| 基于内参的副溶血性弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 王建昌,王金凤,李静,孙晓霞,陈瑞春.基于内参的副溶血性弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立[J].中国食品卫生杂志,2015,27(4):408-413. |
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| 作者姓名： | 王建昌 王金凤 李静 孙晓霞 陈瑞春 |
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| 作者单位： | 河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心,河北 石家庄 050051,河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心,河北 石家庄 050051,河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心,河北 石家庄 050051,河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心,河北 石家庄 050051,河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心,河北 石家庄 050051 |
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| 基金项目： | 质检公益性行业科研专项(201210128；201310126) |
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| 摘 要： | 目的建立基于内参的副溶血性弧菌实时荧光定量PCR方法,快速检测样品中的副溶血性弧菌。方法根据Gen Bank已公布的副溶血性弧菌基因组序列,筛选特异性靶基因,设计特异性引物探针,优化反应体系,并在体系中加入内参(IAC),通过标记不同荧光基团的Taq Man探针来监测IAC,进而实时监控整个PCR反应。按照5~50 cfu/25 g的细菌量人工污染样品,以评价所建立反应的体系。结果以副溶血性弧菌基因组DNA为模板,最低检测限为1 pg/μl;以10倍梯度稀释的菌液经水煮法提取的DNA为模板,最低检测限为4×102cfu/ml;以含有gyr B的质粒为模板,最低检测极限可以达到100 copies/μl;建立gyr B和gyr B-IAC标准曲线,Ct值与模板拷贝数均呈良好线性关系(r2=0.999);人工污染初始菌量为7 cfu/25 g时,样品中副溶血性弧菌增菌6 h即可检出。结论本研究所建立的gyr B-IAC实时荧光定量PCR方法,既能有效检测食品中副溶血性弧菌,又能实时监测PCR反应过程,有效防止"假阴性"的发生,结果可靠,有利于实现海产品中副溶血性弧菌实时荧光定量PCR检测方法的标准化。
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| 关 键 词： | 副溶血性弧菌 gyrB 实时荧光定量PCR IAC 食源性致病菌 食品安全 |
Establishment of a fluorescence quantitative PCR assay in detection of Vibrio parahaemolyticus based on internal reference |
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| WANG Jian-chang,WANG Jin-feng,LI Jing,SUN Xiao-xia and CHEN Rui-chun.Establishment of a fluorescence quantitative PCR assay in detection of Vibrio parahaemolyticus based on internal reference[J].Chinese Journal of Food Hygiene,2015,27(4):408-413. |
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| Authors: | WANG Jian-chang WANG Jin-feng LI Jing SUN Xiao-xia and CHEN Rui-chun |
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| Affiliation: | Technology Center of Hebei Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau,Hebei Shijiazhuang 050051, China,Technology Center of Hebei Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau,Hebei Shijiazhuang 050051, China,Technology Center of Hebei Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau,Hebei Shijiazhuang 050051, China,Technology Center of Hebei Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau,Hebei Shijiazhuang 050051, China and Technology Center of Hebei Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau,Hebei Shijiazhuang 050051, China |
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