盐酸克伦特罗与莱克多巴胺联检速测卡的研制

本文研究建立了一种检测盐酸克伦特罗与莱克多巴胺联检速测卡的方法。应用胶体金免疫层析技术,采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记盐酸克伦特罗与莱克多巴胺单克隆抗体并喷于玻璃纤维上,盐酸克伦特罗与莱克多巴胺偶联OVA抗原和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成盐酸克伦特罗与莱克多巴胺联检速测卡。试验结果表明,该联检速测卡的灵敏度分别为CLEN 3 ng/mL、RAC 5 ng/mL,检测时间为3 min,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。     

3种β-兴奋剂化学发光酶免疫试剂盒分析检测方法的评价

选取3种市售β-兴奋剂化学发光酶免疫分析检测试剂盒,从线性关系、灵敏度、选择性、检出限、准确度、重复性及变异性等方面进行实验,并经农业部1025号公告—18—2008中高效液相色谱—串联质谱法验证比较,初步建立了一套化学发光酶免疫分析检测试剂盒质量评价方法。结果表明:沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺3种试剂盒在测定范围内线性关系良好,灵敏度分别为0.7、1.8、1.0 ng/mL,检出限分别为0.2、0.1、0.2 ng/mL,猪肝、猪肉和牛肉的回收率在81.9%~115.2%之间,重复性变异系数为3.3%~9.7%,批间变异系数为9.9%~16.5%,交叉反应率均符合产品说明书要求,可以用于猪肝、猪肉、牛肉样品中沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺的残留检测。     

UPLC-MS/MS对猪肉中3种β-受体激动剂残留的检测

建立超高效液相色谱-串联质谱/质谱法测定瘦猪肉中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的方法。试样用α-葡萄糖醛苷酶酶解过夜,调酸去除蛋白后,在碱性条件下以乙酸乙酯提取,经氮气吹干重新溶解后过MCX柱子进行净化,采用电喷雾正离子(ESI~+)模式,多反应监测(MRM)进行检测,内标法定量测定。结果表明,目标化合物克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺在0.5~90μg/L浓度范围内线性关系良好,相关系数(r~2)均大于0.99,阴性样品加标回收率范围为73.3%~102.3%,相对标准偏差小于2.0%。目标化合物克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇方法检出限(LOD)为0.5μg/kg。该方法操作简便、准确、灵敏、重现性好、基质干扰少,适用于瘦猪肉中克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺的测定。     

超高效液相色谱-串联质谱法检测动物血浆中 克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇

目的建立动物血浆中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。方法采用乙酸铵缓冲液酶解提取血浆中的目标化合物,提取液经混合阳离子交换柱净化,采用超高效液相色谱-串联质谱(ultra performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry)多反应监测模式检测,内标法定量。结果克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇回收良好,线性相关系数均大于0.99,测定低限均为0.5μg/kg。结论该方法适用于动物血浆中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇残留的检测。     

气相色谱-质谱法测定动物性食品中三种β-激动剂的残留量

建立了用气相色谱-质谱同时测定动物性食品中克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺残留量的检测方法。样品用乙酸胺缓冲液匀浆,加入β-葡萄糖苷酸酶水解,用异丙醇-乙酸乙酯(40:60)萃取,有机相浓缩,经LC-SCX固相萃取柱进行分离,用4%氨化甲醇洗脱,洗脱液氮气吹干后,经N、O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺(BSTFA)衍生后于气质联用仪上进行测定。检测采用选择性离子监控模式(SIM),以特征离子克伦特罗(86,262,243)、沙丁胺醇(86,369,440)和莱克多巴胺(250,267,502)定性,以试样峰(m/z86,m/z369,m/z250)的峰面积外标法定量。本方法检出限为克伦特罗和沙丁胺醇0.5ug/kg,莱克多巴胺2ug/kg;3种组分的线性相关系数均大于0.99。该方法的回收率为75%-98%,相对标准偏差为5%-14%。     

高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉中8种β-受体激动剂残留

目的 建立高效液相色谱-串联质谱法(High performance liquid chromatography - tandem mass spectrometery, HPLC-MS/MS)同时测定猪肉中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林、氯丙那林、非诺特罗、妥布特罗和喷布特罗残留量的方法。方法 2 g猪肉样品加入8 mL 0.2 mol/L乙酸钠水溶液和50 μL β-葡萄糖醛甙酶, 37 ℃水浴处理, 过滤后加入高氯酸除蛋白质, 用氢氧化钠调节pH至9.5~10, 25 mL乙酸乙酯分两次提取, 浓缩, 用正己烷除脂, 采用HPLC-MS/MS多反应监测模式检测, 外标法定量。结果 克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林的线性范围为0.5～5 μg/kg, 氯丙那林、非诺特罗、妥布特罗和喷布特罗的线性范围为0.25～5 μg/kg, 相关系数均大于0.995, 沙丁胺醇、特布他林、氯丙那林、非诺特罗和喷布特罗的检出限为0.25 μg/kg, 定量限为0.50 μg/kg, 克伦特罗、莱克多巴胺、妥布特罗的检出限为0.15 μg/kg, 定量限为0.25 μg/kg。加标回收率为82%～105%, 相对标准偏差为4.65%~16.18%(n=6)。结论 该方法经济、简便、快速、准确, 适用于猪肉中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林、氯丙那林、非诺特罗、妥布特罗和喷布特罗残留量的检测。     

农业农村部:每省检测“瘦肉精”至少监测8家屠宰场

<正>4月12日,农业农村部对外发布了2019年屠宰环节"瘦肉精"监督检测和风险监测方案,要求以省为单位选择屠宰企业,兼顾自营、代宰、混合经营等不同经营模式。每省要监测2个以上地(市),每省原则上不得少于8家屠宰场。根据方案,"瘦肉精"检测项目为每份样品检测克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇等3种"瘦肉精"类物质。检测方法包括采用"瘦肉精"快速检测产品进行现场检测,以及参照《猪尿中β-受体激动剂多残留检测液相色谱-串联质谱法》(农业部公告第1025号-11-2008)执行,克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇在动物尿液中的判定值均为0.5μg/L的确证检     

沙丁胺醇铕标记时间分辨荧光免疫分析方法的建立

基于抗沙丁胺醇(SAL)的单克隆抗体,初步建立了检测SAL的高灵敏度的时间分辨直接竞争免疫分析法(CDTRFIA)。采用辛酸-硫酸铵纯化抗SAL杂交瘤细胞株腹水单克隆抗体,用稀土离子Eu3+偶联物进行标记,制备铕标抗体;通过合成SAL-SUC半抗原并与卵清蛋白偶联获得SAL-OVA包被抗原:采用直接竞争的方式,游离SAL和固相SAL-OVA包被原共同竞争有限的铕标SAL单抗,初步建立SAL时间分辨免疫分析方法。研究发现,优化的TRFIA半抑制量IC_(50)为1.6 ng/mL,检测范围为0.39 ng/m L~12.77 ng/mL,最低检测限为0.136 ng/mL。通过对其他常用β-兴奋剂进行交叉反应分析,研究发现建立的TRFIA方法特异选择性高,与克伦特罗的交叉率较小(2.29%),而与莱克多巴胺没有交叉。     

竞争化学发光酶免疫测定技术检测盐酸克伦特罗

目的建立一种检测盐酸克伦特罗(clenbuterol,CLB)的竞争化学发光酶免疫测定法(chemiluminescent enzyme immunoassay,CLEIA)。方法基于CLB的竞争酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),通过优化反应温度、反应时间和缓冲体系p H建立了CLB的CLEIA测定法。用CLB小鼠中毒模型评价CLEIA检测法对实际样本的检测效果,并将CLEIA与LC-MS法的相关性进行了比较。结果 CLEIA法测定CLB的检测范围为0.0433~42.5363μg/L,检测限为0.0178μg/L,变异系数小于10%,回收率为95%~110%,对莱克多巴胺和沙丁胺醇仅有极低的交叉反应性。所建立的CLEIA法与LC-MS法在检测实际样本时具有较高的相关性。结论本研究建立的CLEIA法操作简便,检测限、灵敏度、准确度、特异性均符合检测要求,可用于实际样品的检测。     

液相色谱-串联质谱法同时测定猪肉中3种β-受体激动剂的残留量

目的建立液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)同时测定猪肉中3种β-受体激动剂类药物(沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗)的检测方法。方法制备的样品用含1%乙酸的乙腈提取,正己烷去脂后,采用ZORBAX SB-C_(18)色谱分离,采用乙腈-0.1%甲酸(含5 mmol/L乙酸铵)梯度洗脱,多反应监测模式定量。结果本方法在12 min内完成3种目标化合物的分离分析。方法的检出限为0.003～0.015μg/kg,定量限为0.01～0.05μg/kg。在0.01～5μg/kg的添加范围内,动物肌肉组织中添加回收率为71.6%～112.6%,相对标准偏差为7.2%～16.9%。结论该方法快速、准确、灵敏,适合同时定量猪肉中3种β-受体激动剂类药物残留测定。     

膜处理-高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉中3种β-受体激动剂残留

建立了膜处理-高效液相色谱-串联质谱法(MD/HPLC-MS/MS)检测畜产品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇3种β-受体激动剂的方法。样品经乙酸铵缓冲液提取和β-葡萄糖苷醛甙酶/芳基硫酸酯酶酶解,标准再生纤维素膜透析净化,再用环已烷-乙酸乙酯(4∶1)萃取透析液,上机检测。以0.1%甲酸水和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子(ESI+)模式电离,多反应监测(MRM)模式进行检测。结果表明:3种β-受体激动剂在0.5~10μg/kg范围内线性关系良好,回收率为63.5%~74.3%,相对标准偏差为5.2%~13.6%。该方法采用膜处理技术进行前处理,适用于畜产品中3种β-受体激动剂的经济、高灵敏度的筛选。     

“瘦肉精”“β-兴奋剂”如何检测？

“瘦肉精”是一类能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的药物,目前可以起到此作用的物质是一类叫作β-兴奋剂（β-肾上腺受体激动剂）的药物。主要包括盐酸克伦特罗、莱克多巴胺以及沙丁胺醇、溴布特罗、溴氯布特罗、马布特罗等β-兴奋剂。但在中国,瘦肉精通常是指盐酸克伦特罗。     

UPLC-MS/MS检测运动食品中β-受体激动剂残留

建立一种超高效液相色谱-串联质谱法检测运动食品中西马特罗、特步他林、沙丁胺醇、菲诺特罗、莱克多巴胺、氯丙那林、克伦特罗、妥布特罗、苯乙醇胺A和喷布特罗10种β-受体激动剂残留的分析方法。样品前处理用乙腈沉淀蛋白后,采用MCX小柱进行净化和富集。采用Waters Atalantis T3色谱柱(2.1 mm×150 mm,3μm)分离,以0.1%甲酸-乙腈为流动相的梯度洗脱模式下,β-受体激动剂在1.0 ng/m L~20.0 ng/m L浓度范围内线性良好,相关系数r2为0.993~0.999,检出限为0.5μg/kg,定量限为1.5μg/kg,加标回收率达到78.2%~91.8%。该方法具有前处理简单、净化效果好、灵敏度高和检测速度快的优点,适用于运动食品中西马特罗、特步他林、沙丁胺醇、菲诺特罗、莱克多巴胺、氯丙那林、克伦特罗、妥布特罗、苯乙醇胺A和喷布特罗等10种β-受体激动剂残留的分离和定量检测。     

冷鲜肉中β-受体激动剂测定方法的比对及优化研究

目的对盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的现有检测方法进行比对,并经优化得到一种基于超高效液相色谱-串联质谱(ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)的检测方法。方法对2种现行检测标准和QuEChERS方法进行方法确认比对,并基于标准方法原理进行逐步优化。通过酶解、无机提取、调pH、有机提取、固相萃取、浓缩过程进行前处理,并通过UPLC-MS/MS对冷鲜肉中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇进行分析。结果该优化方法定量限在0.08～0.17μg/kg区间,3个浓度的加标回收率在81.4%～94.6%区间,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)小于8.1%(n=5).结论该方法相比标准方法,前处理时间缩短一半以上,仪器分析效率也有所提高;相比于QuEChERS方法具有更低的定量限和更稳定的回收率。     

盐酸克伦特罗时间分辨荧光免疫检测方法的建立

采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立快速、高灵敏度的盐酸克伦特罗(CLB)全自动检测方法。以CLB-OVA包被96微孔板作为固相抗原,与游离CLB竞争限量的以Eu3+标记的抗CLB单克隆抗体,建立解离增强模式的荧光免疫分析体系检测CLB。该方法的灵敏度为0.03ng/mL,批内和批间变异系数分别为2.0%和8.9%,平均回收率为105.8%,与沙丁胺醇、莱克多巴胺的交叉反应率分别为0.96%和0.77%,结果表明,用TRFIA法检测CLB,灵敏度高、特异性强、稳定性好,具有良好的应用前景。     

莱克多巴胺检测方法最新研究进展

莱克多巴胺是一种是苯乙醇胺类β2-兴奋剂,有营养再分配的作用,常作为"瘦肉精"克伦特罗的替代品非法应用在畜牧养殖业中。因此,加强食品中莱克多巴胺残留的监测极为重要。本文综述了莱克多巴胺残留检测方法的最新进展,为食品中莱克多巴胺残留的监测提供了技术保证。     

高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉和猪肝中 22种β-激动剂

目的 建立一种用高效液相色谱-串联质谱法检测猪肉和猪肝中22种β-激动剂(特布他林、西马特罗、沙丁胺醇、非诺特罗、氯丙那林、莱克多巴胺、克仑特罗、妥布特罗、喷布特罗、福莫特罗、异丙喘宁、苯乙醇胺A、沙美特罗、马喷特罗、马布特罗、溴布特罗、苯氧丙酚胺、班布特罗、溴代克伦特罗、克仑潘特)、赛布特罗和卡布特罗)的方法。方法 样品粉碎后,在pH5.2的乙酸铵缓冲液中,用β-盐酸葡萄糖醛苷酶-芳基硫酸酯酶水解, 水解液经正己烷除脂后,用阳离子交换柱净化,再浓缩复溶后用高效液相色谱-串联质谱测定。采用内标法对克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、西马特罗、马布特罗、马喷特罗、赛布特罗和沙美特罗进行定量,其余化合物采用外标法进行定量。目标化合物的回收率在80%～125 %之间,线性范围为0.5μg/kg～100μg/kg,相关系数均大于0.992。方法的定量限均大于0.5μg/kg。结论 方法灵敏、快速、简便,适合于同时定量检测猪肉和猪肝中多种β-激动剂。     

新型瘦肉精西马特罗胶体金快速检测卡的制备

应用胶体金免疫层析技术,通过对标记抗体的pH值、抗体浓度以及重悬液的条件优化,进行西马特罗胶体金快速检测卡的研制。结果表明,其灵敏度达到0.1ppb。该检测卡简单、快速、灵敏度、特异性、稳定性、重复性好,与盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等常见的瘦肉精均无交叉反应。检测86份猪组织样品与ELISA结果符合率为91.7%。结果表明,研制的西马特罗胶体金快速检测卡,可应用于基层养殖、屠宰、市场环节动物及动物产品的的现场快速检测。     

超高效液相色谱-电喷雾串联技术测定猪组织中7种β-兴奋剂

2 g猪组织样品经β-葡萄糖苷酸酶酶解,0.2 mol/L高氯酸沉淀蛋白,用乙酸乙酯-异丙醇(6+4,V/V)和叔丁基甲醚提取,旋转蒸发器减压蒸干,正己烷脱脂后,样液用UPLC分离,电喷雾串联四级杆质谱进行检测,本方法研究的7种β-兴奋剂(克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、利托君、特布他林、班布特罗和异舒普林)的线性范围为0.25～500μg/kg,线性相关系数r>0.99;0.5～10μg/kg 的添加水平范围内的平均回收率为75.2%～96.7%;相对标准偏差为5.6%～13.1%;方法检出限(LOD)为0.1～0.25μg/kg.     

高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉和猪肝中22种β-激动剂

目的建立一种用高效液相色谱-串联质谱法检测猪肉和猪肝中22种β-激动剂(特布他林、西马特罗、沙丁胺醇、非诺特罗、氯丙那林、莱克多巴胺、克仑特罗、妥布特罗、喷布特罗、福莫特罗、异丙喘宁、苯乙醇胺A、沙美特罗、马喷特罗、马布特罗、溴布特罗、苯氧丙酚胺、班布特罗、溴代克伦特罗、克仑潘特、赛布特罗和卡布特罗)的方法。方法样品粉碎后,在pH 5.2的乙酸铵缓冲液中,用β-盐酸葡萄糖醛苷酶-芳基硫酸酯酶水解,水解液经正己烷除脂后,用阳离子交换柱净化,再浓缩复溶后用高效液相色谱-串联质谱测定。采用内标法对克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、西马特罗、马布特罗、马喷特罗、赛布特罗和沙美特罗进行定量,其余化合物采用外标法进行定量。结果目标化合物的回收率为80%~125%,线性范围为0.5~100μg/kg,相关系数均大于0.992。方法的定量限均不大于0.5μg/kg。结论本方法灵敏、快速、简便,适合于同时定量检测猪肉和猪肝中多种β-激动剂。