细菌脂肪酶的结构和功能研究进展

细菌脂肪酶是一类广泛应用于工业领域的生物催化剂，具有重要的应用价值。迄今为止，已有7个细菌脂肪酶的三维结构被阐明，30个细菌脂肪酶的基因序列被测定和分析。作者综述了细菌脂肪酶的分子结构、分泌和折叠过程及其催化机制。     

酶催化大豆油酸解制备质构脂质反应条件的优化

探讨了正己烷体系中各因素对酶催化大豆油酸解制备质构脂质反应的影响,在单因素实验基础上,采用响应面设计实验,以辛酸插入率为考察指标,确定了最佳反应条件。结果表明,最优反应条件为:反应温度35.8℃,加酶量11.9%(底物的质量分数),底物摩尔比5.7∶1(辛酸/大豆油),加水量15.4%(酶的质量分数),反应时间20.4 h。在此条件下,实验测得辛酸插入率高达44.903 7%,与模型预测值45.689 8%非常吻合。     

质构脂质中脂肪酸组成的快速测定方法

研究了质构脂质中各种脂肪酸的组成及含量的气相色谱快速测定方法,确立了最佳分析条件。实验以十七烷酸甲酯为内标,采用INNOWAX毛细管色谱柱,测定质构脂质中主要脂肪酸,建立了一种简单、快速、准确的方法。各种脂肪酸甲酯的回收率在94.53%～96.02%之间(n=6),标准偏差为0.0077～0.0514,变异系数为0.70%～1.64%(n=6)。     

木聚糖酶基因XynB在毕赤酵母中的表达及酶学性质研究

目的:将来源于Thermotoga maritima的酸性耐高温木聚糖酶基因Xyn B通过密码子优化整合到毕赤酵母GS115基因组上,构建高效表达木聚糖酶Xyn B的毕赤酵母工程菌并研究其酶学性质。方法:通过分子克隆手段构建目的基因重组质粒以及二拷贝重组质粒,并将重组质粒导入毕赤酵母进行发酵表达,用DNS法测定发酵液酶活,并对酵母工程菌分泌的木聚糖酶进行一系列的酶学性质研究。结果:木聚糖酶的最适p H和温度分别为6.0和60℃;在p H4~6之间,稳定性较好,相对比酶活均在80%以上;在60℃和70℃保温2 h残留酶活分别为80%和70%左右;Co~(2+)对木聚糖酶活性有较明显的促进作用,Fe~(2+)、K~+和Zn~(2+)对酶的活性有微弱的促进作用,而Cu~(2+)、Ca~(2+)、Mg~(2+)、Mn~(2+)、Na~+对木聚糖酶活性有不同程度的抑制作用。TLC检验该木聚糖酶可以将木聚糖水解为二糖和少量单糖。通过10 L发酵罐发酵,最大酶活达到了8000 U/m L。结论:木聚糖酶在毕赤酵母中实现了高效表达,并获得了木聚糖酶的最适反应条件等一系列酶学性质,该酶性质优良适合用于饲料添加剂。     

基于BP神经网络的洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶发酵软测量建模

为建立洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia)脂肪酶发酵过程的软测量模型,运用BP神经网络对洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶的发酵过程进行软测量建模,并利用遗传算法对神经网络的初始权值和阈值进行优化,实现模型加快收敛速度,达到全局最优解效果.该模型能够比较精确地模拟菌体生长、底物消耗以及发酵产酶的过程动态,具有良好的泛化能力,说明BP神经网络结合遗传算法在洋葱伯克霍尔德茵脂肪酶发酵过程的模拟与预测中是一种高效快速的方法.     

质构脂质的研究进展

介绍了质构脂质的结构、生理功能及代谢途径,综述了目前质构脂质生产、纯化技术的研究进展,分析了其发展的制约因素并对其发展前景进行了展望.     

洋葱假单胞菌G63脂肪酶基因及其伴侣基因的克隆和同源高效表达

从油污土壤中筛选到一株脂肪酶活性较高的洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)G63.运用PCR的方法从该菌株中克隆了脂肪酶基因(lipA)及其伴侣基因(lipB).该脂肪酶基因开放式阅读框(ORF)为1092bp,编码364个氨基酸残基.经KpnⅠ/HindⅢ酶切,将其克隆到广泛宿主质粒pBBR1Tp载体上,构建成质粒pBBR1-lipAB.通过三亲杂交,在辅助质粒pRK2013的帮助下,转入原宿主菌P.cepacia G63中,构建成lipA基因同源高效表达的基因工程菌.该菌株在连续转接5次,培养45h后质粒保持率为82.6%,适用于规模化发酵生产.摇床发酵表明,工程菌在60h时酶活达到150.63 U/mL,较原始菌株提高3.6倍.     

海藻酸钠明胶协同固定化黑曲霉脂肪酶

以海藻酸钠明胶为复合载体,采用包埋法制备固定化黑曲霉脂肪酶,考察了海藻酸钠、明胶浓度等因子对固定化效果的影响,比较固定化酶和游离酶对温度、pH等条件的稳定性。结果表明,制备固定化黑曲霉脂肪酶的最优条件为:海藻酸钠、明胶浓度分别为1.25%和0.5%,CaC l2浓度为10%,给酶量为450 IU/g;固定化酶最适温度为35℃,最适pH为9.0,常见有机溶剂和金属离子对固定化酶的活力影响较小。     

酶法改良大豆油制备质构脂质的研究

研究了固定化脂肪酶催化大豆油与辛酸酸解制备质构脂质的工艺.脂肪酶筛选实验表明,在所选用的三种脂肪酶中,来自Rhizomucor miehei的固定化脂肪酶RM IM催化效果最好.以RM IM为催化剂,进一步考察了酶用量、底物摩尔比、水分添加量、反应温度、反应时间等因素对辛酸插入率的影响.结果表明:当大豆油500mg时,最佳的反应条件为:反应温度40℃,底物摩尔比6∶1(辛酸∶大豆油),固定化酶10%(底物重量百分比),水分添加量10%(酶的重量百分比),反应24h,辛酸的插入率为43%,质构脂质的脂肪酸分布最合理.     

海洋微生物Cellulophaga algicola DSM 14237木聚糖酶的分子鉴定及酶学性质

从海洋微生物中挖掘酶基因资源是获取新型工业酶的重要途径.从海洋微生物基因组资源库中发掘到一个来源于海洋微生物Cellulophaga algicola DSM 14237的木聚糖酶基因(Xyn14237).通过氨基酸序列比对和三维结构模拟分析得知Xyn14237属于糖苷水解酶第10家族.将部分截短并密码子优化后的Xyn...