| 海刺参组织蛋白酶L基因的克隆、重组表达及活性鉴定 |
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| 引用本文： | 鄢荣歆,徐赛涛,丛丽娜,杨冠科,朱蓓薇.海刺参组织蛋白酶L基因的克隆、重组表达及活性鉴定[J].大连轻工业学院学报,2009(6). |
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| 作者姓名： | 鄢荣歆 徐赛涛 丛丽娜 杨冠科 朱蓓薇 |
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| 作者单位： | 大连工业大学生物与食品工程学院; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30571449); 国家重点基础研究发展规划(“973”计划)前期研究资助项目(2006CB708210) |
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| 摘 要： | 通过RT-PCR和RACE PCR技术,从海刺参(Stichopus japonicus)肠中克隆得到编码组织蛋白酶L(SjCL)基因,其中全长cDNA 1 287 bp,5′非编码区(UTR)202 bp,3′UTR 87 bp,开放阅读框(ORF)999 bp,编码332个氨基酸(aa),包括组织蛋白酶L成熟肽316 aa和信号肽16 aa,分子质量预测为35.3 ku。用SjCL序列与相似物种海胆、海葵等进行对比,可知SjCL具有组织蛋白酶L所特有的氨基酸保守区域ERFNIN和GNFD,以及由Cys 139,His 278和Asn 299残基组成的保守活性位点。将编码SjCL基因克隆进原核表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒pET32a(+)-SjCL,转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞,再进行诱导表达、亲和纯化和透析复性,得到了纯化且具有活性的重组SjCL。酶活力检测结果表明,重组SjCL对组织蛋白酶L特异性底物Z-Phe-Arg-Nmec具有较高活性,而对组织蛋白酶B特异性底物Z-Arg-Arg-Nmec无活性。本实验对SjCL的cDNA序列进行了生物信息学分析并通过基因工程...
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| 关 键 词： | 海刺参 组织蛋白酶L RT-PCR 3′-和5-′RACEPCR 重组表达 |
Cloning,expression and assay of cathepsin L from the sea cucumber Stichopus japonicus |
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| YAN Rong-xin,XU Sai-tao,CONG Li-na,YANG Guan-ke,ZHU Bei-wei.Cloning,expression and assay of cathepsin L from the sea cucumber Stichopus japonicus[J].Journal of Dalian Institute of Light Industry,2009(6). |
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| Authors: | YAN Rong-xin XU Sai-tao CONG Li-na YANG Guan-ke ZHU Bei-wei |
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| Affiliation: | YAN Rong-xin,XU Sai-tao,CONG Li-na,YANG Guan-ke,ZHU Bei-wei(School of Biological and Food Engineering,Dalian Polytechnic University,Dalian 116034,China) |
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| Abstract: | |
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