光甘草定包合物对中波紫外线诱导小鼠皮肤光损伤的保护作用

目的 以环糊精(cyclodextrin,CD)为载体制备光甘草定(glabridin,GL)包合物,探讨光甘草定环糊精包合物(GL/CD)对中波紫外线(middlewave ultraviolet radiation,UVB)诱导的小鼠皮肤光损伤的保护作用。方法 制备GL/CD,进行包封率和透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)表征分析,通过UVB照射小鼠皮肤光损伤模型,在小鼠背部皮肤涂抹不同浓度的GL及GL/CD,通过测试经皮水分散失(trans-epidermal water loss,TEWL)、皮肤组织生化指标、免疫组化染色研究其对光损伤后皮肤屏障保护的效果。结果 GL/CD的包封率为84.21%±1.36%,平均粒径为(533.1±42.8) nm,Zeta电位为(-30.24±1.54) mV,表明包合物在水体系中分散为纳米颗粒且稳定性良好。TEM结果显示GL/CD分散在水体系后主要呈现为球形胶束状态。小鼠皮肤黑色素染色结果显示GL/CD对黑色素生成的抑制效果优于GL。TEWL测试结果显示GL/CD显著降低小鼠经皮失水率,且效果比GL好。苏木精-伊红染色结果显示GL经CD包合之后能显著增强其抗炎作用,降低UVB照射引起的表皮增厚和炎症浸润。酶联免疫吸附实验结果显示GL经CD包合之后能显著提升抗氧化酶包括超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的生物合成,降低活性氧及促炎细胞因子包括白细胞介素1、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α在体内的表达水平。结论 GL经过CD的包合,有效提升了其在UVB诱导的皮肤损伤方面的保护作用。     

光甘草定/环糊精固体包合物的制备和性质

采用分子对接和相溶解度结合的方法研究不同环糊精（cyclodextrin,CD）与光甘草定（glabridin,GLD）之间的包合能力,筛选出适宜包合GLD的CD;制备GLD/CD固体包合物,考察不同干燥方法、不同投料比对固体包合物的包合率、载药量和溶解度的影响;通过扫描电子显微镜、差示扫描量热法、傅里叶变换红外光谱法和分子对接技术分别对包合物的形貌、包合物中GLD的存在形式、GLD与CD的相互作用和空间构象进行研究;采用体外溶出实验考察GLD在包合前后溶出特性的变化;采用噻唑蓝法比较GLD及其包合物对人肝癌细胞株（HepG-2）细胞增殖的抑制作用。结果表明：多种CD都能与GLD形成物质的量比1∶1的包合物,其中2-磺丁基-β-环糊精（2-sulfobutyl-β-cyclodextrins,2-SBE-β-CD）包合GLD的能力优于其他CD及其衍生物;不同制备方法制备的GLD/2-SBE-β-CD固体包合物的包合率和载药量均无显著差异,但包合物的水溶性有一定差异。适当提高GLD与2-SBE-β-CD物质的量比,包合率虽有一定程度下降,但可显著提高载药量。GLD与2-SBE-β-CD物质的量比为1.5∶1时,冷冻干燥法制备的GLD/2-SBE-β-CD固体包合物的包合率和载药量分别为86.09%和22.39%。GLD与2-SBE-β-CD物质的量比为1∶1时,冷冻干燥法、喷雾干燥法、捏合法制得的包合物的饱和溶解度均大于83 mg/mL。不同制备方法得到的GLD/2-SBE-β-CD包合物形貌差异显著,但GLD在GLD/2-SBE-β-CD包合物中均以无定形非晶体结构存在。不同制备方法得到的GLD/2-SBE-β-CD包合物的溶出特性无显著差异;GLD/2-SBE-β-CD包合物在胃、肠液中的累积溶出率显著高于GLD及GLD/2-SBE-β-CD物理混合物;与GLD/H2O组相比,GLD/2-SBE-β-CD包合物对HepG-2细胞的抗增殖活性有显著提高;本研究结果证实了2-SBE-β-CD作为GLD载体的优越性,有望拓宽GLD在食品、保健品等领域的应用。     

响应面法优化提取光甘草定工艺的研究

研究光果甘草中光甘草定的提取工艺。在单因素实验的基础上,以100%工业甲醇为提取溶剂,选定料液比、提取时间和提取温度3个因素的3个水平进行中心组合实验,建立光甘草定得率和纯度的二次回归方程,其决定系数分别为98.08%和91.21%。通过响应面及岭嵴分析得到优化的提取工艺条件是:料液比1:38.5g/mL、提取时间64min、提取温度50.4℃,在该条件下光甘草定得率预测值为0.52%,验证值为0.51%。     

光甘草定脂质体制备及其质量评价

以光甘草定为原料,采用复凝聚法制备光甘草定脂质体,以包封率和粒度为指标,采用正交试验设计优化光甘草定脂质体的制备工艺;并对光甘草定脂质体的粒径分布、体外释药特性和稳定性进行了研究。结果表明:光甘草定脂质体制备的最佳条件为卵磷脂与胆固醇质量比4:1、超声波乳化时间40 min、光甘草定-丙二醇液质量浓度8 g/L,此条件下制得的脂质体粒径分布均匀,粒径为0.1~1.2 μm的比例为84.67%,包封率和粒度综合评分可高达78以上。光甘草定脂质体前120 min的体外释药性优于光甘草定粉末,3个月时光甘草定质量分数仍达38.5%,保留率为96.25%。复凝聚法制备光甘草定脂质体工艺简单,产品稳定性好。     

光甘草定对小鼠银屑病模型治疗作用的初步研究

为探索光甘草定(PT)在治疗银屑病方面的作用,通过建立咪喹莫特乳剂(IMQ)诱导的小鼠银屑病耳廓肿胀模型和背部皮肤破损模型,再根据PT在人体皮肤用药标准设置不同含量进行给药。结果表明,在PT含量分别为30和15 g/kg时对小鼠耳廓红肿程度具有明显抑制效果,抑制率高达68.37%和56.98%。同时,对小鼠背部皮肤红肿、鳞屑、肿胀程度进行银屑病面积和严重程度指数(Psoriasis area severityindex,PAIS)评分,绘制趋势线以观察各组小鼠皮损的变化情况,发现PT含量分别为30和15 g/kg时对小鼠皮损具有明显的抑制效果。     

Preparative Purification of the Major Flavonoid Glabridin from Licorice Roots by Solid Phase Extraction and Preparative High Performance Liquid Chromatography

This study investigated a novel, simple, and economical method for the preparation and purification of glabridin from licorice roots. Glabridin was initially obtained from ethyl acetate extraction of licorice, followed by using solid phase extraction (SPE) and preparative high performance liquid chromatography (HPLC). The content of glabridin increased from 0.23% to 35.2% after SPE, and then a 16 mg product at a high purity of over 95% was obtained from 10 g licorice roots after purification by preparative HPLC. The purity was assessed by analytical HPLC, and the purified compound was characterized by LC-MS/MS and ¹H NMR.     

光甘草定微胶囊包合物制备

研究以明胶和阿拉伯胶为壁材,采用复凝聚法研究了光甘草定微胶囊的制备工艺,探讨了芯壁质量比、增溶剂使用量、乳液均质时间和搅拌速度的影响,通过正交试验确定最佳工艺条件为芯壁比为2∶1,增溶剂为0.5%,均质时间为10 min,搅拌速度为750 r/min。通过本工艺制备得到的光甘草定微胶囊包裹率可达40%,粒径分布均匀(平均粒径3.91μm),将其喷雾干燥后得到光甘草定微胶囊粉末为淡黄色,无刺激气味,可溶于丙二醇等有机溶剂。包裹后的光甘草定微胶囊,减淡了原有的棕黑颜色和刺鼻气味,可很好地用作化妆品美白添加剂。     

Extraction of Glycyrrhizic Acid and Glabridin from Licorice

The extraction and separation conditions of glycyrrhizic acid and glabridin from licorice were investigated. By changing the different extraction solvents, procedures, times and temperature, the optimum extraction condition was established: the used of ethanol/water (30:70, v/v) as an extraction solvent, and 60 min dipping time under 50°C. The extracts of licorice were separated and determined by reversed-phase high performance liquid chromatography with a methanol/water (70:30, v/v, containing 1% acetic acid) as the mobile phase. Under the optimum extraction condition, 2.39 mg/g of glycyrrhizic acid and 0.92 mg/g of glabridin were extracted from Chinese licorice and the recoveries were 89.7% and 72.5% respectively.