前列腺酸性磷酸酶(PAP)免疫放射分析试剂盒的研制

采用包被管分离技术，利用两株抗PAP单克隆抗体，双位点夹心免疫 血清中PAP含量。结果表明，该试剂盒分析灵敏度为0.1μg/L；批内变异系数为（8．8－9．6）％；批间变异系数为（7．7－12．3）；回收率为（96．3－105．0）％；标准曲线范围内2．5－200．0μg/L。与DPC公司CAC PAP IRMA试剂盒进行方法学比较，相关系数r=0.909。     

HPLC示差折光法测定水产品中还原糖、磷酸化单糖和蔗糖

以市售淡水鱼为试材,建立水产品中还原糖(葡萄糖、核糖)、磷酸化糖(磷酸化核糖和磷酸化葡萄糖)和蔗糖的定性、定量检测方法。对鱼肉中各糖进行检测,建立鱼肉中糖的高效液相示差折光分析法检测法。将鱼肉分成背部肌肉和腹部肌肉两个部分,用乙醇/水提取鱼肉中各糖物质,经树脂吸附处理后,对鱼肉中各糖物质进行分析。磷酸化糖检测,首先用碱性磷酸酶脱磷酸化,然后用同法进行检测。结果显示:各糖物质分离效果较好,方法学验证,各物质线性关系良好,回收率在70.2%~98.5%之间,重复性RSD均小于5%。     

肌肉焦磷酸酶和三聚磷酸酶的特性与应用

磷酸盐是肉制品加工中常用的添加剂,它们可以改善肉和肉制品的特性,如适口性、凝胶特性、乳化特性等。磷酸盐在肉中起作用是在其添加后和水解过程中。磷酸盐水解是肉中多聚磷酸酶的作用,其中焦磷酸酶（pyrophosphatase,PPase）和三聚磷酸酶（tripoly phosphatase,TPPase）是主要的作用酶类。本...     

N-乙酰-D-氨基葡糖体外对小鼠淋巴细胞增殖和细胞内钙调蛋白和钙调神经磷酸酶表达的影响

目的 研究N-乙酰-D-氨基葡糖(N-AcGA)对小鼠淋巴细胞的增殖作用及对细胞内钙调蛋白(CaM)和钙调神经磷酸酶(CaN)表达的影响.方法 以小鼠淋巴细胞为实验材料,通过MTT法及流式细胞仪研究N-AcGA对小鼠淋巴细胞增殖和对淋巴细胞内CaM与CaN表达的影响.结果 N-AcGA在200～50 mg/L浓度范围内对小鼠淋巴细胞增殖有显著的促进作用,浓度为200 mg/L时作用极为显著.N-AcGA可增加小鼠淋巴细胞内CaM和CaN的表达.加入N-AcGA 72 h后CaM的平均阳性细胞百分率由61.6%上升到72.6%,CaN的平均阳性细胞百分率由75.6%上升到86.0%.结论 N-AcGA能够诱导小鼠淋巴细胞增殖,并促进细胞内CaM与CaN的表达.     

半胱胺对鲤鱼生长及血液生化指标的影响

在鲤鱼基础饵料中分别添加0、200、400、600和800 mg/kg的半胱胺,经过42 d的饲养试验,研究不同水平的半胱胺对鲤鱼生长、相关激素水平、血清生化指标的影响.结果表明:①与对照组相比,鲤鱼饵料中添加200、400、600 mg/kg半胱胺均不同程度提高了鲤鱼的生长性能,400 mg/kg半胱胺显著提高了鲤鱼的相对增重率(P＜0.05),并降低了鲤鱼的饵料系数(P＞0.05).②与对照组相比,400 mg/kg半胱胺显著提高了鲤鱼血液中GH水平(P＜0.05),T3水平也高于其他各组(P＞0.05).③400 mg/kg半胱胺组的碱性磷酸酶活性、血糖和总蛋白质水平均高于其他各组,其中总蛋白质水平显著高于对照组(P＜0.05).分析认为,本试验鲤鱼饵料中半胱胺适宜的添加量为400 mg/kg.     

抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白表达条件的初步研究

初步研究抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)的表达条件,提高CBLscFv-AP融合蛋白的表达量。采用液体发酵法培养抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)基因工程菌,研究不同宿主菌、初始pH、诱导时期、诱导时间和培养基对CBLscFv-AP融合蛋白表达量的影响以及重组质粒的稳定性。选用E·coliBL21(DE3)pLysS为宿主菌,在初始pH为7·4的LB培养基中培养至A600nm为0·8～0·9时,诱导表达8h,为CBLscFv-AP融合蛋白最佳表达条件。而且重组质粒pBV220-scFv-phoA具有较好的结构稳定性。在该表达条件下,提高了CBLscFv-AP融合蛋白的表达量,为进行大规模发酵生产CBLscFv-AP融合蛋白奠定基础。     

N-乙酰-D-氨基葡糖体外对小鼠淋巴细胞增殖和细胞内钙调蛋白和钙调神经磷酸酶表达的影响

目的 研究N-乙酰-D-氨基葡糖（N-AcGA）对小鼠淋巴细胞的增殖作用及对细胞内钙调蛋白（CaM）和钙调神经磷酸酶（CaN）表达的影响。方法 以小鼠淋巴细胞为实验材料,通过MTT法及流式细胞仪研究N-AcGA对小鼠淋巴细胞增殖和对淋巴细胞内CaM与CaN表达的影响。结果 N-AcGA在200～50 mg/L浓度范围内对小鼠淋巴细胞增殖有显著的促进作用,浓度为200 mg/L时作用极为显著。N-AcGA可增加小鼠淋巴细胞内CaM和CaN的表达。加入N-AcGA 72h后CaM的平均阳性细胞百分率由61.6%上升到72.6%,CaN的平均阳性细胞百分率由75.6%上升到86.0%。结论 N-AcGA能够诱导小鼠淋巴细胞增殖,并促进细胞内CaM与CaN的表达。     

蛋白磷酸酶2A抑制剂的研究进展

蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A, PP2A)是机体细胞内重要的蛋白酶,它参与基因表达、神经传递、肌肉收缩、细胞周期等生理过程。截止目前的研究表明,PP2A抑制剂在阿尔兹海默症、癌症、糖尿病等疾病的治疗中具有潜在的应用价值。因此,对PP2A抑制剂的研究有着重大的意义。本文综述国内外对于PP2A抑制剂的研究进展,重点阐述几种重要的外源性PP2A抑制剂的机制及其临床作用,旨在为PP2A抑制剂的药物研发及其应用提供参考。     

鲨鱼单域抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的表达及热稳定性分析

酶标抗体的稳定性对酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)至关重要,但常规化学偶联方法制备的酶标抗体具有热稳定性不足的缺点,这限制了酶标抗体在ELISA中的应用。本研究利用基因工程技术克隆表达出碱性磷酸酶与特异性鲨鱼单域抗体的融合蛋白,并对融合蛋白的亲和力和热稳定性进行了研究。结果表明:在16 ℃下,0.05 mmol/L的异丙基β-D-1-硫代半乳糖苷(Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导可实现融合蛋白的可溶性表达,表达出的融合蛋白分子量约为63 kDa,与目标抗原的亲和常数可达7.80×10^-8 mol/L,具有良好的抗原结合能力;融合蛋白在58 ℃处理180 min后热稳定性良好,证明该融合蛋白可以作为ELISA检测中一种潜在的免疫诊断剂。

     

基于双菌耦合发酵策略的烟酰胺单核苷酸合成

本研究构建了分别含有烟酰胺核苷激酶（nicotinamideribosidekinase,NRK）和多聚磷酸酶（polyphosphatekinase,PPK）的双菌耦合发酵体系,实现了基于PPK的ATP再生系统在烟酰胺单核苷酸（nicotinamide mononucleotide,NMN）生产中的应用。首先分别构建表达NRK1和NRK2的工程菌株,筛选得到高活性的大肠杆菌（Escherichia coli）BL21(DE3)-pET28a-NRK1,NMN产量5.17 g/L,产率77.4%;然后对NRK1的诱导表达条件进行优化,发现低温16℃、异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷0.7 mmol/L、接种量3%、诱导时长22 h更利于蛋白的可溶性表达;进一步对E. coli BL21(DE3)-pET28a-NRK1合成NMN的最优体系进行探索,发现在菌体质量浓度100 g/L、温度18℃、时间12 h、ATP与烟酰胺核糖（nicotinamide riboside,NR）浓度比1∶1.5时,NMN产量最高为5.73 g/L,产率85.78%;最后,通过对E. coli BL21(...