多重PCR同时检测常见8种食物过敏原

依据大豆Lectin基因,小麦Gliadin基因,花生Arah3基因,腰果Ana o3基因,鱼和虾16S rRNA,牛和鸡线粒体DNA设计特异性引物序列.在单一PCR方法基础上,建立2种4重PCR方法检测8种食物过敏原的技术.该方法检测周期短,具有较好的特异性和灵敏性,可用于对食品中多种食物过敏原的检测和监控.     

食用大豆油中转基因成分的检测

食用油脂中转基因成分的检测是当前食品检验工作的一个主要方面。针对食用油脂中DNA含量极低、DNA序列片段短、破坏严重的特点,建立了食用油脂中DNA提取方法,通过实时荧光PCR可检测出大豆内源基因(Lectin)以及外源抗除草剂基因EPSPS,为食用油脂进行核酸类生物性检测提供了一种简捷有效的方法。     

两种PCR方法检测食品中花生过敏原Arah1成分

采用套式PCR和荧光实时定量PCR两种方法检测食品中花生主要过敏原Ara h1基因成分,从而推断食品中是否含有花生过敏原成分。根据GenBank提供的花生主要过敏原基因Ara h1 DNA序列(登录号为AF432231)的中一段序列分别设计2对内外特异性引物,扩增目的基因片段来建立套式PCR方法;再用上述内引物扩增目的片段,建立SYBRGreenⅠ荧光实时定量PCR方法,绘出拷贝数-CT标准曲线;并通过这2种PCR方法检测8种食品中含有花生主要过敏原Ara h1基因成分。套式PCR方法具有较高的特异性和灵敏度,SYBR GreenⅠ荧光实时定量PCR方法的标准曲线在3×102至3×108 copies范围内线性关系良好,R2值为0.993 5,检测低限设定为3×103 copies。2种方法检测8种食品样品,结果均与食物过敏原标注内容相符。本研究建立的2种方法具有快速、灵敏等优点,可用于食品中花生主要过敏原基因Ara h1成分的检测。     

食用植物油DNA提取方法的优化

目的建立可从不同种类食用植物油中提取得到高质量的、可用于分子生物学检测的DNA的提取方法。方法使用2种改进十六烷基三甲基溴化铵法(cetyltrimethylammonium bromide,CTAB)和2种商用试剂盒提取6种食用植物油的DNA,通过紫外分光光度计检测所得DNA样品的浓度和纯度。设计特异性引物,并通过普通聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测DNA样品是否可用于分子生物学分析。结果使用改良CTAB法1及2种商业试剂盒无法有效提取得到的6种食用植物油的DNA,样品无法满足分子生物学检测的需要,使用改良CTAB法2提取得到的6种食用植物油DNA纯度和浓度检测结果均为最佳,其提取的橄榄油、菜籽油、花生油DNA样品可用于后续实时荧光定量PCR检测。结论该方法可为橄榄油、菜籽油、花生油DNA提取提供有效手段,为食用植物油检测和研究奠定基础。     

转基因"华番一号"番茄的筛选和特异性的定性、定量PCR检测方法

为给转基因植物监测提供技术支持，建立了转基因“华番一号”番茄筛选和特异性的定性、定量PCR检测方法。转基因“华番一号”的筛选PCR检测主要以转基因通用元件CaMV35S启动子和NOS终止子为目的基因片段，特异性PCR检测以转基因外源重组子的CaMV35S启动子和反义EFE基因的相邻序列为目的片段；实验同时设立番茄的LAT52基因为转基因番茄定性、定量PCR检测的内对照基因。在所建立的PCR检测体系中，定性PCR筛选和特异性检测的检测极限为68个拷贝，实时定量PCR方法的检测极限为3个拷贝；筛选定量．PCR检测的定量极限为3个拷贝，特异性定量PCR检测的定量极限为25个拷贝。最后通过对2个已知含量的转基因番茄“华番一号”混合试样的检测，证明了该体系可以有效地用于转基因番茄“华番一号”的筛选和特异性的定性、定量PCR检测。     

食用油脂中DNA高效快速提取方法及实时荧光PCR检测技术的研究

针对食用油脂中提取高纯度和高得率DNA比较难的问题,通过与CTAB法比较研究,并用改良的试剂盒法从食用油脂中高效快速提取到了高纯度和高浓度的DNA,并用实时荧光PCR技术成功地检测出了食用油脂中的内源基因和外源基因.     

实时荧光定量PCR技术在食用油脂检测中的应用

荧光定量PCR检测技术具有快速、准确的优点,在转基因食品检测等领域得到了广泛的应用。采用荧光定量PCR技术进行油脂转基因、掺假检测也成为研究热点。利用不同油料作物所含有的独特核酸序列,采用荧光定量PCR技术可简单、高效、快速地检测出油脂中所含的特定核酸成分,从而判定油脂原料的构成,为打击食用油脂掺假造假提供判定依据。植物油的加工过程中都经过多个步骤的处理,其中的核酸降解严重,含量极低,所以从植物油中提取出较高质量的DNA是对油脂进行荧光定量PCR检测鉴定的关键。本文主要对油脂DNA提取方法及存在的难点、引物设计特点和结果分析进行了论述,以期为今后荧光定量PCR检测技术进一步推广与应用提供思路。     

荧光PCR方法定性和定量检测BT63转基因大米

采用实时荧光定量PCR技术,建立定性(量)鉴定转BT基因稻米成分的方法.根据稻米内源蔗糖磷酸合成酶(SPS)和结构特异性BT基因序列的特点设计引物和探针,可特异性地对转BT基因的稻米进行品种鉴定.把100%转BT基因稻米提取得到的DNA进行梯度稀释,作为标准DNA构建荧光定量标准曲线.检测限为0.5%,在0.5%水平上检测误差为20%.     

荧光定量PCR检测家蚕核型多角体病毒的研究初探

本文选用家蚕核型多角体病毒的单拷贝基因DNA聚合酶作为检测靶标,构建含有DNA聚合酶基因片段的质粒载体,作为标准品,试图运用荧光定量PCR技术对该病毒进行定量检测,以便于以后深入对病毒感染机制进行研究。试验结果初步证实,所构建的重组质粒可作为标准品用于荧光定量PCR试验,实时检测病毒在宿主中的数量。     

教你读懂预包装食用植物油标签

正预包装食品,指预先定量包装或者制作在包装材料、容器中的食品,预包装食用植物油便是其中一种,常见的有大豆油、菜籽油、花生油、芝麻油、食用植物调和油等。我国对预包装食用植物油的标签有严格规定。在选购时,可重点关注以下内容。看名称单一品种的食用植物油应使用该种食用植物油的规范名称,不得掺有其他品种油脂。例如,花生油就是以花生为油料生产的植物油,菜籽油就是以菜籽为油料生产的植物油。采用两种或两种以上食用植物油调配制成的食用油脂,产品名称应统一标注为"食用植物     

Detection of peanut using real-time polymerase chain reaction

Preliminary results are presented on a sensitive and robust assay for the identification of peanut in commercial products using real-time PCR technology. Peanut specific primers and probe, designed using the Arah 2 gene, were optimised for real-time PCR using an ABI PRISM 7700. Commercial extraction kits employing different technological strategies were assessed for the extraction of PCR quality peanut DNA template. The specificity of the primer and probe set was determined using a wide range of food items and the limit of detection and quantification calculated using dilutions of peanut DNA. The assay was used to detect spiked or trace level of peanut in commercial samples and was finally used to detect peanut in a biscuit prepared with 2 ppm of lightly roasted peanut powder.An erratum to this article can be found at     

TaqMan探针荧光定量PCR检测花生油中掺入棕榈油的研究

根据棕榈内源基因MT3 -B设计引物和TaqMan探针,采用基因重组技术构建用于检测棕榈基因MT3 -B的重组质粒作为绝对定量标准品,建立标准曲线,对花生油中掺入棕榈油1% ～40%梯度混合油品提取DNA进行棕榈成分定量检测.结果表明,重组质粒标准品荧光定量标准曲线对数线性回归分析相关系数(R2)为0.996;花生油中掺入棕榈油达到5%时,可检出每亳升混合油品中棕榈MT3 -B基因17.431 copies,检测的重复性和特异性好.     

Detection of sesame seed DNA in foods using real-time PCR

The detection of potentially allergenic foods, such as sesame seeds, in food products is a major concern for the food-processing industry. A real-time PCR method was designed to determine if sesame seed DNA is present in food products. The PCR reaction amplifies a 66-bp fragment of the sesame seed 2S albumin gene, which is detected with a sesame-specific, dual-labeled TaqMan probe. This reaction will not amplify DNA derived from other seeds present in baked goods, such as pumpkin, poppy, and sunflower seeds. Additionally, this assay will not cross-react with DNA from several tree nut species, such as almond, Brazil nut, cashew, hazelnut, and walnut, as well as four varieties of peanut. This assay is sensitive enough to detect 5 pg of purified sesame seed DNA, as well as sesame seed DNA in a spiked wheat cracker sample.     

氨基化二氧化硅颗粒应用于大豆油DNA提取研究

建立了以氨基化二氧化硅为载体提取大豆油DNA并进行转基因成分检测的方法。结果表明：利用氨基化二氧化硅法富集提取大豆毛油中的DNA质量浓度高于国标法;以氨基化二氧化硅法提取的大豆毛油DNA为模板成功扩增出了大豆内源基因、外源基因片段和转基因调控元件,而精炼油DNA未扩增出。氨基化二氧化硅法只适用于大豆毛油DNA的提取,而不适用于精炼油。     

Detection of olive oil using the Evagreen real-time PCR method

A sensitive real-time PCR method using the novel fluorescence stain Evagreen was established for detection of olive oil. First, a comparative study was made of two different methods for the recovery of high quality DNA from oil samples. Thereby, the Promega wizard DPSF kit proved to be the most suitable for recovery of DNA from oil samples. Second, an olive-specific pair of primers was designed based on the sequence of an olive plasma intrinsic protein cDNA sequence. Experiments with 13 samples including olive, soybean, sesame, sunflower seed, pumpkinseed, walnut, rapeseed, rice, peanut, maize, pig, chicken and fish confirmed that this pair of primers is highly specific for olive. Additional experiments indicated that the absolute detection limit of our test is 0.07 ng olive DNA and that 0.5% olive DNA can be detected against background of 2 ng/μl sesame DNA.     

2种用于检测市售核桃露(乳)饮品中花生、大豆成分方法的比较分析

摘 要: 目的 比较实时荧光定量PCR法与酶联免疫吸附法在核桃露(乳)饮品中检测花生和大豆成分的灵敏性的差异。方法 应用实时荧光定量PCR方法检测样本DNA的核桃、花生和大豆源性成分, 应用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测样本的花生和大豆特征蛋白成分。结果 加热处理对实时荧光PCR和ELISA法检测花生和大豆的结果均有显著性影响。实时荧光定量PCR方法检出2个品牌4批次样本含有花生源性, 3个品牌的6批次样本含有大豆源性; ELISA方法除检出这些批次含有花生和大豆源性成分外, 另检出3个品牌5批次样本含有大豆源性成分。ELISA方法与实时荧光定量PCR方法的大豆检测结果差异主要集中在低蛋白浓度样品中, 这与2类方法的检出限不同有关。结论 鉴于2类方法检测结果在高浓度水平的高度一致性, 说明实时荧光PCR和ELISA方法对花生和大豆源性成分检测结果均具有很高的可靠性。     

葵花籽调和油抗氧化性研究

以葵花籽油为主,选用新鲜的花生油、小麦胚芽油作为调和油的原料油,按照一定比例调制成富含VE的葵花籽调和油.再通过正交实验和二次回归正交实验确定了大蒜油、脂溶性茶多酚等作为抗氧化剂在调和油中的最佳添加量.调和油储藏6个月后,以油中VE、酸值、过氧化值和羰基值来衡量其抗氧化效果.     

茶籽油DNA提取方法的比较

针对食用油脂中DNA含量极低、DNA序列片段短、破坏严重的特点,通过实时荧光PCR法检测植物的通用tRNALeu,对茶籽油DNA几种提取方法进行比较,建立了食用油脂中DNA提取新方法。结果证明:较之于文献中常见植物油DNA几种提取方法,用改进方法提取的DNA含量高、纯度高,可以作为PCR反应的模板,为食用油脂进行核酸类生物性检测提供了一种简捷有效的方法。     

花生油生物精炼法去除黄曲霉毒素的研究

目前已经筛选出能够固态发酵花生粕降解其中黄曲霉毒素B1(AFB1)的微生物菌株,因此可以利用发酵液提取粗酶来降解花生油中的AFB1,并将这种酶反应引入到花生油的精炼工艺中.通过对比精炼工艺,将酶法脱胶(采用磷脂酶A1)与去毒反应相结合.对脱胶去毒过程中反应温度、NaOH添加量、去毒粗酶添加量、磷脂酶A1添加量、反应时间等进行单因素实验,并通过正交实验确定脱胶去毒实验优化工艺条件为:反应温度40℃,反应时间4h,NaOH添加量0.025％,磷脂酶A1添加量600 mg/kg.以添加AFB1为100 μg/kg的花生毛油为实验对象,取样10 g,在去毒粗酶添加量100 μL及优化条件下,AFB1去除率高达81％,去毒反应后花生油的脱胶效果也达到精炼要求(磷含量降至13 mg/kg).