哈尔滨地区新城疫病毒的分离鉴定及部分生物学特性研究

2012年4月~2014年4月,从哈尔滨市18个地区鸡场中疑似新城疫(ND)发病鸡群体内分离到6株具有血凝活性的病毒,经血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)和电镜观察证实了6株病毒为新城疫病毒(NDV)。经蚀斑纯化后进行生物学特性的研究显示,其鸡胚平均死亡时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)分别为37.2~60.8 h、1.71~1.80,说明该病毒属于NDV强毒株或中强毒株。     

新城疫强毒株F蛋白裂解位点串联基因的构建及其原核表达

目的构建鸡新城疫(ND)强毒株多裂解位点串联基因表达载体,为建立NDV强弱毒株的ELISA鉴别方法奠定基础。方法人工合成一段包含4种不同NDV强毒株裂解位点的基因Fe(F prote in multitude epi-position),其中各裂解位点之间用Linker(GGGGS)使其串联,然后进行2倍和4倍拷贝,并定向克隆至原核表达质粒pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a(+)/2Fe和pET-28a(+)/4Fe,进行表达和Western blot鉴定。结果构建的原核表达重组质粒pET-28a(+)/2Fe和pET-28 a(+)/4Fe测序正确。Western blot检测结果表明,2Fe、4Fe蛋白均与新城疫强毒株F48E9阳性血清呈阳性反应,而与新城疫弱毒株V4阳性血清呈阴性反应。结论已成功构建NDV强毒株F蛋白裂解位点串联基因表达载体,为建立NDV强弱毒株的ELISA鉴别方法提供理论依据。     

醛化鸡红细胞吸附释放结合NP-40法纯化新城疫病毒蛋白

采用醛化鸡红细胞吸附释放结合NP-40法纯化鸡胚尿囊液中的新城疫病毒蛋白.通过收集纯化的新城疫病毒,并测定新城疫病毒血凝效价和进行9%SDS-PAGE电泳,以测定新城疫病毒蛋白的纯度.用该方法纯化的新城疫病毒血凝效价为1∶256,进行9%SDS-PAGE电泳后,发现得到的新城疫病毒蛋白不含鸡胚尿囊液蛋白,是纯度较高的新城疫病毒蛋白.以上结果表明,醛化鸡红细胞吸附释放法结合NP-40法是一种经济实用、操作简便,并有较高纯化效率的方法.     

基于多层结构模型的生物信息分析平台研究*

针对生物信息分析平台的构建,给出一种复合C/S、B/S的多层体系结构模型--BIOCMSM,并以构建新城疫病毒(NDV)生物信息分析平台为例,研究了该多层结构模型的实现过程.实验证明,BIOCMSM较好地解决了生物数据更新、数据集成、应用集成等问题.     

新城疫病毒自然宿主细胞膜受体的鉴定

目的鉴定鸡源副黏病毒F48E9株的自然宿主细胞膜受体。方法采用蛋白膜提取试剂盒提取鸡胚成纤维细胞膜蛋白,用改进的间接ELISA方法检测鸡源副黏病毒分离株F48E9与细胞膜的结合活性,利用病毒铺覆蛋白印迹技术(VOPBA)鉴定新城疫病毒(NDV)的自然宿主细胞膜受体。结果NDV与鸡胚成纤维细胞膜有很强的结合力,在转印鸡胚成纤维细胞膜蛋白的PVDF膜上有几条明显的疑似受体条带,相对分子质量介于35000～60000之间。结论初步鉴定了NDV自然宿主细胞膜的受体,其疑似受体蛋白的性质及在新城疫病毒致病中的作用尚有待进一步研究。     

抑制新城疫病毒繁殖的九肽及其突变体基因的克隆与原核表达

目的克隆并表达抑制新城疫病毒(NDV)繁殖的九肽(Nonapeptide)及其突变体基因。方法设计并合成Non-apeptide2串联体及其突变体基因,克隆于质粒pUC18,经酶切回收目的基因,与经相同酶切的表达载体pGEX-4T-1连接,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性菌落,抽提质粒进行鉴定。IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果重组表达质粒经双酶切、PCR及测序鉴定,证明构建正确。阳性重组菌的诱导表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约29000处可见一明显条带,与理论值相符。Nonapeptide 2及其突变体蛋白的表达量分别占菌体总蛋白的41%和37%。Western blot结果显示两种蛋白均具有良好的反应原性。结论已成功克隆并表达了抗NDV繁殖的Nonapeptide及其突变体基因。     

几种常见禽病通过禽肉贸易传播的风险分析

国际间的禽肉贸易给各种禽病的传播与扩散带来了新的风险。对多种常见的禽病通过国际间禽肉贸易传播的风险作了分析。现有的研究显示,高致病性禽流感、新城疫以及传染性法氏囊病能够通过禽肉传播。其他的一些禽病尽管尚无证据显示能够通过禽肉传播,但在禽肉加工过程中实施严格的卫生措施仍是十分必要的。     

新城疫病毒一步法RT-PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)一步法RT-PCR检测方法,并进行验证及初步应用。方法根据NDV F基因序列,设计合成了1对特异性引物,建立一步法RT-PCR检测方法,并验证其特异性及敏感性;应用建立的方法对23份疑似新城疫(Newcastle disease,ND)病料进行检测,并与血凝及血凝抑制试验检测结果进行比对。结果建立的一步法RT-PCR同时检测NDV、传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)和禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)H9亚型,仅NDV为阳性,IBDV和AIV H9均为阴性;该方法最低可检出约4 pg的NDV RNA;23份疑似ND病料,一步法RT-PCR检出11份阳性,血凝及血凝抑制试验检出13份阳性,两种方法的阳性符合率为85%。结论建立了NDV一步法RT-PCR检测方法,该方法特异性良好,敏感度较高,用时较短,可从分子水平上对NDV进行早期快速诊断和流行病学调查。     

湖南省鸽新城疫病毒的分离与鉴定

用SPF鸡胚从疑似鸽ND病鸽群中分离到一株病毒,根据HA、HI及病毒中和试验结果表明该分离毒为鸽NDV。其生物学特性ICPI为1.38,IVPI为1.0,MDT为99.8h,表现出与鸡NDV不同的生物学特性。     

非典型新城疫的五种临床表现类型及防治

<正>近年来,非典型新城疫呈现大范围散发和地方性流行,给家禽养殖业造成巨大的经济损失。该病主要发生于已经进行了新城疫接种、但抗体水平不高或不均衡的鸡群;有新城疫母源抗体的雏鸡或常有本病发生但饲养管理水平较差的鸡群也易发生。实际临床诊断过程中,发病鸡群主要以神经症状为主,死亡率不高,患病鸡表现轻微或没有呼吸道症状,拉黄绿色成形粪便,成鸡表现产蛋下降,蛋壳颜色变浅,白壳蛋、无壳蛋及软皮蛋增多,采食量轻微下降或