嗜热β-葡萄糖苷酶的原核表达、纯化及其活性

目的原核表达、纯化嗜热β-葡萄糖苷酶,并检测其活性。方法从嗜热细菌Fervidobacterium pennivorans基因组DNA中PCR扩增β-葡萄糖苷酶基因,插入原核表达载体p ET-28a中,构建重组表达质粒,转化E.coli BL21(DE3)Codon Plus,筛选阳性重组菌,IPTG诱导表达。采用镍柱亲和层析法纯化重组酶;紫外吸收法检测酶活力和底物选择性。结果 PCR退火温度为67℃时,可扩增得到单一的目的基因条带;测序结果显示,重组表达质粒中目的基因的核苷酸序列与细菌基因组中该基因序列同源性为100%,未发现终止密码子及氨基酸的改变;表达的重组酶相对分子质量约为54 000;纯化的目的蛋白纯度达95%,浓度为10 mg/L;该重组酶能够高效催化对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(p NPG)的水解,60℃条件下的比活力达124 293.5 U/mg。结论成功在E.coli中表达了嗜热细菌Fervidobacterium pennivorans来源的具有较高催化活力和底物专一性的β-葡萄糖苷酶。     

在酵母中乙酰辅酶A产生酶

正本发明涉及到鉴别具有酶活性的杂多肽的方法,杂多肽用于转化酵母细胞中的丙酮酸酯,乙醛或醋酸酯成乙酰辅酶A,方法包括:1)提供包含缺失(PDH)旁-路的至少一个基因,基因从编码酶丙酮酸酯脱羧酶(PDC),乙醛脱氢酶(ALD)和乙酰辅酶A合成酶(ACS)中选择;2)转化所说具有表达载体的突变细胞,其包括杂核苷酸序列,核苷酸序列编码候选多肽,其具有转化丙酮酸酯,乙醛或醋酸酯为乙酰辅酶A的潜在的酶活性;     

酶免分析仪孵育过程的分段温控方法研究

针对酶免分析仪孵育过程耗时过长、温度稳定性差导致试剂反应差异性较大的问题,提出了一种基于改进型数字PID的分段温度控制方法。首先对孵育过程中试剂温度及孵育位温度变化曲线特性进行分析,确定预升温段及恒温段的分段控制温度参数;然后根据温度参数及各段控制指标,分别对孵育过程的各温度变化段采用不同算法分阶段进行控制;最后基于酶免分析仪框架搭建了温控实验系统,对反应液温度上升时间及温度稳定性进行验证。实验结果表明,试剂由21℃升至37.5℃的温度上升时间为239±5 s,恒温阶段的温度偏差小于±0.2℃。该方法可实现反应液迅速升温并且稳定恒温,保证了孵育过程中生物酶反应的快速及稳定。     

饲料中添加发酵豆粕对岩鱼生长性能、身体组成、抗氧化酶活性和抗病性能的影响

试验研究用发酵豆粕鱼料(FSM)代替常规鱼料(FM)对幼鱼期和生长期岩鱼(又名许氏鲆鲉)生长性能、身体组成、抗氧化酶活性和抗病能力的影响。FSM含量分别为0、8%、16%、24%和32%的等氮(51%)和等热量(MJ·kg~(-1))鱼料代替FM蛋白质含量约0、10%、20%、30%和40%的鱼料(分别为FSM0组、FSM8组、FSM16组、FSM24组和FSM32组)。每组鱼料分别饲喂3组幼生期岩鱼(1.2±0.04 g;EXPⅠ组)和3组生长期岩鱼(148.2±2.9 g;EXPⅡ组),2次·d~(-1),共8周。与FSM0组、FSM8组和FSM16组相比,饲喂FSM32组幼生期岩鱼的体增重(WG)显著降低。FSM16组、FSM24组和FSM32组的饲料效率(FE)和岩鱼蛋白质功效比值(PER)显著低于FSM0组和FSM8组。FSM24组的日采食量(DFI)显著低于FSM0组和FSM8组。但生长期岩鱼的生长性能和饲料利用率未表现出显著改变。FSM32组幼生期岩鱼的内脏指数(VSI)显著低于其他各组。FSM替代FM量达到40%,对幼生期和生长期岩鱼的整个身体和肌肉指标、氨基酸组成均无显著影响。与对照组相比,鱼料中含有FSM的生长期岩鱼的血清抗氧化酶活性显著提高。腹腔注射迟钝爱德华菌后存活的幼生期岩鱼不受饲料变化的影响。试验结果表明,FSM是一种成功的FM替代品,幼生期岩鱼鱼料中替代量可达10%,生长期岩鱼料中替代量达40%时,对其生长性能仍无不良影响。     

常见花茶多酚提取物对α-淀粉酶的抑制作用

以17种市售花茶为原料,采用水提法和醇提法制备花茶提取液,研究了总多酚得率及其对淀粉酶活性的抑制作用。结果表明:不同种类花茶提取液之间的总多酚得率和抑制α-淀粉酶活性有明显的差异;相同种类花茶不同溶剂提取液之间的总多酚得率和抑制α-淀粉酶活性有明显的差异,其中金莲花在两种溶剂提取液中的总多酚得率皆为最高,千日红在水提液中总多酚得率最低,茉莉花在醇提液中总多酚得率最低。水提液对α-淀粉酶抑制率没有显著的相关性,但花茶醇提取液对α-淀粉酶抑制率有极显著的相关性。     

芸薹属绿肥对烤烟根系及土壤酶活性的影响

为了调查芸薹属绿肥在豫西旱区烤烟生产中的效应,采用田间试验,研究了3种芸薹属绿肥翻压对烤烟根系生长及土壤酶活性的影响。研究结果表明:与对照组相比,田闲期不同芸薹属绿肥翻压,均显著增加了不同生育时期烤烟的根系活力、根长、根体积和根干质量,也显著提高了土壤脲酶、蔗糖酶、蛋白酶和过氧化氢酶活性。就3种芸薹属绿肥的效应而言,油菜作为绿肥翻压更有利于提高烤烟的根系生长和土壤酶活性。建议芸薹属植物油菜可作为豫西烟区烤烟生产田闲期的绿肥资源。