生物素标记的布鲁菌多克隆抗体的制备

目的制备生物素标记的兔抗牛种布鲁菌544A多克隆抗体,并进行鉴定。方法复苏并扩大培养牛种布鲁菌544A,灭活后制备灭活疫苗,经背部皮下多点注射免疫新西兰大白兔,5次免疫后,经心脏采血,分离血清,采用硫酸铵盐析法对血清中的多克隆抗体进行粗提,再通过蛋白亲和柱层析法对抗体进一步纯化,利用SDS-PAGE分析抗体的纯度,间接ELISA法检测抗体的效价和特异性,Bradford法检测抗体的蛋白含量,并利用生物素对抗体进行标记。结果制备的牛种布鲁菌544A的兔多克隆抗体纯度较高,效价为1:256 000,特异性较好,蛋白含量为2.83 mg/ml,每摩尔蛋白中标记的生物素摩尔数为3.09。结论成功制备了生物素标记的牛种布鲁菌多克隆抗体,为下一步研制牛种布鲁菌免疫检测试剂盒奠定了物质基础。     

科尔沁牛中性粒细胞防御素5的原核表达及纯化

目的原核表达科尔沁牛中性粒细胞防御素5(bovine neutrophilβ-defensin 5,BNBD5),并进行纯化。方法用Trizol试剂提取牛外周血中性粒细胞总RNA,RT-PCR法扩增BNBD5的cDNA序列,与pMD18-T载体连接,构建重组克隆质粒pMD18-T-BNBD5,并进行测序,应用DNA Star生物分析软件对科尔沁牛BNBD5与其他物种(绵羊、山羊、驯鹿、家鼠、人类、鳜鱼、中华蜜蜂)β防御素的核苷酸序列进行同源性比较及进化树分析;对科尔沁牛与其他品种牛(新疆荷斯坦牛、印度水牛、荷兰弗里斯兰牛)β防御素的BNBD5核苷酸序列进行进行同源性比较及进化树分析;将构建正确的重组克隆质粒pMD18-T-BNBD5亚克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达质粒pET-30a-BNBD5,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG诱导表达后,利用Ni离子亲和柱纯化,SDS-PAGE鉴定表达产物和纯化产物。结果通过PCR扩增获得了195 bp的BNBD5全长cDNA序列,为一个完整的开放阅读框(ORF),与GenBank中登录的BNBD5编码区序列(AJ278799)相似性达93.4%,推导该序列编码45个氨基酸残基,并含有防御素的特征性分子结构,即在特定位置上有6个保守的半胱氨酸残基;共有13处碱基出现突变,导致其推导的氨基酸序列出现8处变异,但6个保守型半胱氨酸位点均未出现变异。与其他物种的BNBD5核苷酸序列同源性分析表明,科尔沁牛与山羊、绵羊同源性最高,达80%以上;与中华蜜蜂同源性最低,在10%以下。与其他品种牛的BNBD5核苷酸序列同源性分析表明,科尔沁牛与新疆荷斯坦牛同源性最高,达90%以上;与荷兰弗里斯牛的同源性最低,约66%。质粒pET-30a-BNBD5经PCR及单双酶切鉴定证明构建正确,表达及纯化蛋白相对分子质量约10 000,主要以可溶性形式表达,表达量占菌体总蛋白的25.1%,纯化产物含量达2.15 mg/ml。结论成功表达并纯化了科尔沁牛BNBD5。     

龙血素A和龙血素B的酶联免疫检测方法的建立

建立了龙血素A和龙血素B间接竞争酶联免疫吸附分析方法,并用于测定龙血素A和龙血素B的含量。分别合成龙血素A和龙血素B人工抗原制备其多克隆抗体,建立二者间接竞争酶联免疫吸附分析方法并评估其分析性能。结果表明:抗龙血素A血清和抗龙血素B血清的效价分别达到8 000和30 000;龙血素A和龙血素B的最低检测限分别为3.9ng·mL-1和26.1ng·mL-1,批内精密度分别为CV≤10.7%和CV≤9.9%,批间精密度分别为CV≤11.5%和CV≤12.3%,回收率分别为87.4%~110.8%和109.8%~113.5%,与各自的6种类似物的交叉反应率最大分别为9.20%和3.64%,在4种龙血竭药物中的最大含量和最小含量分别相差4.05倍和3.57倍。龙血素A和龙血素B间接竞争酶联免疫吸附分析方法的检测精密度、准确度和特异性均较好,可快捷有效地用于药物检测和分析。     

梯级水电站短期发电优化调度的免疫蛙跳算法应用研究

针对传统优化方法在求解高维、复杂的梯级水电站短期发电优化调度时易出现"维数灾"或陷入局部最优解的缺陷,提出了免疫蛙跳算法(ISFLA)。ISFLA将克隆选择算法嵌入到混洗蛙跳算法框架中,对混合之后的蛙群构造子群体执行免疫克隆选择操作,同时使用改进的最差解更新方式以提高其局部搜索能力,进而将其应用于某梯级水电站短期发电优化调度中。通过将ISFLA与标准混洗蛙跳算法、粒子群算法以及逐步优化方法对比,优化结果表明ISFLA在求解梯级水电站短期发电优化问题时具有有效性和优越性。     

基于仲裁器PUF的SRAM FPGA防克隆技术设计与实现

为保护电子设备中使用的静态随机存储器(SRAM)型现场可编程门阵列(FPGA)内部电路设计不被窃取,设计了用于SRAM FPGA的防克隆电路.该电路利用FPGA制造过程中的随机误差,提取每块芯片独一无二的ID.在此ID的控制下,被保护电路只能在指定的FPGA中正常运行,而在未指定的FPGA中运行时,无法产生正确的输出,从而达到防克隆目的.防克隆电路由使用仲裁器的物理不可克隆函数(PUF)、多数表决器、运算门阵列等三部分构成,其中仲裁器PUF电路用于提取ID,多数表决器起到提高输出稳定性的作用.最后在FPGA开发平台上证明了该电路的可行性.     

基于免疫克隆选择和语义计算的自适应资源检索算法

针对传统聚类算法存在的聚类类别数难以确定、易陷入局部极大和无法反映用户反馈的语义信息的问题,提出了一种基于免疫克隆选择和语义计算的自适应资源检索算法。其主要处理环节是使用语义相似度计算公式来计算抗体的免疫优势;引入了自适应优先算子来动态调解聚类类别,检查用户动态反馈的有效性;引入组合因子来增加抗体种群中个体的多样性,以扩大解的搜索范围,避免过早出现早熟现象;实验结果表明,使用该算法比传统聚类算法具有良好的收敛性、稳定性和更高的全局最优。     

基于人工免疫的机车二系调簧方法

为进一步提高电力机车二系支承载荷调整优化算法的性能,解决已有算法在加垫数量控制上的欠缺,并避免冗余计算,提出了一种基于人工免疫算法的两级结构机车二系载荷调整方法:免疫优势克隆选择多目标算法。针对调簧问题的偏好结构特点,设计具有调簧寻优阶段和可控加垫量寻优阶段的两级寻优算法,分别定义了两个阶段的寻优目标和可行域,进一步将调簧问题的先验知识作为免疫优势引入算法设计中,并结合调簧问题的具体特点以及人工免疫知识设计了特定的抗体编码形式、变异策略和免疫优势获得算法。对不同车型的多次应用试验统计结果表明:该算法不仅具有良好的优化载荷分布特性,还能稳定地控制调簧产生的加垫数量,并且能够避免冗余计算,极大地提高了调簧效率和实际应用价值。     

PerkinElmer ICP-MS助力科学家揭秘植物砷含量控制的关键基因

<正>随着工业的发展,环境污染已日益成为亟待解决的问题,而土壤及水中的重金属会通过农作物的吸收而转移到人们的餐桌上。在进行环境治理的同时,科学家们也在研究如何将这些危害健康的元素截流在作物之外,使我们的食品安全多一层保障。上海生科院植物生理生态研究所植物分子遗传国家重点实验室的晁代印研究组与英国阿伯丁大学及南京农业大学等研究团队合作,发现了控制植物内砷积累调控的关键基因     

登革病毒反向遗传学技术的研究进展

登革病毒(dengue virus,DENV)是流行于世界范围内的重要虫媒病毒之一,近年来其传播范围的不断扩大给疾病防控带来了极大困难。反向遗传学技术作为一种重要手段,广泛应用于RNA病毒的相关研究,自1991年第1次成功构建DENV感染性克隆以来,明显加速了DENV相关领域的研究。本文总结了DENV反向遗传学技术的构建策略及技术突破,为DENV致病机制研究及疫苗研发提供新思路。