云南复烤烟叶不同地点醇化过程中可培养真菌种群分析

为较全面的了解云南复烤烟叶在不同地点醇化过程中真菌多样性,挖掘其中的有益微生物,提高烟草醇化品质,以复烤烟叶为试验材料,利用18S rDNA克隆测序技术,系统研究了其醇化过程中可培养真菌的种群结构。结果表明,醇化过程中,复烤烟叶叶面真菌数量除曲靖仓库在6月有所上升外,其余各地均随着醇化的进行而逐渐下降,其中曲靖和楚雄两地非常接近,元江最少;通过形态特征及18S rDNA鉴定,烟叶叶面真菌包括根霉属真菌、青霉属真菌、曲霉属真菌等24个真菌属（种）。不同地点,不同时期烟叶叶面真菌的数量、种类及优势种群不尽相同,而根霉属真菌始终为优势种群。     

晒黄烟调制期叶面可培养细菌的多样性研究

以云南特色晒黄烟烟叶为供试样品, 对调制期三个部位烟叶定期取样, 研究叶面可培养细菌的动态变化和多样性。结果表明, 晒黄烟调制期叶面可培养细菌总量呈先升高后降低再略升高的趋势。细菌种群较为丰富, 主要分布在Bacillus 属、Pseudomonas 属、Arthrobacter 属和Exiguobacterium 属等10 个属。Bacillus 属菌株是整个调制期的优势细菌类群, 与烤烟烟叶的优势种群基本一致。      

呼吸道合胞病毒截短G蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性

目的构建呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)截短G蛋白的原核表达载体,并对表达、纯化后的蛋白进行免疫原性及相关免疫指标的检测。方法人工合成G蛋白基因的部分核酸序列,采用重叠PCR法将CX3C模序替换为RSV M蛋白上的CTL表位,构建原核表达载体GCX3C-pET22b和GCTL-pET22b,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE鉴定后,采用Ni2+亲和层析柱纯化目的蛋白。纯化产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,免疫昆明小鼠,实验分GCX3C组(100μg GCX3C)、GCTL组(100μg GCTL)、阴性对照组(100μlPBS),分别于0、1、4周经小鼠双后侧肌肉注射免疫,经尾梢静脉取血,分离血清,检测IgG水平及嗜酸性粒细胞的数量,并通过小鼠体外淋巴细胞杀伤试验鉴定RSV特异性CTL应答。结果重组原核表达载体经双酶切及测序鉴定,证明G蛋白基因改造成功;重组蛋白的相对分子质量约14 000,表达量约占菌体总蛋白的40%,主要以可溶性形式表达;纯化的重组蛋白纯度达90%以上,可与抗RSV血清发生特异性反应;小鼠血清中的特异性IgG水平随免疫次数的增加而升高(P<0.01),GCX3C蛋白和GCTL蛋白的几何平均滴度分别为1 584.89和1 995.26;GCX3C组较GCTL组小鼠血清中嗜酸性粒细胞数量明显增加(P<0.01);GCTL蛋白免疫小鼠后可产生RSV特异性的CTL应答效应。结论已成功原核表达了GCX3C蛋白和GCTL蛋白,两种蛋白均有较好的免疫原性,GCTL蛋白可消除由CX3C模序引起的嗜酸性粒细胞增多,并增强了CTL效应,G蛋白基因的改造达到了预期效果。     

微波技术防烟叶霉变研究

为防止烟叶霉变,采用了微波技术控制烟叶含水率并杀灭致霉微生物.研究了微波功率、杀菌时间、物料量对微波杀菌效果的影响,同时分析了烟叶经微波处理后的品质变化情况.结果表明,微波功率和作用时间是影响杀菌效果和含水率的关键因素;微波功率800W,微波处理时间120s,物料量100g为最佳工艺条件;微波处理超过135s会对烟叶本身的品质造成不良影响;经微波作用后的烟叶室温条件下经40d后仍未霉变.该研究为烟叶防霉提供了新的方法,表明利用微波技术可实现对烟叶霉变的有效控制.     

绿色木霉对Zn2+的吸附特性研究

采用从含锌重金属废水中筛选出来的绿色木霉C-1进行锌离子吸附研究,考察了相关因素对吸附效果的影响.结果表明,菌丝体经酸碱预处理,可显著提高对锌离子的吸附性能;当pH值为5.5、干菌量为3 g·L-1、锌离子初始浓度在60 mg·L-1以下时,室温吸附60 min可以达到2 mg·L-1的排放标准.     

一株浸矿细菌的分离及其对低品位硫化镍铜矿中镍的浸出

从云南某铜矿井下酸性污水中分离到嗜酸菌株ynxd-1,对其形态、生长特性、16 S rRNA基因序列及其对低品位硫化镍铜矿的摇瓶浸出效果进行了研究.结果表明:细菌细胞呈短杆状,革兰氏染色阴性,不产芽孢,最适pH值及生长温度分别为2.0和30℃.菌株ynxd-1在10%(W/V)矿浆浓度及30℃温度的条件下摇瓶培养浸出28 d,低品位硫化镍铜矿镍的浸出率为56.4%.16 S rRNA基因序列分析表明,菌株ynxd-1与嗜酸氧化亚铁硫杆菌的同源性达到99%,可以鉴定为嗜酸氧化亚铁硫杆菌菌株.     

PCR-DGGE技术分析浸矿体系细菌群落结构的实验优化

为了研究低品位黄铜矿细菌搅拌浸出的浸矿菌液中的细菌群落结构,对 PCR-DGGE(变性梯度凝胶电泳)技术相关的实验方法进行了优化,主要涉及低丰度基因组 DNA提取方法优化、16SrRNA基因的 PCR扩增条件优化以及变性梯度凝胶电泳条件的优化.结果表明,采用分级离心多次浓缩的方法收集矿浆样品中的菌体,再用试剂盒提取基因组 DNA,有较好效果;使用含特定“GC夹板”的引物5′-CGCCCGCCGCGCCCCGCGCCCGTCCCGCCGCCCCCGCCCG-3′进行热启动降落 PCR,能显著提高目的条带的 PCR扩增效率;当 DGGE电泳设置温度为60℃左右,胶浓度为6%,尿素变性梯度为30%~50%,恒定电压为100V,时间为9h时,可以获得效果较好的 DGGE电泳图谱,该优化方案提高了对浸矿体系中细菌群落结构的检测效果     

多不饱和脂肪酸与深黄被孢霉低温适应性的关系（英文）

低温生长的适应是一个复杂的过程,涉及细胞的分子生物学和生物化学等很多方面.前期的研究表明,产油真菌——深黄被孢霉(Mortierella isabellina)M6-22能在5~35℃的温度范围生长.本研究以其为研究对象,分析温度下降引起的M6-22细胞膜流动性、多不饱和脂肪酸含量以及多不饱和脂肪酸合成相关基因的mRNA转录水平的变化.结果显示,在15℃条件下,M6-22的细胞膜流动性明显降低,而多不饱和脂肪酸含量显著提高,由30℃时20.85%增加到15℃时的31.04%,而且15℃时Δ12-脂肪酸脱氢酶基因mRNA转录水平提高了近3倍,但是Δ6-脂肪酸脱氢酶基因mRNA转录水平基本不变.这些研究结果表明,深黄被孢霉M6-22可能通过提高Δ12-脂肪酸脱氢酶基因的表达水平,增加膜脂中多不饱和脂肪酸含量,维持低温条件下细胞膜的流动性来促进细胞低温环境的适应.本研究将为研究低温条件下多不饱和脂肪酸合成调节机制以及进一步多不饱和脂肪酸工业化生产打下基础.     

云南不同仓储地复烤烟叶表面醇化期间可培养真菌的动态变化

为了解云南复烤烟叶(K326)异地醇化过程可培养真菌的多样性,通过形态特征观察、18S rDNA序列分析研究了异地醇化过程中真菌菌群的结构。结果表明,从220份复烤烟叶样品中共分离、纯化到2 963株可培养真菌。4个醇化地烟叶表面真菌数量随醇化时间的延长呈"下降-上升-下降-趋于平缓"的趋势。结合形态特征和18S rDNA序列的分析结果,共鉴定出39个属(种)的真菌。不同醇化地、不同醇化时间复烤烟叶表面真菌的种群结构及其变化规律均有差异,但根霉属真菌始终为优势菌群。     

人乳头瘤病毒疫苗的研究进展

宫颈癌是全球妇女恶性肿瘤中仅次于乳腺癌的第二种最常见的恶性肿瘤。人乳头瘤病毒(Human papillo-mavirus,HPV)与宫颈癌的发生密切相关,利用分子生物学方法构建的HPV疫苗对宫颈癌具有预防和治疗作用。目前,HPV疫苗的研究得到了迅速发展,并涌现出许多新的开发策略。本文对HPV疫苗的研究进展和前景作一综述。