三重real-time PCR同步检测黄牛、水牛和牦牛成分

为准确快速地鉴定黄牛、水牛和牦牛的成分,研发具有这3 种牛特异性的引物和探针,并建立单重、双重和三重实时聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,real-time PCR）方法,同步检测上述3 种牛的成分。单重real-time PCR检测时,3 种牛的检测灵敏度均为0.025 ng/μL;双重real-time PCR检测时,两两组合的引物探针含量比例为1∶1时,黄牛的检测灵敏度降低至0.1 ng/μL,而水牛和牦牛仍为0.025 ng/μL;对三重real-time PCR检测体系进行优化,当黄牛、水牛和牦牛3 组引物探针的含量比例为3∶3∶2时,检测灵敏度最佳,黄牛和水牛的检测灵敏度可达到0.1 ng/μL,而牦牛的灵敏度仍可达到0.025 ng/μL。但上述双重和三重real-time PCR检测的灵敏度,是建立在3 种牛的含量比例为1∶1∶1的情况下,若3 种牛的比例差异较大,特别是黄牛和牦牛的含量比例差异较大时,如比例为9∶1时,含量低的成分会存在漏检。因此,在对整块肉的样品进行检测时,可采用三重real-time PCR的方法同步检测3 种牛的成分;若样品可能为上述3 种肉的为混合物,如肉糜、肉松等,则建议采用单重real-time PCR检测。