酶联免疫吸附法快速检测畜禽产品中西马特罗药物残留

为建立高效的西马特罗(Cimaterol, CIM)检测方法,试验用以重氮化法合成的西马特罗完全抗原免疫新西兰大白兔,提取兔脾细胞总RNA,反转录合成cDNA第一链,设计兼并引物,扩增兔源抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),通过45 bp的连接肽(Linker)连接成VH-Linker-VL并大量扩增;利用噬菌体表面展示技术将单链抗体(ScFv)片段与噬菌体展示载体pCANTAB-5e连接,电转化至大肠杆菌TG1感受态细胞,得到兔源噬菌体ScFv抗体库。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)判断是否偶联成功,用紫外扫描(UV)及基质辅助激光解析串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定人工抗原的偶联比。将富集的抗体库侵染对数期大肠杆菌进行抗体库滴度测定合成抗体库的质量进行鉴定,对抗体库进行三轮淘选,取最优的CIM-ScFv进行氨基酸序列分析。结果表明：CIM-BSA及CIM-OVA偶联比分别为8:1及10:1,CIM-BSA免疫原免疫新西兰大白兔,间接ELISA测得免疫血清校价为1:32000,免疫血清半数抑制浓度为9.77 ng/mL, 曲线的拟合度为0.997。抗西马特罗兔源噬菌体ScFv免疫库的插入率为92%,库容为1×10_¹⁰ pfu,多样性为83.3%,经过4轮淘选,获得一株与CIM有结合活性的噬菌体ScFv菌。以上结果表明西马特罗完全抗原的合成效果良好,可用于建立西马特罗检测方法,兔源噬菌体抗体库为快速获得CIM单链抗体奠定基础,为西马特罗快速检测提供新思路。