抑肽酶的提取及活性研究

以牛肺为原料,经酸沉淀,胰蛋白酶亲和层析,分离提纯抑肽酶。并建立了二种抑肽酶活性测定方法(UKIU法及PKAIU法)。提纯后抑肽酶纯度提高88.3倍。得率为96.8％。活性抑制试验表明,该抑肽酶可抑制PKA对前激肽释放酶(PK)的作用,以及尿激酶对纤溶酶原的作用,对纤溶酶原的活化及纤溶酶活性也有较强抑制作用。     

纤维蛋白凝胶的研制

以血浆蛋白冷沉淀为原料制备粘合蛋白，富含纤维蛋白原、调理素蛋白、凝血因子XⅢ，其可凝固蛋白大于75mg／ml，蛋白含量大于100mg／ml；主要以CohnⅢ为原料．采用组织凝血活酶和Ca激活制备高效价凝血酶，成品放价达400～500u／ml；以牛肺为原料，经特异沉淀和亲和层析制备抑肽酶，成品效价达10000UKIV／ml以上．以粘合蛋白、凝血酶、抑肽酶组成的纤维蛋白凝胶，其质量基本达到国际同类产品先进水平。动物试验和初步临床观察表明．凝胶具有止血、粘合等功能，尤其是在常规方法难以处理的部位更加有效。     

磁性亲合分离法纯化胰蛋白酶

采用壳聚糖包埋纳米钡铁氧体,经环氧氯丙烷交联制得磁性亲和载体,应用激光粒度分析仪和振动样品磁性测定仪对磁性亲和载体进行表征,动态激光散射分析结果表明,磁性粒子的平均直径为401纳米.磁性测量表明,超细磁粉具有较高的磁性.然后利用碳二酰亚胺活化法,将抑肽酶与此微粒共价结合得到磁性亲和吸附剂,应用于胰蛋白酶的亲和纯化.论文详细讨论胰蛋白酶亲和纯化条件,将磁性亲合分离法成功地应用于亲和纯化胰蛋白酶.     

抑肽酶对体外循环手术患者的影响

目的探讨体外循环手术患者应用抑肽酶的临床效果及安全性。方法以中国食品及药品监督局下令暂停抑肽酶在心脏外科临床使用的日期（2007年12月19日）为分界点,回顾性分析停药前后1年的患者临床资料。选择2006年12月19日至2007年12月18日行体外循环手术患者为抑肽酶组（n=360）,在术中均应用抑肽酶;2007年12月19日至2008年12月18日行体外循环手术患者为对照组（n=360）,在术中均未使用抑肽酶。对2组患者体外循环、主动脉阻断时间,术后出血量、输血量、呼吸机使用时间、术后24 h氧分压指数,二次开胸、术后肾功能不全、术后低心排出量综合征、延迟拔管、术后严重肺部感染等发生率及住院病死率进行比较。结果 2组患者手术种类、体外循环时间、主动脉阻断时间,肾功能不全、低心排出量综合征发生率,住院病死率的比较差异均无统计学意义（均P〉0.05）。抑肽酶组术后出血量、输血量、呼吸机使用时间,二次开胸、延迟拔管、严重肺部感染发生率均低于对照组（均P〈0.05）;术后24 h氧分压指数高于对照组（P〈0.05）。结论体外循环手术应用抑肽酶是安全有效的,可明显减少术后出血量及输血量,且对肺功能有一定的保护作用,并没有增加病死率及并发症发生率。所以,在中国是否应该停用抑肽酶还需要国内做一些大样本、多中心的临床研究来验证。     

固定化胰蛋白酶制备条件的优化及其在纯化抑肽酶中的应用

目的优化固定化胰蛋白酶的制备条件,并探讨固定化胰蛋白酶在纯化抑肽酶中的应用。方法以介孔分子筛SBA-15作为载体,戊二醛作为交联剂,对胰蛋白酶进行固定化,并对固定化条件进行优化。将优化条件制备的固定化胰蛋白酶作为亲和吸附剂,对抑肽酶进行分离纯化。结果固定化胰蛋白酶制备的最适条件为:戊二醛浓度0.8%,加酶量3.0mg,反应温度35℃,反应时间3h。以此条件制备的固定化胰蛋白酶活力可达15.6U/mg。以此酶作为亲和吸附剂纯化抑肽酶,纯化倍数可达420倍以上,活性回收率超过80%。结论优化了固定化胰蛋白酶的制备条件,以此酶作为亲和吸附剂用于抑肽酶的分离纯化,效果较好。     

琼脂糖凝胶提取纯化抑肽酶的研究

采用琼脂糖凝胶为载体,共价偶联牛胰蛋白酶,制成抑肽酶亲和吸附剂,将其用于亲和层析牛肺提取液,分离纯化高比活抑肽酶。通过实验研究,计算抑肽酶抑制比活单位(BAEE单位/mg胰蛋白酶)为79000,酶活性回收率76.63%。该工艺具有操作简便、收率高、产品质量好、污染低等优点,适于工业化,有一定的工业应用前景。     

抑肽酶对实验性慢性肝损伤大鼠肝细胞增殖能力的影响

目的:探讨抑肽酶对实验性慢性肝损伤大鼠肝细胞增殖能力的影响,为抑肽酶对慢性肝损伤的保护作用研究提供理论依据.方法:Wistar大鼠随机分为正常对照组、四氯化碳(CCl4)模型组、抑肽酶小剂量组、抑肽酶中剂量组、抑肽酶大剂量组和促肝细胞生长素组,采用免疫组织化学方法检测各组增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数和形态学表现.结果:正常对照组阳性细胞数为(4±2)个/视野,模型组阳性细胞数为(5±2)个/视野,抑肽酶小、中和大剂量组阳性细胞个数分别为(39±13)个/视野、(49±14)个/视野和(57±12)个/视野,促肝细胞生长素组中阳性细胞个数为(26±8)个/视野.抑肽酶各剂量组与模型组相比,阳性细胞数目均显著增加(P<0.05);随着抑肽酶剂量的增加,阳性细胞数目也增加.抑肽酶各剂量组阳性细胞数多于促肝细胞生长素组(P<0.05).抑肽酶各剂量组PCNA阳性细胞增殖活跃,以抑肽酶大剂量组表现明显.结论:抑肽酶能够促进慢性肝损伤大鼠肝细胞增殖,其作用随着剂量的增加而增强.     

动态

营养学家新使命：看基因下菜碟；FDA批准Fougera的乌倍他索非专利药上市；根据嗅觉测出早老性痴呆；莪术油注射液、抑肽酶注射剂：可引起严重不良反应。     

交联壳聚糖微球纯化抑肽酶研究

采用反相悬浮法制备交联壳聚糖微球,共价偶联胰蛋白酶,制成抑肽酶亲和吸附剂,将其直接亲和层析牛肺粗提液,制备高比活抑肽酶。结果表明,制备的亲和吸附剂单位活力1270KIU·g-1,蛋白质偶联率52.4%,酶活性回收率50.8%。制备的抑肽酶比活力达5650KIU·mg-1,并且该吸附剂具有非特异性吸附小、能反复使用、机械强度高、活化简单、价格低廉等优点。