蜂毒肽/变构hIL-2融合蛋白的原核表达及其对宿主菌生长的影响

目的构建蜂毒肽(Melittin)与变构hIL-2融合基因原核表达质粒,并检测表达的融合蛋白对宿主菌E.coli生长的影响。方法以质粒pGEX-4T-2/Melittin-IL-2(88Arg)为模板,通过PCR定点诱变为Melittin-IL-2(88Arg,125Ala),将PCR产物和pET-15b载体分别经双酶切后连接,构建重组表达质粒pET-15b/M-IL-2(88Arg,125Ala),转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。SDS-PAGE及ELISA分析表达产物;检测诱导不同时间重组菌的A600值,绘制生长曲线,并进行活菌计数。结果PCR扩增的目的片段长542bp,重组表达质粒测序分析证明目的基因如预期突变;ELISA可检测到目的蛋白表达,但表达量较低;SDS-PAGE分析未见目的条带;诱导表达4h,重组菌A600值由0.8下降至0.6;诱导2h,活菌计数由108个/ml降至104个/ml。结论已成功构建了原核表达质粒pET-15b/M-IL-2(88Arg,125Ala),表达的融合蛋白可能对宿主菌具有毒性,从而杀伤宿主菌。     

单台阶同心圆盘辐射声场的指向性计算

作为向空气中辐射的声辐射器,弯振阶梯薄盘或矩形板在工业上有很多应用。由于计算的复杂性,以前的文献对阶梯圆盘的声场指向性未作研究。利用点声源组合的方法（Rayleigh积分）,计算了边界自由的弯振阶梯圆盘辐射声场的指向性,与弯曲振动的圆盘相比,阶梯圆盘的声场指向性得到了明显改善,理论计算结果与Gallego的实际测试图案相吻合。计算为这类辐射器的高效应用、优化设计提供了理论依据。     

一株产中性蛋白酶海洋细菌的筛选与初步鉴定

目的从海洋环境及生物中筛选高产蛋白酶菌株,初步研究其生长特性及酶学特性,为进一步研究开发提供依据。方法将从青岛黄海海域的鱼类、贝类、海水、海泥等样品中分离的细菌,用奶粉平板法和Folin-酚法筛选蛋白酶酶活性较高的菌株,测定该菌株的最佳产酶条件并初步检测其酶学特点,通过形态学、分子生物学鉴定,初步确定种属。结果菌株为革兰阴性杆菌,好氧,无芽孢,无荚膜,有鞭毛。奶粉平板上的菌落直径1～2 mm,圆形乳白色、光滑、边缘整齐、半透明。根据16S rDNA序列测定和系统发育树分析,初步鉴定该菌为Aranicola proteolyticus。该菌生长温度15～37℃,最适生长温度25℃。生长pH 5.5～9.0,最适pH 7.5。生长氯化钠浓度0～6%,最适浓度1%;所产蛋白酶的最适酶活性温度40℃,最适pH 7.5。结论菌株XF-1环境适应性较好,为中度嗜冷细菌。所产蛋白酶为中性蛋白酶。     

D2蛋白酶间接ELISA检测方法的建立

目的建立D2蛋白酶间接ELISA检测方法,为D2蛋白酶的进一步研究及应用奠定基础。方法以纯化的D2蛋白酶为抗原,免疫新西兰白兔,制备D2蛋白酶多克隆抗体,建立D2蛋白酶间接ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。结果D2蛋白酶间接ELISA检测方法的最佳反应条件为:一抗稀释度为1∶64000,二抗稀释度为1∶80000,抗原稀释度为1∶100,饱和包被浓度为1160ng/ml,封闭剂为10%胎牛血清。标准曲线的线性检测范围为18～1160ng/ml。该方法准确性、重复性良好,特异性强、敏感性高,与琼脂扩散试验检测结果的符合率为95.5%。结论已建立了D2蛋白酶间接ELISA检测方法,可用于D2蛋白酶含量的检测。     

重组蜂毒素-基因变构IL-2的纯化与生物活性

目的制备纯化重组蜂毒素-基因变构IL-2(Melittin-88ArgIL-2)嵌合蛋白,并检测其生物活性。方法将含表达载体的大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达。表达产物经离子交换层析与亲和层析进行纯化,SDS-PAGE鉴定,MTT染色法检测嵌合蛋白对Hela细胞增殖的抑制作用。结果所表达的可溶性蛋白,纯化后纯度达95%,蛋白浓度0.5g/L。纯化后的嵌合蛋白在体外能抑制Hela细胞的增殖。结论已成功地制备并纯化了重组melittin-88ArgIL-2嵌合蛋白,该蛋白具有生物活性,为中试放大和纯化工艺研究奠定了基础。     

人巨细胞病毒感染诱导U251星形胶质瘤细胞凋亡及其差异蛋白的表达

目的分析人巨细胞病毒(HCMV)感染对人星形胶质瘤细胞凋亡的影响及其细胞内差异蛋白的表达。方法以HCMV AD169株感染U251细胞,复制HCMV体外感染模型,通过RT-PCR和免疫细胞化学技术检测HCMV IE蛋白和结构蛋白pp65的表达。用AnnexinⅤ-FITC和PI染色检测细胞凋亡,通过SELDI-TOF质谱分析感染细胞内差异蛋白的表达。结果HCMV感染后6 h,U251细胞经RT-PCR可扩增出242 bp的IE基因条带,感染后3 d,细胞核内有大量IE蛋白表达,核周及细胞浆内有大量pp65蛋白表达。病毒感染后3 d,约47%的细胞产生凋亡。HCMV感染后细胞内Caspase-8和磷脂酶A2的表达明显增加。结论HCMV感染可能通过上调Caspase-8和磷脂酶A2的表达而诱导U251星形胶质瘤细胞产生凋亡损伤。     

一株产中性蛋白酶海洋细菌的筛选与初步鉴定

目的 从海洋环境及生物中筛选高产蛋白酶菌株,初步研究其生长特性及酶学特性,为进一步研究开发提供依据.方法 将从青岛黄海海域的鱼类、贝类、海水、海泥等样品中分离的细菌,用奶粉平板法和Folin-酚法筛选蛋白酶酶活性较高的菌株,测定该菌株的最佳产酶条件并初步检测其酶学特点,通过形态学、分子生物学鉴定,初步确定种属.结果 菌...     

一株具有纤维蛋白溶解活性的海单胞菌的分离和鉴定

目的对从双齿围沙蚕消化道内分离的菌株Y5进行纤维蛋白溶解活性检测及系统分类鉴定。方法用纤维蛋白平板法检测Y5的纤维蛋白溶解活性,并从形态、生理、生化、DNA(G+C)含量、脂肪酸成分、16S rRNA基因序列及系统发生分析等方面进行分类鉴定。结果菌株Y5为革兰阴性杆菌;DNA(G+C)含量为47.5%;主要脂肪酸成分为C_(18:1)ω7c,C_(16:1)ω7c,C_(16:0),C_(10:0)3-OH;16S rRNA基因序列与9种已确定的海单胞菌一致性为93%～97%;在系统发生树中与其他海单胞菌位于同一类群中;该菌株在纤维蛋白平板上显示出明显的纤维蛋白溶解活性。结论菌株Y5属于海单胞菌属。该菌株具有纤维蛋白溶解活性,有望为开发溶栓药物提供又一重要资源。     

沙蚕消化道产蛋白酶菌D2株的筛选及其酶学性质

目的从海洋生物双齿围沙蚕消化道筛选产蛋白酶菌株,并对其胞外蛋白酶的性质进行分析。方法用脱脂奶粉平板溶圈法及改良Lowry法进行产蛋白酶菌株的筛选和蛋白酶活力测定;Bradford法测定蛋白含量;UVP GDS8000型凝胶成像系统和VisionWorks、Bandscan4·03软件进行相对分子质量和纯度分析,并对酶的各项性质进行检测。结果筛选出高蛋白水解活性菌株D2,其胞外蛋白酶比活性为156·0U/mg,相对分子质量约为42000,纯度大于97%,最适作用温度60℃,最适pH为9,在pH6～10及0～55℃具有较好的稳定性。结论D2株分泌的胞外蛋白酶有望成为一种新型的海洋微生物蛋白酶资源。     

浅议基建MIS在EPC工程决算中发挥的作用

MI(S管理信息系统——Management Information System)系统,是为了方便企业更好的做出正确的决策,不断提高企业的经济效益,利用现代先进的计算机网络加强对企业信息管理的系统。MIS的主要功能是对信息进行收集、传递、存储、加工和维护。由于MIS系统在我国起步较晚,EPC模式下的基建工程管理自身存在复杂性、独立性等特征,再加上外部环境本身具有复杂性,所以到目前为止,我国的基建工程管理MIS系统还具有发展程度低,系统不够全面完善等缺点。虽然如此,我们要通过加强投资控制,使工程结算处于受控制状态等措施,不断开发完善基建MIS系统,使其发挥更大的作用。