高产柚苷酶菌株米曲霉的诱变育种及发酵条件优化

以土样中筛选的1株产胞外柚苷酶菌株米曲霉11250为出发菌株,采用紫外诱变、亚硝酸钠化学诱变及紫外-亚硝酸钠复合诱变3种方法进行诱变育种,通过透明圈初筛以及液体摇瓶发酵复筛,最终选育出1株胞外柚苷酶产酶活力较高的突变菌株UN2,该菌株产胞外柚苷酶活力达147U/mL,为原始菌株的2.3倍,经5代传代,其产酶能力稳定在(147±0.8)U/mL。采用单因素试验和响应面设计Box-Behnken design试验相结合的方法进行产柚苷酶的摇瓶发酵培养基配方优化,对影响菌株UN2发酵产酶的碳源、氮源、培养基初始pH、温度等条件做单因素试验和响应面法试验。结果表明:该菌株的最佳产酶条件:麦芽糖2.0 g/100 mL,牛肉蛋白胨3.0g/100 mL,初始pH 5.7,培养温度30℃。在此条件下,柚苷酶活力达到251 U/mL,是未优化前的1.7倍。结论 :通过培养基优化,大幅度提高了米曲霉11250液体发酵产柚苷酶的酶活力。     

西部乳源乳酸菌胆盐解离能力筛选及其性能评价

目的:探究青海、甘肃、新疆、西藏和内蒙古等5个西部牧区的传统发酵乳品中乳酸菌的胆盐解离能力,为筛选高胆盐解离能力的优良菌株提供理论依据。方法:利用高效液相色谱技术,分析分离自西部传统发酵乳品中的275株乳酸菌的胆盐解离能力,筛选出性能优良菌株,测定其产γ-氨基丁酸能力。结果:①筛选出具有胆盐解离能力的菌株83株,不同来源、种类的阳性株筛出率存在差异,其中西藏奶渣呈较高的阳性株筛分率,其中副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌和短乳杆菌表现最优。②阳性株对6种结合态胆盐解离能力存在显著差异(P0.05),其中对甘氨酸结合态胆盐的解离能力高于牛磺酸结合态胆盐。③区域间比较显示:不同地区阳性株对4项胆盐解离指标存在显著性差异,其中来源于新疆和西藏的阳性株胆盐解离能力显著高于青海和内蒙古的阳性株(P0.05);④乳种间比较显示:不同乳种阳性株对3项胆盐解离指标存在显著性差异,其中来源于奶渣中的阳性株对总胆盐解离能力显著高于酸马奶、酸牦牛奶中的阳性株(P0.05);⑤优良菌株间比较显示:不同菌种对5项胆盐解离指标存在显著性差异,短乳杆菌和植物乳杆菌对总胆盐的解离能力显著高于副干酪乳杆菌和干酪乳杆菌(P0.05)。⑥4种优良菌株产γ-氨基丁酸能力分析:短乳杆菌和植物乳杆菌有较高产γ-氨基丁酸能力,而副干酪乳杆菌和干酪乳杆菌不产γ-氨基丁酸。结论:胆盐解离能力因菌株来源和种类不同而存在差异,以新疆酸马奶、酸驼奶和西藏奶渣中的阳性株胆盐解离能力表现最优,其中短乳杆菌和植物乳杆菌显示较强的胆盐解离能力,并具有高产γ-氨基丁酸能力。     

不同基料的婴幼儿配方奶粉蛋白质营养评价

目的:旨在评价不同基料的婴幼儿配方奶粉蛋白质营养差异。方法:通过邻苯二醛(OPA)-9-芴甲基氯甲酸甲酯(FMOC)在线柱前衍生利用高效液相色谱方法测定氨基酸组成及含量,以WHO/FAO推荐的氨基酸理想模式为基准,选择氨基酸评分(AAS)、氨基酸比值(RC)、氨基酸比值系数分(SRC)、必需氨基酸指数(EAAI)及灰色关联度法5项指标,通过加权评分法对市售不同品牌的婴幼儿配方牛、羊奶粉进行综合评价。结果表明:加权评分及各分项指标比较显示,母乳均为最优,其必需氨基酸组成与理想模式吻合度最佳,蛋白质质量最好,利用率最高,即表明母乳是婴幼儿的最佳营养来源,同时也表明该综合评价方法可信;采集的各配方奶粉样品第一限制性氨基酸均为蛋氨酸+胱氨酸,所有样品必需氨基酸指数均在90以上,均属于优质蛋白源;所有样品中,综合得分最高的为配方羊奶粉样品C为74.78,配方牛、羊奶粉和理想氨基酸模式均存在一定差距,羊奶粉较优,整体营养评价:母乳>配方羊奶粉>配方牛奶粉。     

限制性内切酶组合对阪崎克罗诺杆菌的脉冲场凝胶电泳基因分型效果的影响

目的利用多种限制性内切酶提高脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)技术对阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter Sakazakii)的分型效果,找到更多的以PFGE为基础的阪崎克罗诺杆菌分子分型信息。方法本研究选用XbaⅠ、SpeⅠ、NheⅠ和BlnⅠ分别酶切34株克罗诺杆菌分离株的DNA,并经PFGE得到相应的基因图谱,通过束平均数、束菌株百分比、结与菌株比值与Simpson多样性指数对各限制内切酶以及结合酶的相对分辨率进行评价。结果 NheⅠ是PFGE单酶切分型中效果最好的一种限制性内切酶;4种限制性内切酶相结合的分型方法可提高PFGE阪崎克罗诺杆菌基因分型效果。结论运用PFGE技术对菌株进行亚分型时,选用的酶种类越多,则结果越可靠,使用XbaⅠ、SpeⅠ、NheⅠ、BlnⅠ4种内切酶结合分析,可以得到理想的菌株亚分型结果。