蛋白质芯片检测牛乳中乳铁蛋白条件的优化研究

目的优选并确定蛋白质芯片检测牛乳中乳铁蛋白(lactoferrin,Lf)的检测条件。方法利用蛋白质芯片技术,采用双抗夹心的方式,通过点样探针选择试验、点样一致性试验、棋盘滴定试验、浓度倍比试验、生物检测限试验及检测下限试验最终优化出针对目标蛋白的最佳检测条件。结果最终确定以Lf鼠单抗75#为点样探针,预点样46点,46点至90点为点样一致性区段;点样探针浓度为0.5 mg/ml,检测抗体效价为1∶2 000,在0.6~612ng/ml之间剂量-反应关系呈现S型曲线,其线性范围在9.56~306 ng/ml之间;检测下限为1.68 ng/ml,生物检测限为3.59 ng/ml;建立了对Lf具有最佳回归系数(r=0.998)的回归方程与标准曲线。结论此研究优化了利用蛋白质芯片技术检测Lf的试验条件,为建立定量检测Lf的蛋白质芯片平台奠定了基础。     

乳铁蛋白及其生理功能

乳铁蛋白是一种天然糖蛋白,主要存在于哺乳动物各种外分泌物中。因乳铁蛋白在抑菌、抗病毒、免疫调节、促进铁吸收等方面具有独特生理功能,从而对乳铁蛋白开发和应用具有广阔前景。     

乳铁蛋白研究现状

文章综述了乳铁蛋白最新研究成果，主要包括乳铁蛋白分子结构、分离提取方法、生物学功能、乳铁蛋白基因及重组乳铁蛋白的研究现状，介绍了乳铁蛋白及其活性多肽（抗菌肽、促进细胞生长肽）的抗微生物（细菌、病毒、真菌）作用、促进细胞生长作用、免疫增强作用、抗氧化及抗肿瘤作用、参与铁代谢过程等作用，对铁蛋白在临床及食品工业中的应用作了分析。     

乳铁蛋白

本文概述了乳铁蛋白的基本性质、分离方法和生物活性．并对其开发利用提出展望。乳铁蛋白是一种铁结合糖蛋白，它能调节动物体的多种生理功能和影响铁的代谢，这些生物活性和铁量、盐类、ＰＨ、抗体、介质密切相关；色谱法被认为是生产高纯乳铁蛋白的有效方法．超滤法可用于食品级乳铁蛋白的分离。     

酶解牛乳铁蛋白制备乳铁素 B的酶解条件研究

乳铁素B是牛乳铁蛋白经胃蛋白酶酶解后所得到的最重要的抗菌肽，乳铁蛋白酶解生成乳铁素后抗菌活性大大增强。通过正交试验确立了牛乳铁蛋白酶解制备乳铁素B的最佳条件，指出在底物质量浓度为50g／L，酶与底物质量浓度比为1：30(质量比)，酶解时间为60min时所得的乳铁素质量浓度及活性较好。     

乳铁蛋白的分离工艺研究

讨论了从牛初乳中分离乳铁蛋白的工艺。结果表明，牛初乳经过离心脱脂得到脱脂乳，加入带羧甲基的弱酸性阳离子交换剂CM-Sepharose Fast Flow在4℃下进行动态吸附，用去离子水将没有吸附上的杂蛋白冲洗掉，然后使用质量分数为1．5％和5％的NaCl溶液进行阶跃洗脱；经过两步阶跃洗脱得到的乳铁蛋白纯度可达95％以上。     

乳铁蛋白的国内外研究动态及趋势

乳铁蛋白是一种铁结合性糖蛋白,具有多种生物学功能,近年来成为国内外研究的热点。本文综述了乳铁蛋白的近期研究热点:活性乳铁蛋白的开发应用,高效表达人乳铁蛋白的转基因技术进展,工业化生产途径的最新研究以及乳铁蛋白的开发应用前景。     

乳铁蛋白与肿瘤关系的研究进展

乳铁蛋白是一种天然糖蛋白,主要存在于母乳中,具有多种生物学功能。近年来,一些研究认为,乳铁蛋白具有化学预防和抗肿瘤作用。本文就乳铁蛋白和肿瘤的关系作一综述。      

乳铁蛋白的抑菌作用及其机制

叙述了乳铁蛋白和乳铁蛋白多肽的抗菌机制。包括:乳铁蛋白的结构特性、抗病毒、抗菌功能、抗菌机制、影响抑菌活性的因素等,并对其应用前景作了展望。     

富硒酵母的选育及其发酵条件的优化试验

通过对一株耐硒酵母进行UV和60Co逐级诱变,获得一株产量高的突变株Y7,发酵液的硒总含量达19mg/L,是出发菌株的1.58倍,经多次传代试验,证明其稳定性良好。通过单因素、L16(37)正交试验对其发酵培养基和培养条件进行优化,试验表明富硒酵母发酵培养基的最佳配方是:蔗糖6%,牛肉膏1%,蛋白胨1%,K2HPO4 0.15%,亚硒酸钠35μg/L;最佳培养条件:初始pH为4.0,温度32℃,装液量60mL/250mL摇瓶,转速200r/min,10%(v/v)接种量,培养48h。富硒酵母的硒总含量达23mg/L以上,是出发菌株的1.92倍。     

灵芝发酵芹菜渣条件优化研究

目的获取富含膳食纤维的全营养芹菜汁饮品。方法芹菜渣为芹菜榨汁的副产物,含有芹菜中几乎全部的膳食纤维,利用灵芝发酵产生富含可溶性膳食纤维的发酵液,并对影响其发酵的因素进行初步探索。结果水:芹菜渣为260%(v/w),初始pH5.0,黄豆饼粉1.5%,FeSO4.7H2O 0.008%适于芹菜渣的发酵,发酵产物中可溶性膳食纤维含量可达30.76g/L以上,固形物40.23g/L以上,pH5.0左右,适合与芹菜汁勾兑。结论灵芝发酵芹菜渣所得发酵产品可以弥补芹菜汁中膳食纤维的不足,可获得全营养芹菜汁产品。     

透明质酸产生菌摇瓶发酵工艺条件的研究

研究了透明质酸产生菌的摇瓶发酵条件。对摇瓶发酵条件进行了优化,确定了最佳发酵培养基、最适培养条件。结果表明:摇瓶发酵培养基的组成为4%的淀粉葡萄糖水解液,2%蛋白胨和酵母粉的混合有机氮源及0.5%硝酸钠为无机氮源,MgSO4·7H2O为0.1%,KH2PO4为0.2%。发酵温度为37℃,接种种龄为14~16h之间,摇瓶培养时,500mL三角烧瓶装液量为20mL时,可获得的产量最大。     

丁醇高产菌株诱变育种及发酵条件优化研究

利用低温等离子体和亚硝基胍(NTG)对兼性厌氧产丁醇芽孢杆菌(Bacillus sp.)C2菌株进行复合诱变,分离筛选得到3株丁醇和总溶剂产量均有明显提高的突变菌株,其发酵7%玉米醪液后丁醇和总溶剂产量分别达到12.59g/L、12.44g/L、12.74g/L和20.36g/L、20.14g/L、20.79g/L,比出发菌株分别提高21.6%～24.5%和15.4%～19.1%.对编号为414的突变菌株发酵条件进行优化,在100mL三角瓶发酵体系中,该菌株的最适发酵条件为装液量100mL,种龄24h,接种量10%,pH 7(自然),37℃静置发酵72h,在此条件下,414菌株发酵7%玉米醪液产丁醇和总溶剂量分别达到12.58g/L～13.77g/L和21.25g/L～22.27g/L.     

毕赤酵母高效表达人乳铁蛋白的研究

将人乳铁蛋白全长基因克隆至酵母表达载体pPIC9K中，并建立hLF／pPIC9K／SMD1168酵母表达系统，在细胞高密度发酵条件下，乳铁蛋白表达量约1000mg／L，并具有天然蛋白相似的糖基化结构。本研究为商业化生产人乳铁蛋白提供了理论依据。     

一株纤维素酶真菌的筛选鉴定及产酶条件优化

以羧甲基纤维素钠为唯一碳源,从自然界筛选出一株纤维素酶高产菌HJC-79,通过单因素试验和正交试验对其培养基成分和发酵条件进行优化。结果表明,经形态观察和ITS序列分析,菌株HJC-79被鉴定为杂色曲霉（Aspergillus versicolor）。最佳培养基成分为蔗渣、麸皮和Mandels营养盐液的添加量分别为2%、9%、89%;最佳发酵条件为发酵温度33 ℃,初始pH值为4,接种量9.0%,发酵时间48 h。在此优化条件下,葡聚糖内切酶、β-葡萄糖苷酶和滤纸酶酶活分别为2.22 U/mL、1.93 U/mL、1.53 U/mL,分别比优化前提高了125.55%、76.37%和172.47%。     

黄曲霉毒素B1降解菌的筛选鉴定及发酵条件优化

该研究采用香豆素筛选模型,从酒醅、大曲、榨菜、酸豆角等样品中分离筛选降解黄曲霉素B1（AFB1）菌株,通过形态学观察及分子生物学技术对筛选菌株进行鉴定,并以黄曲霉毒素B1降解率为评价指标,采用单因素及正交试验对筛选菌株的发酵条件进行优化。结果表明,共初筛出23株可利用香豆素菌株;采用高效液相色谱（HPLC）法复筛出1株AFB1高效降解菌,其降解率最高,为86.22%,菌株编号为HB022。菌株HB022被鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）,其最优发酵条件为发酵温度37 ℃、初始pH 7.2、接种量5%、发酵时间72 h。在此优化条件下,AFB1的降解率为91.13%。     

产愈创木酚类细菌的培养条件优化

采用响应面试验对产愈创木酚细菌的培养条件进行优化。以从某酒厂窖泥中筛选到的高产愈创木酚的戴尔福特菌（Delftia sp.）为基础,考察不同因素对细菌产愈创木酚的影响。首先采用单因素试验对麸曲培养基水分含量、培养温度、培养时间和接种量进行分析优化,然后根据单因素试验结果采用响应面试验对培养条件进行优化。结果表明,影响细菌产愈创木酚的因素主次顺序为培养温度＞接种量＞培养时间＞水分,细菌产愈创木酚最佳工艺条件为水分81.5%、培养时间50 h、接种量11.0%、培养温度38 ℃。在此优化条件下,愈创木酚类物质含量为3.89×10-4 g/g。     

红曲色素高产菌株的优选及其发酵条件优化

对实验室保藏的红曲霉菌株进行了优选,获得了产量较高的红曲色素生产菌株Monascus purpureus M5,其液态发酵的红色素产量达到了154.5U/mL.对M5发酵产色素的碳源、氮源、初始pH值等进行了优化,以70g/L大米粉、30g/L可溶性淀粉、10g/L黄豆粉、1g/L NaNO₃为发酵培养基,初始pH值4.0,35℃条件下培养6d,M5摇瓶发酵红色素的产量达到195.8U/mL.在5L发酵罐中对M5进行葡萄糖补料分批发酵培养,其色素产量在108h时达到最大值253.2U/mL,相比摇瓶分批发酵提高了29.3％,成效显著.     

乳酸菌在腌制酸菜中最适发酵条件的研究

通过从酸菜汁中分离选育出的二株植物乳杆菌和短乳杆菌的发酵条件的研究，利用液体深层发酵，得出了在大白菜发酵中的最适发酵条件。发酵温度为35℃，NaCl含量1％至2％，接种量为4％，生渍工艺、发酵成熟时间为48h，乳酸含量为1．25g/mL，生渍加0.5％的蔗糖，成熟时间则为36h，乳酸含量1．4g／mL。对照自然发酵成熟时间需要72h以上，乳酸含量0．8％。接菌发酵产品色泽、口味优于自然发酵。