莲藕渣多糖通过MAPK/NF-κB途径调节小鼠腹腔巨噬细胞的免疫应答

揭示莲藕渣多糖（Lotus Root Residue Polysaccharide,LRP）对BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞的体外免疫调节作用,探讨LRP刺激腹腔巨噬细胞产生免疫应答的信号通路。利用MTT法测定不同浓度LRP对细胞活力影响;选用不同浓度梯度及同一浓度不同时间点的LRP刺激细胞,Griess法检测细胞NO释放量;半定量PCR检测细胞TLR4、TLR2受体及免疫关联因子（TNF-α、IL-6、iNOS、1L-1β、COX-2、Nfkbia）mRNA的表达,蛋白印迹法检测其MAPK通路（ERK1/2、JNK、p38）及Akt的磷酸化,同时研究了LRP对和蛋白AP-1及NF-κB的影响,对LRP对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节活性及其信号机制进行评估。研究表明,LRP对小鼠腹腔巨噬细胞无毒作用,25~50 μg/mL LRP促进细胞生长,细胞存活率为104.82%和102.53%（p<0.05）;NO浓度随LRP浓度提高而显著提高（p<0.05）,200 μg/mL LRP刺激细胞产生一氧化氮（NO）为36.47 μmol/L,200 μg/mL的LRP处理细胞,NO产量随培养时间延长而增多（p<0.05）,24 h时NO浓度为44.18 μmol/L;mRNA基因表达研究显示,LRP调控TLR4、TLR2受体,并调节免疫基因的表达;此外,LRP促进核蛋白c-Jun、p65由核外转向核内,增强ERK1/2、JNK、p38蛋白的磷酸化水平,但对于Akt的磷酸化没有显著影响。因此,莲藕渣多糖（LRP）可通过MAPK/NF-κB途径增强BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞免疫应答。     

密生波罗花中神经酰胺类成分的抗炎作用

该研究运用硅胶柱层析法,结合超高效液相色谱-高分辨串联质谱联用技术以及核磁共振氢谱/碳谱等鉴定方法,从密生波罗花中分离鉴定了一组以神经酰胺为主的混合物,其中,神经酰胺类成分含量为81.53%,并对其抗炎作用进行了初步评价。噻唑蓝（MTT）检测结果显示低浓度的密生波罗花神经酰胺（6.25~50 μg/mL）对RAW264.7的细胞活性没有显著影响。密生波罗花神经酰胺能显著减少脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞一氧化氮（NO）的释放量,且当浓度为100 μg/mL时,对NO释放的抑制率最高,为91.07%±0.11%。密生波罗花神经酰胺能高效抑制LPS诱导RAW264.7细胞中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子（TNF-α）及一氧化氮合酶（iNOS）等炎症因子的mRNA表达水平,显著降低LPS诱导RAW264.7细胞中核因子κB抑制蛋白α（IκBα）、丙酮酸脱氢酶激酶1（PDK1）及AKT蛋白的表达及磷酸化水平。结果表明密生波罗花神经酰胺具有显著的抗炎活性,并可通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）信号通路发挥其抗炎作用,可为相关保健食品开发和该植物资源的合理利用提供一定的科学依据和数据支撑。