基于喜树碱生物合成的喜树内生菌及其关键酶基因克隆

以喜树内生菌为研究对象,经发酵培养后提取喜树碱及其衍生物,采用HPLC法对发酵液中喜树碱及其衍生物进行定性检测,获得能够产生喜树碱(CPT)及10-羟基喜树碱(HCPT)的喜树内生菌。通过对喜树碱生物合成途径的研究,选取10-羟基香叶醇羟化酶(G10H)、10-羟基香叶醇脱氢酶(HGO)、色氨酸脱羧酶(TDC)和异胡豆苷合酶(STR)4个关键酶基因作为研究对象,设计特异性引物,克隆目的基因。提取喜树RNA,经反转录合成cDNA,同时提取喜树内生菌DNA。分别以植物cDNA和内生菌DNA作为模板,筛选鉴定喜树碱合成途径的关键酶基因G10 H、HGO、TDC和STR并与喜树关键酶基因进行比较,初步解析喜树碱代谢途径,为喜树内生菌发酵合成喜树碱及其衍生物提供理论依据。