黑豆胰蛋白酶抑制剂的纯化及性质研究

目的:分离、纯化一种黑豆胰蛋白酶抑制剂,并进行酶学性质及其生物学性质研究,为其生物活性蛋白的研究提供依据。方法:采用硫酸铵分级沉降、弱阳交换色谱CM-Sephadex C-50、亲和色谱Affi-gel和SDS-PAGE等方法分离、纯化和鉴定;以BANPA为底物,检测BSTI对胰蛋白酶的抑制活性。结果:从黑豆种子中分离到一种胰蛋白酶抑制剂,命名为BSTI。SDS-PAGE和阴离子高效液相色谱鉴定表明该蛋白具有相当高的纯度。其相对分子质量为20 kD,等电点为5.6。当抑制剂与酶的物质的量比达到1时,使酶完全失活。在温度65℃以下以及经pH 2～10处理后,BSTI活性几乎不受影响。BSTI对植物致病菌苹果轮纹病菌、瓜果腐霉病菌和白菜黑斑病菌具有较强的抑制作用,而对甜瓜枯萎病菌和葡萄灰霉病菌无抑制作用。结论:本文分离、表征到一种具有抗菌活性的新型胰蛋白酶抑制剂,可以使用离子交换层析柱进行分离、纯化。

Studies on Purification and Characterization of Trypsin Inhibitor from Black Soybean