抗葡聚糖单克隆抗体制备的研究

本文对抗葡聚糖单克隆抗体制备进行研究,采用新的载体偶联技术和免疫方法,已成功获得4株抗葡聚糖单抗杂交瘤,并证明是葡聚糖特异性的.为研制快速、定量准确的葡聚糖免疫学检测国产试剂盒打下基础.     

急非淋M2型白血病单克隆抗体与高三尖杉酯碱偶合物的制备…

用羟基磷灰石，ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ和Ｓｅｐｈａｃｒｙ１ Ｓ－３００纯化了抗急非淋Ｍ２型白血病ＭｃＡｂ１Ｄ１，纯度为９９．９％，用直接交联方法将ＭｃＡｂ１Ｄ１与ＨＨＴ偶联，克分子比１：４０。该偶合物保持了抗体和药物活性，对急非淋Ｍ２型白血病靶细胞有选择性杀伤作用，而对急非淋Ｍ１型白血病细胞的Ｈｅｌａ细胞无明显杀伤作用。     

~(131)I-Lym-2单克隆抗体实验研究

不同浓度的~(131)I-Lym-2 MoAb与ARH-77和CEM细胞进行结合试验,结果表明:随浓度增大,结合值均升高;实验组裸鼠模型9只获得动力学数据。实验组和对照组注射~(131)I-Lym-2 MoAb后144h解剖,进行生物学分布(％D/g)测定,实验组肿瘤为16.88±12.64,肌肉为0.72±0.56。结果表明,~(131)I-131-Lym-2MoAb对临床B细胞淋巴瘤的放射免疫分析、显像有良好的效果。     

单克隆抗体M1,R1对材料表面吸附FG的作用的研究

在血液与生物材料的相互作用中，血浆蛋白特别是纤维蛋白原的吸附起着重要的作用。     

应用重组HBcAg与其单克隆抗体配对检测抗—HBc

抗—HBc单克隆抗体经纯化、酶标后，用作包被抗体和酶标抗体，重组工程菌表达的HBcAg作为联结抗原，选择最佳配对单克隆抗体，用ELISA法检测临床标本593份，其中与Abbott试剂盒对照检测91份，符合率达99．09％，与国内的ELISA试剂盒对照检测502份，符合率达98.1％，证明该单克隆抗体ELISA试剂盒检测抗—HBc的特异性、灵敏度、精确性均属国内领先水平。     

羊布鲁菌O链M抗原提纯及其单克隆抗体的研制

目的研制羊布鲁菌O链M纯化抗原及其单克隆抗体。方法采用冷酚法提纯羊布鲁菌16M的O链抗原,并经琼脂糖凝胶免疫扩散和SDS-PAGE鉴定,用灭活的该抗原免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,并进行鉴定。结果建立3株分泌单克隆抗体的细胞株2D10、3C6和1E10,ELISA效价分别为1.380、1.109和1.048,与大肠杆菌0:157、小肠结肠炎耶尔森菌0:9、鼠伤寒沙门菌和猪胸膜肺炎放线杆菌均无交叉反应。3C6和1E10与牛布鲁菌544A发生交叉反应,2D10的亲和常数达5.30×10~7M~(-1)。结论已制备出纯化的羊布鲁菌O链M抗原及其单抗。     

抗DNA单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其抗体的鉴定

目的制备抗DNA单克隆抗体,用以建立特异、灵敏、简便的外源性DNA残留量测定方法。方法将小牛胸腺DNA与阳离子化的牛血清白蛋白通过Mannich反应连接成为完全抗原,免疫BALB/c小鼠得到的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得稳定分泌抗DNA单抗的杂交瘤细胞株,对抗体进行纯化、浓缩及鉴定。结果得到3株可稳定分泌抗DNA单抗的杂交瘤细胞株,单抗的ELISA间接效价分别为1∶4×103、1∶8×104和1∶1×103;亚型分别为IgM/κ、IgM/λ和IgM/κ;亲和力常数分别为3.96×108、4.04×109和1.26×108L/mol;3株细胞分泌的单抗与ctDNA、DH5αDNA、GS115DNA和H.S.DNA均有较高的结合能力,而对RNA、BSA和酪蛋白结合较弱或不能结合;3株细胞分泌的单抗识别3个不同的抗原表位;可检出4ng/ml以上的DNA。结论成功制备了3株细胞分泌的抗DNA单抗,为外源性DNA残留量免疫测定方法的深入研究奠定了基础。     

抗人IgG-抗HRP双特异性单克隆抗体的研制及初步应用

用8－AG（8－氮杂鸟嘌呤）驯化的HRP－MCAb（抗辣根过氧化物酶单克隆抗体）杂交瘤细胞HAT（次黄嘌呤氨基喋呤胸苷）敏感株与人IgG免疫的BALB／c小鼠脾细胞进行二次融合，获得5株能稳定分泌抗人IgG－抗HRP的BsMcAb（双特异性单克隆抗体）杂交－杂交癌细胞，用其混合腹水经HRP亲和层析纯化的BsMcAb制备BsMcAbPAP（双特异性单抗过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物）试剂代替丙肝诊断试剂盒中酶标二抗，比较结果初步表明两者差异无显著意义，将为IgG的检测提供有用试剂。     

抗rHu-IFN-αMcAb亲和常数的测定

采用ELISA间接法检测抗原－抗体反应系统中游离抗体量的方法，对本实验室制备的5系抗rHu－IFN－αMcAb进行了亲和力测定，获得比较准确的McAb亲和常数。     

重组G145R HBsAg亲和纯化方法的建立及其应用

目的建立重组乙型肝炎病毒G145R变异HBsAg抗体亲和纯化方法。方法用抗-HBs单克隆抗体(D12- McAb)制备亲和层析胶,对2A8细胞(分泌G145R变异HBsAg)培养上清盐析物进行亲和纯化。采用SDS-PAGE、Western blot及ELISA,对纯化产物的纯度、特异性、含量和回收率进行鉴定,并与同法纯化的HBsAg阳性血清及r-wHBsAg提取物进行比较。结果D12-McAb对重组真核表达G145R变异HBsAg、HBsAg阳性血清及r-wHBsAS三者具有相似的亲和性,产物纯度分别为90.3%、95.2%和93.1%,回收率分别为43.3%、72.0%和66.4%。结论已成功地建立了重组G145R变异HBsAg抗体亲和纯化方法,为G145R变异以及其他HBV免疫逃逸变异感染的深入研究奠定了重要的技术基础。