好。本次研究的结果将为几丁质脱乙酰酶的工业化应用奠定基础。     

响应面法优化海藻酸钠固定几丁质脱乙酰酶的研究

设计单因素试验考察海藻酸钠、氯化钙浓度、硬化时间、戊二醛浓度和交联时间对海藻酸钠包埋固定几丁质脱乙酰酶的影响,并通过响应面法优化固定条件。得到最佳固定条件为:海藻酸钠浓度27.8 g/L,氯化钙浓度为31.0 g/L,硬化1.84 h,戊二醛浓度0.025%,交联30 min。对固定化酶的酶学性质进行研究,结果表明相较于游离酶,固定化酶的热稳定性和pH稳定性都有明显提高。固定化酶在循环操作6次后,酶活仍然保持初次酶活性的63.15%,为几丁质脱乙酰酶的工业化应用提供理论基础。