| 实时荧光定量PCR法快速检测食品中大肠埃希菌 |
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| 引用本文： | 胡朝友,洪志强,张梦寒.实时荧光定量PCR法快速检测食品中大肠埃希菌[J].中国食品卫生杂志,2015,27(4):399-403. |
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| 作者姓名： | 胡朝友 洪志强 张梦寒 |
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| 作者单位： | 昆山市疾病预防控制中心,江苏 昆山 215300,昆山市疾病预防控制中心,江苏 昆山 215300,苏州市疾病预防控制中心,江苏 苏州 215004 |
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| 基金项目： | 江苏省卫生厅预防医学2012年科研课题资助项目(Y2012049)；苏州市饮用水安全与水性疾病监测公共服务平台开放实验室开放课题资助项目(SZPT2012001) |
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| 摘 要： | 目的应用实时荧光定量PCR技术,结合3~5 h的前增菌处理,建立食品中大肠埃希菌的快速、灵敏、定量的检测方法。方法以大肠埃希菌(ATCC 25922)为参考菌株,对培养基和培养温度进行优化,选择最佳的前增菌培养条件。将不同浓度的参考菌株和样品分别接种前增菌液中培养3~5 h。采用Triton-X 100提取增菌后的DNA,实时荧光定量PCR扩增大肠埃希菌特异性片段。所得Ct与对应的原始(增菌前)参考菌株的浓度,建立标准曲线,计算样品中大肠埃希菌的数量。结果纯培养模式下,经过3、4和5 h的前增菌后,标准曲线具有很好的线性,r2分别为0.996、0.992和0.991,对应的检测限为136、14和1.4 cfu/100 ml;含杂菌培养模式下,NB和EC肉汤42.0℃增菌4 h后,建立的标准曲线r2分别为0.972和0.978。在不同食品中该方法的加标回收率为74.0%~174.0%。结论 3~5 h的前增菌实时荧光定量PCR方法可以快速、灵敏、定量地检测食品中活的大肠埃希菌。
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| 关 键 词： | 大肠埃希菌 实时荧光定量PCR 定量检测 食源性致病菌 食品安全 风险监测 |
Detection and quantification of Escherichia coli in food using Real-Time PCR method |
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| HU Chao-you,HONG Zhi-qiang and ZHANG Meng-han.Detection and quantification of Escherichia coli in food using Real-Time PCR method[J].Chinese Journal of Food Hygiene,2015,27(4):399-403. |
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| Authors: | HU Chao-you HONG Zhi-qiang and ZHANG Meng-han |
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| Affiliation: | (Centers for Diseases Prevention and Control,Jiangsu Kunshan 215300,China) |
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