伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽对双歧杆菌增殖的影响

大豆种子的贮藏蛋白主要由2种球蛋白组成,伴大豆球蛋白(conglycinin)是其中一种,它由3个不同的亚基组成。文中对伴大豆球蛋白进行了分离纯化,并研究了其体外经过胃蛋白酶水解后的肽对双歧杆菌增殖的影响。结果表明,分离纯化的伴大豆球蛋白纯度为90.13％,可供生理功能的研究,经胃蛋白酶水解后的肽能够促进双歧杆菌的增殖,表现出一定的生物活性作用。     

酪蛋白酶解产生β—Casomorphin—7样物质的ELISA检测

用酶联免疫吸附分析法(ELISA)对酪蛋白经胃蛋白酶作用30,60,90,120和150min的酶解消化液中β-Casomorphin-7样物质的含量进行了测定.结果分别为29.5±4.08,47.6±4.17,75.4±4.57,118±7.12和(99.2±5.69)μg/L;平均回收率为97.9%.ELISA方法检测结果表明,酪蛋白2h酶解消化液中β-Casomorphin-7样物质含量最高.     

水解面筋蛋白高效制备谷氨酰胺结合肽的研究

采用食品级胃蛋白酶、胰蛋白酶、Protamex复合酶双酶组合对面筋蛋白进行水解制备Gln结合肽。先确定三种单酶各自对面筋蛋白适宜的初始pH、温度、酶浓度和底物浓度。并以双酶进行两两组合水解。在进行水解度控制实验时取样,分析水解液中氨基氮的含量,计算平均肽链长度,并用高效液相色谱分析水解液中Gln的得率。实验结果表明胰蛋白酶和胃蛋白酶联合水解的效果最好,条件为:胰蛋白酶在pH8.0,50℃,S%=12.8%(W/V),E%=9%(W/W)水解6h,再用胃蛋白酶pH2.0,40℃,E%=5%(W/W)条件下水解5h,可得到平均肽链长度为2.20个氨基酸残基的蛋白水解液,Gln得率最高,为60.43%。认为胰蛋白酶和胃蛋白酶组合是面筋蛋白中高效制备谷氨酰胺结合肽的最佳组合。     

反相高效液相色谱法分析结构相似酪啡肽

β-酪啡肽(β-Casomorphinβ-CM)是β-酪蛋白经过酶解所释放的一类小肽,具有类似阿片肽的功能。本研究参考相关肽检测方法,以乙腈:水(3:1)为流动相,内含0.1%三氟乙酸为流动相酸性调节剂,梯度洗脱,反相C8柱分离,215nm紫外检测。结果显示,酪啡肽-7在21.45min出峰,在0.125～1.0mg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9989),β-酪啡肽-7和β-酪啡肽-5纯度和迁移时间的RSD分别为7.29%和5.19%。应用本方法可快速准确分离分析酪啡肽,尤其是结构相似的小分子肽。     

β-Casomorphin-7的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法的建立

β－酪啡肽－7（β－Casomorphin-7)是一个有代表性的乳源外啡肽，有调节动物消化道运动和采食、内分泌、免疫等多种生物学功能。本研究以β－Casomorphin-7与人血清白蛋白（HSA）经戊二醛交联的复合物作为包被抗原；一抗为鸡抗β－Casomorphin-7与牛血清白蛋白（BSA）交联复合物的抗血清；酶标二抗为兔抗鸡IgG经戊二醛与辣根过氧化物酶（HRP）交换的复合物。包被抗原和一抗的稀释度经方阵稀释实验确定。本实验所建立的竞争ELISA方法的孔间差异为3．3％，板间差异为8．6％，检测灵敏度20ng/ml，检测范围20－320ng/ml，在实验浓度范围内。β－Casomorphin-7的抗血清与β－内啡肽、脑啡肽、强啡肽、精氨酸降压素和神经降压素等活性肽未显示免疫交叉反应。表明所建立的方法有较高的特异性，可用于酪啡肽的体内功能研究。     

伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解产物中促双歧杆菌增殖肽的分离和鉴定

大豆贮藏蛋白主要包括大豆球蛋白(Glycinin)和伴大豆球蛋白(Conglycinin),本研究采用Sephadex-G15凝胶过滤和薄层层析的方法,对伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解产物中促双歧杆菌增殖肽进行分离,所得活性组分通过毛细管HPLC及质谱进行鉴定,结果表明,分离得到促双歧杆菌增殖活性最强的组分是由性质相近的肽混合物组成,通过毛细管HPLC可以得到活性酶解肽的图谱,并通过质谱可知酶解肽主要由6-10个氨基酸残基组成。上述结果提示,伴大豆球蛋白中的生物活性物质是以无活性的形式存在于蛋白质的多肽链中,必须通过适当酶解,在一定条件下才能释放出来,发挥出各种生物学功能。     

牛乳铁蛋白的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法的建立

用牛乳铁蛋白(Bovine Laetoferrin，BLf)、纯品免疫新西兰白兔制得兔抗BLf的多克隆抗体，琼扩效价最高为l：64。经ELlSA方法检测，该抗体与牛乳中的主要蛋白质：α—乳清蛋白、β—乳球蛋白、血清白蛋白以及酪蛋白之间不存在免疫交叉性，说明抗体特异性良好。以BLf纯品为包被抗原，自制抗体为一抗，辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG为二抗，邻苯二胺(OPD)为底物，建立了BLf的竞争抑制性ELISA方法。包被抗原及抗体的浓度均由方阵稀释实验确定。所建立的ELlSA方法孔间误差1．6％，板间误差4．3％，灵敏度25μg／L，检测范围25～800μg／L。标缝曲线线性方程（Logit）Y=-1.488IgC 3.8116，相关系数R=0.990。     

灌喂不同储存期酸奶对主动免疫小鼠免疫功能的影响

观察不同储存期酸奶对新城疫(New Castle Disease,NDV)疫苗主动免疫小鼠免疫功能的影响。四组饲喂基础日粮的雄性小鼠,每组6只,分别灌喂自出厂日期后4℃储存0d(对照组)、3d(E1组)、6d(E2组)和9d的酸奶(E3组),1ml/只(酸奶灌喂前作乳酸菌计数),连续灌喂7d,第8d皮下注射新城疫Ⅰ苗0.2ml/只,继续灌喂10d,第18d处死。测定不同储存期酸奶对NDV主动免疫小鼠肠道sIgA(分泌型免疫球蛋白A)的分泌、血清NDV抗体效价、血清IL-2(白介素-2)水平及脾脏TNF水平的影响。乳酸菌计数结果显示储存期为3d的酸奶中的乳酸菌数较0d增加了656.26%(p<0.01),6d的和9d的分别下降了40.15%(p<0.05)和65.46%(p<0.01)。小鼠实验发现灌喂储存期为3d酸奶的小鼠肠道sIgA水平、血清NDV抗体效价及脾脏TNF(肿瘤坏死因子)水平分别较0d酸奶的对照组升高了8.04%、10.35%和9.70%。血清IL-2水平升高了23.11%(p<0.05)。灌喂储存期为6、9d小鼠的各项免疫指标水平均低于对照组,而且9d组低于6d组。相关性分析发现仅IL-2水平与不同储存期酸奶中乳酸菌数有显著相关性。由此可见,酸奶的储存影响了乳酸菌活菌数,从而影响了酸奶对机体在外源刺激下的免疫功能的增强作用,储存期3d内的酸奶均具有较好的免疫增强作用。     

酪蛋白酶解产物阿片样活性的细胞生物学鉴定

以富含δ－阿片受体的ＮＧ１０８－１５杂交瘤细胞株，在有和无阿片特异性拮抗剂纳洛酮存在的情况下，与酪蛋白及其胃蛋白酶解消化液共同孵育。结果证明，酷蛋白经胃蛋白酶处理后有阿片样活性物质释义。     

β—酪啡肽—7的多克隆抗体的制备

β-酪啡肽-7经戊二醛与牛血清白蛋白（BSA）交联后的复合物免疫伊莎蛋鸡5只。6个月后，对鸡血清、所产蛋的卵黄和卵黄氯仿抽提上清液进行琼扩效价分析，结果表明，血清抗体的最高效价达到1：8，后两者的效价为1：4。