CSF－1R部分基因在大肠杆菌中表达、抗融合蛋白血清制备及丝氨酸／苏氨酸磷酸化的初步研究

鼠巨噬细胞集落刺激因子－１受体（ｍＣＳＦ－１Ｒ）部分序列与质粒ｐＧＥＸ－２Ｔ谷胱苷肽转移酶（ＧＳＴ）融合，融合蛋白ＧＳＴ－ＣＤ－Ｐｓｔ（胞浆区），ＧＳＴ－ＣＴｅｒｍ（Ｃ－末端）和ＧＳＴ－ＫＩ（激酶插入区）成功地在大肠杆菌ＪＭ１０９株表达。初步结果指出：（１）ＧＳＴ－融合蛋白在体外激酶分析中可以作为底物；（２）由ＰＫＡ导致的磷酸化可能具有生理学意义；（３）ｍＣＳＦ－１Ｒ被ＣＫＩＩ磷酸化。３２Ｐ标记ＧＳＴ－ＣＤ－Ｐｓｔ的磷酸氨基酸分析证实，ｍＣＳＦ－１Ｒ的胞浆区丝氨酸上被磷酸化，已制备抗ＧＳＴ－ＣＴｅｒｍ，ＧＳＴ－ＫＩ和ＧＳＴ－ＣＤ－Ｐｓｔ兔抗体。抗血清的筛选通过野生型３２Ｄ－ＣＳＦ－１Ｒ转染子免疫沉淀进行。     

DL-丝氨酸的合成研究

DL-丝氨酸是一种重要的生化试剂和药品，其制备方法主要有前体发酵法、生物酶法、蛋白质水解提取法和化学合成法。我们采用在硝酸铜和硝酸锌的饱和溶液中浸泡过，并经高温分解产生CuO-ZnO的4A分子筛为催化剂，以乙二醇为原料制得了目的物。DL-丝氨酸的合成路线如下。     

磷脂酶反应体系中丝氨酸含量的测定

磷脂酶是一类特殊的酯键水解酶,具有磷脂酰基转移特性,能催化含羟基化合物结合到磷脂的酰基上.在水的单相体系中可以利用磷脂酶的磷脂酰基转移特性来催化卵磷脂和丝氨酸反应,可以通过测定丝氨酸量的减少量来决定丝氨酸的转化率.本研究运用茚三酮-分光光度法检测卵磷脂和丝氨酸磷脂酶反应体系中丝氨酸的含量,测定丝氨酸最大吸收波长,并对该体系中的缓冲液pH值、茚三酮用量、反应时间进行研究.结果表明:丝氨酸最大吸收波长为570nm,缓冲液pH为6.0、茚三酮用量为1.4mL、反应时间为30min时,对丝氨酸含量的测定结果更为准确.     

虾青素复方制剂的安全性及改善记忆、增强免疫作用研究

目的:探讨虾青素DHA磷脂酰丝氨酸复方的安全性及改善记忆和增强免疫力的作用。方法:选择年龄在18±2岁的学生150名,随机分为2组,干预组服用受试物,安慰组服用安慰剂,服用量均为每日2次,每次1粒,连续服用一个月。实验前后用临床记忆量表评价记忆能力,测定IL-2活性、白细胞吞噬率、NK细胞活性及T细胞亚群占比评价免疫功能。结果:干预后干预组临床记忆得分情况较试食前和安慰组实验后均有显著性提高(P 0.05),IL-2活性、白细胞吞噬率、NK细胞活性及T细胞CD4+占比、CD4+/CD8+比值较干预前及安慰组均有显著升高(P 0.05)。试食前后两组受试者的精神、睡眠、饮食、大小便状况均未见异常;血压、心率、血象、肝肾功能、尿常规、便常规、胸部透视、心电图及腹部B超检查结果均未见异常。结论:虾青素DHA磷脂酰丝氨酸复方具有改善记忆力和提高机体免疫能力的作用,且具有食用安全性。     

初诊2型糖尿病患者血清Vaspin检测及其临床价值

目的:探讨内脏脂肪源性丝氨酸蛋白酶抑制剂(visceral adipose tissue derived serine protease inhibitor,Vaspin)检测在初诊2型糖尿病患者中的临床意义。方法:选取初诊2型糖尿病患者116例为T2DM组和健康体检者46例为对照组,检测血清Vaspin水平,并分析Vaspin水平与体重指数(BMI)、腰臀比(WHR)、体脂百分比(BFP)、空腹胰岛素(Fins)及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)之间的关系。结果:T2DM组血清Vaspin水平为(1.05±0.27)ng/mL,低于对照组的(1.14±0.29)ng/mL,但差异无统计学意义(P>0.05);T2DM组的超重/肥胖(OB)患者血清Vaspin水平为(0.73±0.19)ng/mL,低于正常体重(NW)的(1.37±0.26)ng/mL(P<0.001);T2DM组的男性患者血清Vaspin水平为(0.87±0.25)ng/mL,低于女性患者的(1.23±0.29)ng/mL(P<0.001);Pearson相关分析显示,血清Vaspin水平与BMI(r=-0.312,P=0.027)、WHR(r=-0.253,P=0.007)、BFP(r=-0.419,P=0.011)、Fins(r=-0.295,P=0.017)和HOMA-IR(r=-0.175,P=0.046)呈负相关。结论:Vaspin水平与胰岛素抵抗和肥胖密切相关,或参与了胰岛素抵抗及2型糖尿病发生发展。     

食品安全月度报告2010 十一

1 18种食品添加剂扩大使用范围 卫生部今天发布公告称，根据《中华人民共和国食品安全法》相关规定并经过审核，批准葡萄皮红等18种食品添加剂扩大使用范围、使用量。卫生部同时发布公告表示，已批准蔗糖聚酯、玉米低聚肽粉、磷脂酰丝氨酸等3种物品为新资源食品，并强调新资源食品生产经营应符合有关法律、法规、标准规定。     

丝氨酸蛋白酶有机小分子荧光探针的研究进展

丝氨酸蛋白酶与人类生命健康息息相关。人体内丝氨酸蛋白酶水平的异常会引起疾病,危害人类生命安全。丝氨酸蛋白酶荧光探针对于检测体内和体外的丝氨酸蛋白酶数量、活性动态以及临床疾病的治疗有重要意义。因此,重点回顾了近5年来文献中报道的性能优异的常见丝氨酸蛋白酶荧光探针,以各种丝氨酸蛋白酶的显色标记为出发点,总结了目前丝氨酸蛋白酶的荧光探针的合成和性能研究,旨在为丝氨酸蛋白酶的荧光探针设计策略与检测应用提供理论参考。     

L-丝氨酸发酵生产菌发酵条件的优化

通过单因子实验对产L-丝氨酸羟甲基转移酶的基因工程菌发酵生产L-丝氨酸的培养基组成及培养条件进行了研究,得到了优化后的培养基及培养条件.经过优化后的培养基组成为味精 25 g/L,玉米浆 40 g/L,K2HPO4 1.0 g/L,MgSO4 1.0 g/L.其最佳培养条件为500 mL三角瓶装液体积50 mL,摇床转速220 r/min,培养温度37 ℃,pH值 7.5,种子培养时间10 h,发酵培养时间22 h.在上述最佳条件下,发酵液中L-丝氨酸的质量浓度为25.97 g/L,比优化前提高了45.1%.     

L-丝氨酸产生菌的分离筛选及发酵条件

在含50mL／L的甲醇、5g／L的甘氨酸的基本培养基平板上，从土壤中分离出130多株细菌，测定了它们利用甘氨酸生产L-丝氨酸的能力，获得了一株产L-丝氨酸较好的菌株A3，L-丝氨酸产量最高为1．4g／L，分类学鉴定为微球菌科(Micrococcaceae)，对菌株A3利用甘氨酸发酵生产L-丝氨酸的发酵条件进行了初步研究，包括甘氨酸和甲醇添加量，不同碳源、氮源，初始pH值以及发酵时间对产酸的影响．结果表明，菌株A3在不添加甲醇、只以甘氨酸为惟一碳源的发酵培养基中也能产L-丝氨酸，培养基中较高质量浓度的甘氨酸存在对L-丝氨酸生产是必需的．添加葡萄糖、甘油等外源碳源对菌体生长有利但不利于L-丝氨酸的生产。