大型真菌菌核生物活性研究进展

菌核是真菌菌丝在不良环境条件下经无性繁殖形成的一种致密而坚硬的组织结构,是真菌的营养贮藏和休眠器官。大型真菌的菌核富含碳水化合物、蛋白质、多磷酸盐、脂质和矿物质等营养素以及萜类、酚类、黑色素等多种生物活性成分,常作为保健食品和营养补充剂,引起越来越广泛关注。本文在概述大型真菌菌核生物活性成分的基础上,重点综述了菌核及其生物活性成分作为功能性食品原料在免疫调节、改善肠道功能、抗氧化、调节血压血糖等方面的潜在价值以及在抗肿瘤、抗炎、利尿与肾保护、抑菌等方面的最新进展。在阐述当前国内外大型真菌菌核生物活性及其功能研究现状的基础上,分析了存在的问题,提出了可能的发展方向,为大型真菌菌核生物活性的进一步开发利用提供参考。     

融合疏水蛋白在银耳中的异源表达

为改善疏水蛋白的性质,充分利用疏水蛋白和银耳的可食性优势,将平菇疏水蛋白基因hyd与去除终止密码子的hyd拼接,形成融合疏水蛋白H-H,并构建其表达载体pEGH-H-H。通过电击法将pEGH-H-H导入到根癌农杆菌EHA105中,并转化到银耳芽孢。转化子经潮霉素抗性筛选,PCR检测后,随机挑取10个转化子进行Southern blot,筛选获得高拷贝且能稳定遗传的转化子。实时荧光定量PCR分析显示5号转化子的疏水蛋白相对表达量是野生型的11.4倍。最后提取5号转化子中的融合疏水蛋白,经SDS-PAGE检测,证明融合疏水蛋白在银耳中成功异源表达。起泡性和乳化性实验表明,转化子融合疏水蛋白较平菇疏水蛋白有一定的提升。     

银耳芽孢和菌丝的转录组分析

采用RNA-Seq技术对银耳菌丝M1332及其2个单核亲本芽孢Y13、Y32进行转录组测序,通过测序共获得13.16G数据,从头(de novo)拼接后得到16 190个基因(Unigene)。利用NCBI的NR、COG、GO、KEGG等常用数据库对组装的Unigene进行同源性预测:NR数据库中的序列同源性比较表明,55.75%的Unigene比对到金黄银耳,13.35%比对到新型隐球酵母;与COG数据库进行比对得到7 203个Unigene,根据其功能大致可分为25类;有3 921个Unigene在GO数据库中注释到,分为生物学过程、细胞组分和分子功能3大类46个分支。差异表达基因的KEGG富集分析结果表明,差异基因富集在氨基糖和核酸糖的代谢、氨基酸代谢、细胞内噬等代谢通路。     

银耳芽孢总蛋白提取方法的建立

采用超声波与高压均质破碎细胞,通过显微观察细胞破碎效果、Bradford法测定蛋白含量并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,比较了三羟甲基氨基甲烷（tris(hydroxymethyl)methyl aminomethane,Tris）-饱和酚法、三氯乙酸（trichloroacetic acid,TCA）-丙酮沉淀法及Tris-饱和酚结合TCA-丙酮沉淀法提取银耳芽孢总蛋白的效果。结果表明：高压均质的细胞破碎效果优于超声波,3 种方法所得到的银耳芽孢总蛋白质量浓度分别为2.33、1.26、1.02 mg/mL,且Tris-饱和酚法经传统考马斯亮蓝染色法染色所得电泳条带亮度及清晰度均优于其他两种方法。因此,Tris-饱和酚法是进行银耳芽孢总蛋白提取的一种有效方法。