食用植物油中动物源性成分PCR检测方法的建立

本文建立了应用PCR技术快速鉴别食用植物油中动物源性成分的方法。以食用植物油中掺入的动物源性基因为靶标,自行设计16S rRNA基因通用引物,同时选用动物物种特异性引物进行PCR扩增,分别得到相应的目的片段。通过三对16S rRNA基因通用引物,建立了从食用植物油中快速检测是否含有动物源性成分的方法;利用所选的动物物种特异性引物,进一步建立了从食用植物油中鉴定猪、牛、羊、鸡、鱼5种动物源性成分的方法,此方法能检测出含有0.1%(m/m)动物源性成分的植物油。     

灭菌乳中嗜热脂肪芽孢杆菌商业无菌的最低可视浓度的测定

目的 测定灭菌乳中嗜热脂肪芽孢杆菌的商业无菌检出限。方法 随机购买3种不同品牌的灭菌乳,分别添加10_⁵、10_⁴、10_³、10_²、10_¹、10_⁰ CFU/mL浓度的嗜热脂肪芽孢杆菌制成模拟样品,分别对培养4 d、7 d、9 d、10 d的样品按照GB 4789.26-2013《食品安全国家标准 食品微生物学检验 商业无菌检验》的检验方法检测。结果 3种品牌牛乳的模拟样品商业无菌的最低检出浓度均为10_¹ CFU/mL,同时发现培养10 d后样品中的嗜热脂肪芽孢杆菌并无明显的增殖也无菌落进入休眠状态。对培养10 d后的模拟样品进行菌落计数验证以上结论。结论 灭菌乳中嗜热脂肪芽孢杆菌商业无菌检出限为10_¹ CFU/mL,如果灭菌乳中存在嗜热脂肪芽孢杆菌浓度＜10_¹ CFU/mL时,可能在检验过程中对灭菌乳的芽孢菌出现漏检。灭菌乳中嗜热脂肪芽孢杆菌在培养后无明显增殖,符合商业无菌相对无菌标准。     

沙门氏菌传统血清凝集分型和分子血清分型试剂盒方法比较

目的 验证沙门氏菌血清分型试剂盒的适用性, 考核本实验室传统沙门氏菌血清分型技术, 扩充沙门氏菌的分型方法, 寻找更有效、更快捷的沙门氏菌分型方法。方法 保存的样品菌株库中随意挑选33株沙门氏菌和6株标准菌株, 首先确证为沙门氏菌, 然后分别采用传统的玻片血清凝集方法和分子血清分型试剂盒对其进行分型, 最后采用16S rRNA系统发育树对试验菌株进行聚类分析。结果 2种分型手段的匹配率高达94.9%, 其中YP 281 Salmonella havana和YP 639 Salmonella liverpool没有匹配到, 这2株菌在试剂盒数据库中不存在, 但本实验利用传统血清分型手段可以对这2株菌进行准确分型, 其中YP 281是本实验室对GB 4789.4-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》表B.1外成功分型的沙门氏菌。结论 本实验室传统血清凝集分型技术合格。沙门分子血清分型试剂盒具有较好的适用性, 能更快速、更方便对沙门氏菌进行分型。     

用于转基因检测的番木瓜基因组DNA提取方法的比较

本研究以番木瓜果实的不同部位,果皮、果肉和种籽为材料,比较了改进CTAB法和试剂盒法两种提取基因组DNA的方法。分别对植物叶绿体基因rbcL和番木瓜特异基因Papain进行了普通PCR和荧光PCR扩增,检验提取DNA的质量。结果显示改进CTAB法和试剂盒法都能提取得到纯度较高的DNA,适合普通和荧光PCR反应的要求,适用于外源基因的检测。改进CTAB法提取的DNA浓度要高于试剂盒法,而试剂盒法提取DNA所用的时间较短,更为方便,但成本较高。同时材料取样部位最好是果皮和果肉,果皮和果肉为材料提取得到的DNA纯度很高,适用于荧光PCR的要求。