文蛤蛋白抗氧化活性肽的研究

利用正交实验研究了文蛤蛋白分别经木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶作用后酶解物对羟自由基和超氧自由基的清除作用,优化了水解条件,并对最佳清除率下的三种酶解物进行SephadexG50凝胶柱分离,测定酶解物中抗氧化活性肽的分子量分布。结果表明,三种酶酶解文蛤所得的酶解产物对自由基均具有清除作用,水解液中多肽的分子量主要集中在1000以下,分别占图谱面积的51.90%、61.7%和42.07%。     

肉桂醛生物转化产物的高效液相色谱分析

微生物催化转化肉桂醛的反应中,能生成苯甲醛、苯甲酸、肉桂醇、肉桂酸、3-苯丙醇和3-苯丙醛6种产物。为了筛选目标菌株并监测转化产物,建立了用高效液相色谱法同时测定包括反应底物肉桂醛在内的7种组分的分析方法。通过实验优化,确定的色谱条件为:采用SunFireTMC18柱(150mm×4.6mm,5μm),以乙腈-甲醇-水-冰醋酸(体积比为16∶30∶54∶0.02)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为204nm,柱温为(35±2)℃。结果表明,肉桂醛、苯甲醛、苯甲酸、肉桂醇、肉桂酸、3-苯丙醇和3-苯丙醛分别在3.36~437.32、2.00~260.52、2.06~267.28、2.34~303.42、3.24~420.94、2.45~318.50和4.02~522.86mg/L范围内呈良好的线性关系(r0.999),平均回收率分别为93.39%,92.31%,102.24%,92.75%,90.68%,106.38%和92.10%,相对标准偏差分别为3.21%,1.10%,1.51%,1.83%,0.40%,2.84%和1.34%。     

茴油臭氧化选择性的研究

研究了无水乙醇等溶剂对茴油臭氧化的影响以及茴油中三种主要双键物茴脑、α-蒎烯和草蒿脑臭氧化的选择性。研究结果表明 ,采用混合溶剂效果较好 ,混合溶剂的质量比为无水乙醇∶环己烷 =1∶ 3。臭氧对茴脑有很好的选择性     

高效液相色谱法测定肉桂醛生物转化体系中10种苯基香料

建立一种同时测定微生物转化肉桂醛体系中10种天然苯基香精香料(苯甲醇、苯甲醛、苯甲酸、苯乙醇、苯乙酮、肉桂醇、肉桂醛、肉桂酸、3-苯丙醇和3-苯丙醛)的高效液相色谱分析方法。试样经无水乙醇提取,离心,过滤后进样。色谱分析采用SunFireTMC18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇∶乙腈∶水∶冰醋酸=28.4∶18∶53.6∶0.04(体积比)为流动相,流速1.0 mL/min,紫外检测器检测。10种待测物在2.00 mg/L^318.60 mg/L范围内线性关系良好(0.9987≤R2≤0.9996),方法检出限(method detection limit,LOD,S/N=3)为0.36 mg/L^1.16 mg/L,在低、中、高3个加标水平下的平均回收率为92.13%~102.90%,RSD为0.62%~4.01%。该方法可用于微生物转化肉桂醛合成天然苯基香料的生物反应体系的成分分析,也可用于生物转化肉桂醛合成天然香料的菌种选育工作中。     

文蛤蛋白酶解液的制备及自由基清除活性的研究

以文蛤为原料,利用木瓜蛋白酶对其进行水解,以水解度为指标确定最佳水解条件。在此基础上通过正交试验,以自由基清除率为指标,对水解条件进行了优化,结果表明在温度55℃、水解时间90min、加酶量1.5%、料︰水=1︰3、pH6.5条件下可以获得好的自由基清除能力。     

车螺肉酶解液中提取分离天然牛磺酸工艺

以新鲜车螺肉为原料,采用酸性蛋白酶先酶解再水煮工艺提取天然牛磺酸。在料:水=1:3(W/V),酶解温度35℃,酶解pH2.5前提下,酸性蛋白酶最适的提取条件为加酶量E/S=2000U/g,酶解时间4h,水煮时间0.5h。用H 型强酸性阳离子交换树脂从酶解提取液中分离提纯牛磺酸,结果表明该工艺能有效地将牛磺酸与甘氨酸、赖氨酸等其他氨基酸分离。在25×400(mm)离子交换柱湿装柱量为120ml,洗脱速度1.5BV/h条件下,最适上柱量0.5mg氨基氮/ml湿树脂,在pH0.9-3.3范围内的洗脱液是牛磺酸流出的高流分部分。     

反相高效液相色谱法同时测定生物转化液中的反式茴脑、茴香醛和茴香酸

建立了同时测定生物转化液中反式茴脑、茴香醛和茴香酸3种化合物的反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析方法。采用Kromasil-100A C18色谱柱(250 mm×4.6 mm×5μm),流动相为V(乙腈)∶V(水)∶V(冰醋酸)=70∶30∶0.02,等度洗脱,流速0.8 mL/min,检测波长为260 nm,进样量5μL,柱温室温,15 min内3种物质得到了较好的分离。该方法中各标准品质量浓度与色谱峰面积线性关系良好,具有较好的精确度和重现性。反式茴脑、茴香醛和茴香酸线性范围分别为4.080～2.652×102 mg/L(R2=0.9999)、4.580～64.12 mg/L(R2=0.9997)、3.780～52.92 mg/L(R2=0.9993);平均加标回收率分别为100.34%、101.18%、100.31%;相对标准偏差RSD分别为0.92%、1.75%、0.53%。用于实际样品测定时,RSD均小于1.1%。该方法简便、快速、准确,能同时定量分析反式茴脑生物转化液等复杂体系中的反式茴脑、茴香醛和茴香酸。     

双水相萃取分离米曲霉中性蛋白酶

采用聚乙二醇(PEG)/盐双水相体系萃取分离米曲霉中性蛋白酶。探讨了不同成相盐及其浓度、成相聚合物PEG及其浓度、pH和NaCl浓度对中性蛋白酶萃取的影响。结果表明,适宜的双水相萃取体系为20%PEG1000/25%(NH4)2SO4(m/m)、pH8.0、不添加NaCl,此条件下中性蛋白酶上相酶活回收率和纯化倍数分别为99.88%和2.32。     

茴香醛和茴香酸紫外光谱吸收特性的研究及其定量分析

考察了茴香醛、茴香酸及其混合物的紫外光谱吸收特性,建立了一种能同时测定茴香醛和茴香酸含量的紫外分光光度法。结果表明,茴香醛和茴香酸在260 nm有等吸收点,利用紫外等吸收点特性简化混合物各组分质量浓度的计算方程,得出了线性方程:ρ(茴香醛)=(A292-0.006 4)/0.077 5,ρ(茴香酸)=(A260-A292)/0.077 5。茴香醛和茴香酸的回收率分别在97.42%~100.09%和99.89%~101.90%,相对标准偏差均小于2.0%。     

肉桂内生菌Sphingomonas sp.Z45生物转化肉桂醇生成天然2-苯乙醇

从新鲜肉桂枝中筛选出一株高效转化肉桂醇合成天然2-苯乙醇的内生菌,经鉴定为鞘氨醇单胞菌,并命名为Sphingomonas sp. Z45。采用GC-MS法对代谢中间体进行跟踪监测,推测了其可能的代谢途径为:肉桂醇先被氧化、脱羧生成苯乙醛,苯乙醛加氢还原得到产物2-苯乙醇。考察了单因素实验对该生物转化体系的影响,得到反应优化工艺条件为:初始pH=7,接种量5%,三角瓶(150 mL)中装液量为20 mL,菌体培养24 h后,加入底物肉桂醇质量浓度2.5 g/L,在30℃、转速为200 r/min的摇床反应12 h。在该优化条件下,肉桂醇转化率为59.16%,2-苯乙醇质量浓度达到1.48 g/L。