牛坏死杆菌43kDa外膜蛋白真核质粒在BHK细胞中的瞬时表达

目的构建含有牛坏死杆菌43 kDa外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)基因的真核表达重组质粒pCAGGS-43 kDa OMP,并检测其在BHK细胞中的瞬时表达。方法将43 kDa OMP核苷酸全基因序列与pCAGGS-HA载体连接,构建重组质粒pCAGGS-43 kDa OMP,转化至大肠埃希菌,将鉴定正确的阳性菌转染BHK细胞,采用间接免疫荧光和Western blot法检测重组蛋白的表达。结果经双酶切及PCR鉴定,重组质粒pCAGGS-43 kDa OMP构建正确;转染pCAGGS-43 kDa OMP的BHK细胞镜下观察可见绿色荧光,Western blot检测可见相对分子质量为43 000的目的蛋白。结论成功构建了pCAGGS-43 kDa OMP真核表达质粒,可在BHK细胞中瞬时表达,为进一步研究牛坏死杆菌感染机制奠定了基础。     

乙酰水杨酸制备实验的改进

在乙酰水杨酸的制备实验中,针对存在的问题,利用杂多酸代替浓硫酸作催化剂,并通过加热共沸物来实现区间相近温度的控制来改进实验,使生产率得以提高,减少副产物,减少环境污染,实验更加准确,提高安全性。     

绿色化学的应用研究

绿色化学是现今化学发展的主要方向。在绿色化学研究中,应充分利用可再生资源,其中以无污染的物质为原料、酶为催化剂,生产有机化合物,因其条件温和、设备简单、选择性好、无污染,已成为绿色化学研究的重点之一,具有良好的开发前景。利用原子经济反应进行绿色设计,采用无毒、无害的原料和环境友好或可循环使用的新材料等,以及对能源工业中汽油的改造和造纸工业中的优化降解法研究,均取得了可喜的进展,并可对环境保护产生有益的、深远的影响。通过对绿色化学的应用研究,我们不但要有能力去发展新的、对环境更友好的化学,以防止化学污染,而且要让年轻的一代了解绿色化学、接受绿色化学,为环境经济做出应有的贡献。     

牛坏死杆菌43K OMP单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备牛坏死杆菌43K OMP单克隆抗体,并鉴定其生物学特性。方法经IPTG诱导表达重组43K OMP,纯化后免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选分泌抗43K OMP特异性抗体的杂交瘤细胞,制备腹水,对抗43K OMP单克隆抗体进行效价、亚类、免疫原性及特异性鉴定。结果获得3株稳定表达抗43K OMP单克隆抗体的杂交瘤细胞株,取其中效价最高的1株命名为O43,其重链为IgG1,轻链为κ链,上清和腹水效价分别为1∶25 600和1∶105;该单克隆抗体可与重组43K OMP发生特异性反应,且与转染后瞬时表达43K OMP的BHK-21细胞特异性结合,发生荧光反应。结论成功表达并纯化了43K OMP,制备了牛坏死杆菌43K OMP单克隆抗体,为研究坏死杆菌的感染机制及发病机理奠定了基础。     

绿色化学的应用研究

绿色化学是现今化学发展的主要方向.在绿色化学研究中，应充分利用可再生资源．其中以无污染的物质为原料、酶为催化剂，生产有机化合物，因其条件温和、设备简单、选择性好、无污染，已成为绿色化学研究的重点之一，具有良好的开发前景利用原子经济反应进行绿色设计，采用无毒、无害的原料和环境友好或可循环使用的新材料等，以及对能源工业中汽油的改造和造纸工业中的优化降解法研究，均取得了可喜的进展，并可对环境保护产生有益的、深远的影响、通过对绿色化学的应用研究，我们不但要有能力去发展新的、对环境更友好的化学，以防止化学污染，而且要让年轻的一代了解绿色化学、接受绿色化学，为环境经济做出应有的贡献.     

河北省某牛场坏死杆菌的分离及鉴定

目的对河北省张家口市某牛场奶牛腐烂蹄肢部组织坏死杆菌进行分离及鉴定。方法采集17份奶牛腐烂蹄肢部组织,在苛养厌氧培养基中进行培养,培养液涂片进行革兰染色,提取细菌基因组DNA,PCR法鉴定病料组织培养物基因组DNA,并进行测序。纯化后细菌进行生化鉴定及药敏试验。结果病牛蹄组织革兰染色阴性,部分菌体呈杆状或长丝状;17份病牛蹄组织中共检测出7份坏死杆菌阳性样品;纯化后阳性菌液的生理生化特性与坏死梭杆菌基本一致;对亚胺培南(泰能)高度敏感,对氨苄西林/舒巴坦、红霉素、妥布霉素中度敏感,对克林霉素、青霉素G、氨苄西林、头孢唑啉、哌拉西啉耐药。结论该牛场确认发生腐蹄病疫情,且主要由坏死杆菌引起。