不同株系赤霞珠葡萄表皮酵母菌的多样性研究

通过采用富集分离方法,从3个赤霞珠株系（R5、ISV-FV5和169）的葡萄果实表皮共分离得到酵母菌36株。利用26S rDNA的D1/D2和5.8S-ITS区序列分析并结合形态学特征对这些菌株进行了多样性研究。共鉴定出3个酵母菌属的4个已知种群,分别为Cryptococcus magnus、Cryptococcus uzbekistanensis、Rhodosporidiobolus ruineniae和Hanseniaspora uvarum。Hanseniaspora uvarum为株系R5所特有,Cryptococcus uzbekistanensis和Rhodosporidiobolus ruineniae为株系ISV-FV5所特有,而Cryptococcus magnus同时存在于株系ISV-FV5和169上。结果表明,不同株系的赤霞珠葡萄表皮蕴含着多种类型的酵母菌资源,而且尽管其生长的客观条件是一致的,但因为株系的不同其所含酵母菌种群的组成上也存在明显的差异。     

大曲中酵母菌种群结构及多样性分析

将传统培养方法与分子生物学技术相结合,对大曲中酵母菌种群结构特征及多样性进行研究.从大曲中共获得92株酵母菌纯培养,通过5.8S-ITS RFLP指纹图谱分析后,得到12个不同的类群.从各个类群中随机选取代表菌株进行26S rDNA D1/D2区域序列分析和系统发育分析,大曲中酵母菌主要分布在Saccharomyces、Pichia、Zygosaccharomyces、Debaryomyces、Can-dida、Endomyces、Rhodotorula、Hanseniaspora、Issatchenkia 9个已知酵母菌属.传统培养方法与分子生物学技术相结合能较好地从分子水平揭示大曲中酵母菌的种群结构及多样性.     

新疆传统馕发酵面团中酵母菌的多样性分析

采用平板分离与纯化、26S rDNA D1/D2区域序列测定和系统发育分析方法,对新疆乌鲁木齐、阿勒泰、伊犁、喀什、阿克苏及和田6 个地区民间传统馕面团发酵酵母菌多样性进行了研究。从中分离得到227 株酵母菌,它们隶属于10 个属14 个种：Saccharomyces cerevisiae、Saccharomyces servazzii、Pichia fermentans、Pichia membranifacies、Pichia kudriavzevii、Pichia anomala、Candida humilis、Hanseniaspora uvarum、Torulasporadelbrueckii、Wickerhamomyces anomalus、Cladosporium ramotenellum、Cryptococcus albidus、Kodamaea ohmeri、Issatchenkia orientalis;其中Saccharomyces cerevisiae为优势种,占总分离株的55.51%（126 株）,在系统发育树上形成2 个大分枝4 个小分枝,A1-1分枝由115 株菌株构成,是馕面团发酵的优势品系菌群。研究结果阐明了新疆民间传统馕面团中酵母菌的多样性,为开发利用传统馕面团的酵母菌资源提供了理论依据。     

新疆伊犁牧区发酵乳制品中酵母菌的分离和多样性分析

为保护新疆民族传统工艺制作的奶酪中经几千年驯化的优良酵母菌株,从新疆伊犁牧区少数民族家中采集样品20份,分离得到33株酵母菌,并对其进行生理生化鉴定、利用26S rDNA D1/D2区域序列分析对这些菌株进行了分类鉴定和多样性分析。共鉴定出4属5种,其中唐布拉牧区和那拉提牧区的优势菌株为发酵毕赤氏酵母(Pichia fermentans),托里县和布尔津县采集的样品中的优势菌种为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae);马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是奶酪样品中的共同菌株。     

野生环境中叶栖酵母菌资源的研究

在自然界中酵母菌分布较广泛且种类多样,在生产生活中有重要的利用价值。主要研究在浙江省临海市杜桥镇凤凰山的酵母菌种类分布情况。在凤凰山上符合要求的不同区域进行树叶采集,之后分离出酵母菌,纯化后再用简单法提取酵母菌DNA,PCR扩增26S rDNA D1/D2区,PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳检测后进行测序,实验结果初步阐明凤凰山野生环境中叶栖酵母菌资源的种类概况。     

新疆石河子地区酵母菌的生物多样性及系统发育研究

通过对石河子地区酵母菌的筛选,了解石河子地区酵母菌的生物多样性。采用YPD培养基分离纯化菌株,通过26SrDNA基因D1／D2区序列分析确定菌种的系统进化地位。分离筛选出6个属天然酵母菌,分别为：假丝酵母属（Candida）、Meyerozyma属、红酵母属（Rhodotorula）、孢汉逊属（Hanseniaspora）、酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）和毕赤酵母属（Pichia）,共10个种,其中包括6个疑似种。     

天山冻土中嗜冷酵母菌生物多样性

采用麦芽浸膏富集平板涂布天山冻土中可培养酵母菌,通过麦芽浸膏分离培养基筛选菌株.采用酵母菌常规生理生化实验、最适生长温度、最适pH对分离菌株的生理学进行研究.以NL1和NL4为PCR扩增引物,通过26S rRNA基因D1/D2区序列同源性分析,初步确定酵母菌株的系统进化地位.分离筛选到4株嗜低温酵母菌,分属于隐球酵母(Cystofilobasidium infirmominiatum)、掷孢酵母(Sporobolomyces patagonicus)、棒孢酵母(Clavispora lusitaniae)和毕赤酵母(Pichia kluyveri).     

河南民权地区赤霞珠葡萄表皮酵母菌的多样性研究

通过采用富集分离方法,从河南省商丘市民权县的葡萄种植园的赤霞珠葡萄果实表皮共分离得到酵母68株。利用26S r DNA的D1/D2和5.8S-ITS区序列分析并结合形态学特征对这些菌株进行了多样性研究。共鉴定出4个酵母菌属的6个已知种群,分别为Hanseniaspora opuntiae、Hanseniaspora guilliermondii、Hanseniaspora vineae、Saturnispora diversa、Pichia terricola和Issatchenkia terricola。Hanseniaspora opuntiae、Hanseniaspora vineae和Saturnispora diversa占主导地位,而Hanseniaspora guilliermondii的含量最少。结果表明,民权地区赤霞珠葡萄表皮蕴含着多种类型的酵母菌资源(尤其是Saturnispora diversa),而且不同种酵母在数量上的分布有明显差异。     

几株酵母菌的分子系统学鉴定

通过对酵母菌5.8S核糖体RNA的ITS区域PCR扩增及限制性酶切片段多态性(RFLP)的图谱分析以和26S rDNA D1/D2区及5.8S-ITS区的序列分析,共鉴定13株分离自新疆鄯善地区的葡萄酒相关酵母菌。5.8S-ITS区的4种内切酶(HaeⅢ、Hin6Ⅰ、HinfⅠ、AluⅠ)的酶切分析产出4种特异性图谱。根据26S rDNA D1/D2区的序列分析和BLAST比对,将供试菌株鉴定为4个属4个种,分别为Saccharomyces cerevisiae、Candida zemplinina、Hanseniaspora uvarum、Pichia kluyveri var. kluyveri;而根据5.8S-ITS-RFLP及5.8S-ITS序列分析,将供试菌种鉴定为Saccharomyces cerevisiae、Candida zemplinina、Hanseniaspora uvarum、Issatchenkia terricola 4个属4个种。3种方法对供试的10个菌株的鉴定结果一致,而对另外3株的鉴定结果不同。     

沙棘果酒专用酵母菌的分子生物学鉴定及其应用研究

目前工业上尚无酿造沙棘果酒的专用酵母菌,因此,筛选出适合酿造沙棘果酒的优良酵母菌尤为必要。利用ITS1-5.8S-ITS2 rDNA 序列分析及构建系统发育树对自选酵母菌Y23 进行分子生物学鉴定。结果表明,克隆的自选酵母菌Y23 的5.8S-ITS rDNA 序列(GenBank 接受号：FJ793809)全长874bp。自选酵母菌Y23 与Saccharomycescerevisiae CBS423T(AM262829)的遗传距离最近,两者之间的同源性为100%,因此,鉴定酵母菌Y23 为酵母属(Saccharomyces)酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。通过响应面分析法研究初始糖度、发酵温度、接种量对自选酵母菌Y23 酿造沙棘果酒品质的影响,得出沙棘果酒质量与影响因素间的回归模型,并根据模型进行工艺参数优化。结果表明,接种量对沙棘果酒质量的影响极显著(P ＜ 0.01)。利用自选酵母菌Y23 酿造沙棘果酒的最佳工艺参数是：初始糖度19.9%、发酵温度25.4℃、接种量10.3%。     

A new putative Zygosaccharomyces yeast species isolated from traditional balsamic vinegar

The taxonomic status and species number of the genus Zygosaccharomyces have rapidly changed in the last years. In this study, two new osmotolerant Zygosaccharomyces strains isolated from traditional balsamic vinegar, viz. ABT301 and ABT601, were investigated to elucidate their taxonomic relationships with Zygosaccharomyces rouxii species. A multi-gene sequence approach was employed, including regions of the rDNA repeat [5.8S, two internal transcribed spacers (ITS) and the 26S D1/D2 domain], COX2 mitochondrial gene and two nuclear genes (SOD2 and HIS3). Cloning and sequence analysis of 5.8S-ITS rDNA revealed that these strains bear an unusual polymorphism for this region. Three highly divergent 5.8S-ITS sequences were detected, one identical to Z. rouxii, the other two showing some relatedness to Z. mellis. Sequence and gene number polymorphism was also observed for the protein-encoding nuclear genes SOD2 and HIS3, as two copies for each gene different from those found in Z. rouxii were detected. Analysis of the D1/D2 26S domain showed that ABT301 and ABT601 have only one type of D1/D2 sequence statistically different from that of Z. rouxii. The findings obtained in this work suggest that the genomic background of strains ABT301 and ABT601 is different from the other Zygosaccharomyces species. We speculated that they could belong to a new putative species related to Z. rouxii.     

赤霞珠葡萄自然发酵过程中酵母菌的分离与鉴定

对赤霞珠葡萄自然发酵过程中的酵母菌进行了分离和鉴定,目的是探寻赤霞珠葡萄酒发酵过程相关酵母菌群的变化规律。研究共分离到123株酵母菌,其中2009年分离到71株,2010年分离到52株。经菌落形态鉴别,培养基培养进行初步分类,共获得10种培养类型,其中有5种培养类型重复出现于2个年份。进一步采用5.8S rDNA-ITS区域RFLP分析法,从分子水平区分为9种类型。再通过基因序列分析,将其鉴定为分属于7个属的8种酵母菌:Aureobasidium pullulans、Hanseniaspora uvarum、Hanseniaspora vineae、Rhodotorula mucilaginosa、Pichia caribbica、Cryptococcus flavescenss、Candida zemplinina及Saccharomyce cerevisiae。酵母属(Saccharomyce)酵母是自然发酵中后期的主导菌,发酵前期主要是非酵母属酵母。     

不同补光措施对赤霞珠葡萄品质影响的综合评估

通过田间试验研究摘叶、反光膜和摘叶+反光膜处理对赤霞珠葡萄可溶性固形物、可滴定酸、还原糖、总花色苷、总酚及单宁含量的影响,并使用模糊综合评价方法计算它们综合得分,旨在筛选出适合当地酿酒葡萄栽培的最佳模式。结果表明,与对照相比,摘叶处理葡萄中可溶性固形物、还原糖、总花色苷、总酚含量分别提高了4.6%、5.1%、43.2%、46.0%,可滴定酸含量显著降低(P＜0.05)。而且,摘叶处理的最佳(40.99)和模糊综合评价得分最高(0.698 4)。由此认为,在赤霞珠果实转色中期摘叶处理适宜于陕西地区大量推广使用。     

不同酵母对赤霞珠桃红葡萄酒香气的影响

利用CY3079、Zymaflore X16、TXL和STR四种不同类型的商业酵母发酵赤霞珠新鲜桃红葡萄酒,采用顶空固相微萃取（HS-SPME）结合气相色谱质谱（GC-MS）联用技术,分别对酒精发酵结束和瓶储陈酿一年的葡萄酒样品进行香气物质的定性与定量分析。结果表明,4种酵母发酵的赤霞珠桃红葡萄酒中香气物质的种类相似,但其含量差异显著。酒精发酵结束阶段,CY3079和Zymaflore X16酵母发酵的桃红葡萄酒中脂肪酸乙酯的含量高于其他酵母发酵的酒样,使它们具有更加浓郁的果香、甜香和花香;而Zymaflore X16和STR酵母产生乙酸异戊酯和乙酸苯乙酯的能力较强。经过一年的瓶储陈酿,所有处理的桃红葡萄酒中脂肪酸乙酯和高级醇乙酸酯的含量显著下降,导致其果香的强度降低,同时减少了不同酵母发酵酒样之间的差异。     

烟台产区‘赤霞珠’转色后指标的变化研究

研究2016年和2017年不同成熟度下‘赤霞珠’葡萄皮和葡萄籽中的总酚、黄烷醇和花色苷含量的差异,并分析不同成熟度葡 萄指标之间的相关性。通过主成分分析（PCA）,对不同成熟度葡萄品质进行研究,确定烟台产区‘赤霞珠’葡萄的最佳采收期。 结果表 明,随着采收时间的推移,‘赤霞珠’葡萄的还原糖含量、可溶性固形物含量、糖酸比呈不断上升趋势,总酸含量不断下降;葡萄果皮中 的总酚和黄烷醇含量呈先上升后下降趋势且呈显著正相关（P＜0.05）,花色苷呈不断上升的趋势;葡萄果籽中的总酚、黄烷醇含量均 呈先下降后上升趋势且呈显著正相关（P＜0.05）。 烟台产区‘赤霞珠’葡萄的最佳采收时间在转色后5周左右。     

树体遮光对不同转色期赤霞珠葡萄花色苷组成及含量的影响

以酿酒葡萄赤霞珠为试材,在不同转色期分别采用20%、50%遮光的遮阳网对果树树体顶端进行遮光处理。 分析不同遮光程 度及转色时期对葡萄生长过程中花色苷组分及含量的差异的影响。 结果表明,在5%转色-完全成熟期进行20%、50%遮光及在100% 转色-完全成熟期进行20%遮光,果皮中花色苷的总量明显高于空白对照（CK）。 5%转色-完全成熟期间遮光主要影响赤霞珠果皮中 甲基花青素葡萄糖苷、花青素葡萄糖苷、甲基花青素乙酰化葡萄糖苷、花翠素香豆酰化葡萄糖苷（顺式+反式）的含量;100%转色-完全 成熟期间遮光主要影响赤霞珠葡萄果皮中甲基花翠素香豆酰化葡萄糖苷、甲基花青素香豆酰化葡萄糖苷、花青素葡萄糖苷、甲基花 翠素葡萄糖苷、花翠素香豆酰化葡萄糖苷（顺式+反式）的含量。     

川西北干旱河谷地区赤霞珠葡萄果实花色苷的积累

花色苷是葡萄果实主要呈色物质,其积累受环境因素的影响.本研究以川西北干旱河谷地区的赤霞珠葡萄果实为试材,采用高效液相色谱-质谱联用以及荧光实时定量PCR技术分析了果实成熟过程中花色苷的组成与含量及部分关键酶基因的表达.结果表明,从果实完全转色至随后的3或4周内,是花色苷积累的高峰期;酰化和非酰化花色苷的相对比例及甲基化和非甲基化花色苷的相对比例不随成熟进程或年份而变化,但花翠素类与花青素类花色苷的相对比例受年份影响较大,降雨量是最主要的影响因子,它可能通过影响花色苷积累高峰期果实类黄酮代谢中F3'H和F3'5'H基因的表达而影响碳的分支流向.