不同温度下GS0202菌产酶差异的研究

利用电泳法及DEAE-Cellulose DE-52离子交换柱层析法对Arthrobacter chloropHenolicusGS0202菌分别在20和60℃下培养时产两种不同的酶进行研究。结果表明,20℃下培养所产的酶能水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷F2,60℃下培养所产的酶能水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷Rg3;找到了4条差异蛋白带,它们的分子质量分别约为66、47、35、22 ku;将60℃下培养得到的酶分离提纯,其纯酶的分子质量经电泳鉴定约为66 ku,与1号差异带的分子质量吻合。     

G8r菌产人参皂苷糖苷酶的酶性质及酶水解作用

对由Absidia sp.G8r菌产的人参皂苷糖苷酶(Glc8)进行了分离纯化,并对其酶性质和酶水解作用进行了研究.结果表明,该酶的分子质量约为72 ku,酶反应的最适温度和pH分别为30 ℃和5.0,在20～60 ℃、pH 3.0～7.0条件下稳定性较好.该酶水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷C-K,水解过程是分步进行的...     

转化人参二醇类皂苷为C-K的特异人参皂苷糖苷酶的纯化及性质

研究了真菌sp.g848p发酵产生的把人参二醇类皂苷PPD转化为人参皂苷C-K的特异的人参皂苷糖苷酶,及该酶的分离提纯。该酶经DEAE-Cellulose离子交换柱分离、聚丙烯酰胺凝胶电泳提纯,得到纯酶,其酶的分子质量约为74 ku。这种特异的人参皂苷糖苷酶能水解人参二醇类皂PPD生成稀有人参皂苷C-K,该酶最适反应时间为24 h,最适反应温度为45℃,最适pH为5.0。     

转化人参二醇类皂苷为C-K的特异人参皂苷糖苷酶的纯化及性质

研究了真菌sp.g848p发酵产生的把人参二醇类皂苷PPD转化为人参皂苷C-K的特异的人参皂苷糖苷酶,及该酶的分离提纯。该酶经DEAE-Cellulose离子交换柱分离、聚丙烯酰胺凝胶电泳提纯,得到纯酶,其酶的分子质量约为74 ku。这种特异的人参皂苷糖苷酶能水解人参二醇类皂PPD生成稀有人参皂苷C-K,该酶最适反应时间为24 h,最适反应温度为45℃,最适pH为5.0。     

GS0202菌产人参皂苷-β-葡萄糖苷酶条件及其酶的反应条件

为提高Arthrobacter chlorophenolicus GS0202菌所产人参皂苷-β-葡萄糖苷酶水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷Rg3的能力,采用单因素研究方法,对菌体发酵条件,及其所产酶的酶反应条件进行了研究.结果表明,菌体发酵的最适培养基组成为胰蛋白胨10 g,酵母粉 5 g,氯化钠10 g,水1 L;诱导物为人参总皂苷,其加入量为3.2 mg/mL,培养温度为28 ℃;酶反应的最适条件为25 ℃,pH 4,底物质量浓度为3 mg/mL.     

GS0202菌产人参皂苷-β-葡萄糖苷酶条件及其酶的反应条件

为提高Arthrobacter chlorophenolicus GS0202菌所产人参皂苷-β-葡萄糖苷酶水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷Rg3的能力,采用单因素研究方法,对菌体发酵条件,及其所产酶的酶反应条件进行了研究。结果表明,菌体发酵的最适培养基组成为胰蛋白胨10 g,酵母粉5 g,氯化钠10 g,水1 L;诱导物为人参总皂苷,其加入量为3.2 mg/mL,培养温度为28℃;酶反应的最适条件为25℃,pH 4,底物质量浓度为3 mg/mL。     

从一种新筛选的菌中找出人参皂苷酶

从新筛选的AbsidaspF7菌中找出了人参皂苷酶。该皂苷酶能水解人参皂苷Rb1C 20位末端的一个β 葡萄糖基生成人参皂苷Rd的β 葡萄糖苷酶。酶的最佳反应条件:时间,4h;底物浓度,5mg/mL;温度,40℃;pH,5.0。     

从一种新筛选的菌中找出人参皂苷酶

从新筛选的Absida sp F7菌中找出了人参皂苷酶。该皂苷酶能水解人参皂苷Rb1 C-20位末端的一个β-葡萄糖基生成人参皂苷Rd的β-葡萄糖苷酶。酶的最佳反应条件：时间，4h；底物浓度，5mg/mL；温度，40℃；pH，5．0。     

植物来源穿山龙皂苷酶的分离提纯及其酶性质

对从麦麸中提取的穿山龙薯蓣皂苷酶进行分离提纯并对其酶性质进行鉴定.结果表明,该酶的分子质量约为65 ku;该酶不仅能水解穿山龙薯蓣皂苷的α-鼠李糖基,也能水解人参皂苷Rc的20-O-α-阿拉伯糖基和3-O-β-葡萄糖基,酶反应的最佳温度为40℃,最适pH值为5.     

两种人参皂苷糖苷酶的酶性质比较

利用DEAE-Cellulose DE52离子交换柱层析法及电泳法对由菌株Absidia sp.G8r在发酵培养中产生的人参皂苷糖苷酶(Glc8)和Absidia sp.G4r在发酵培养中产生的人参皂苷糖苷酶(Glc4)进行了分离纯化,并采用TLC法和分光光度计法对其酶反应条件和酶反应特性进行了比较.结果显示,两种酶的分子质量均在71～72 ku,最适酶反应pH是5.0,最适酶反应温度30 ℃,金属离子K+、Na+、Mg2+、Zn2+、Ca2+对酶反应的影响不大,Cu2+对人参皂苷糖苷酶有很明显的抑制作用.两种酶均具有专一性水解母环侧链末端的α-Gal、β-Glc键的特异性.实验结果表明,两种菌种产的两种人参皂苷糖苷酶是同一种人参皂苷糖苷酶.     

两种菌产皂苷糖苷酶的性质比较

对微生物Absidiasp.D0d菌产的薯蓣皂苷糖苷酶(RhaD)和微生物Absidiasp.A3r菌产的黄芪皂苷糖苷酶(RhaA)进行了分离纯化,并对它们的酶性质做了比较。RhaD的分子质量是59 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~8.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定。金属离子Na+、K+对酶反应基本没有影响,Mg2+、Zn2+、Ca2+、Cu2+、Fe3+对酶反应有抑制作用。酶反应动力学参数Km为19.26 mmol/L,Vmax为1.23 mmol/(L.h)。RhaA的分子质量是54 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~6.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定,Mg2+和Ca2+对RhaA的酶反应没有影响,Fe3+、Cu2+的抑制作用较为明显。酶反应动力学参数Km为17.86 mmol/L,Vmax为1.18 mmol/(L.h)。RhaD只能水解与穿山龙薯蓣皂苷母环结构相似的异螺甾烷醇型的皂苷上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。RhaA仅水解四环三萜环阿屯烷型的黄芪皂苷16上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。     

Arthrobacter sp.No.3细菌酶转化三醇类人参皂苷Rg1生成Rh1的反应条件

为了提高Arthrobacter sp.No.3 GS 0202新细菌所产人参皂苷糖苷酶水解人参三醇类皂苷Rg1生成人参三醇类皂苷Rh1的能力,采用薄层层析法和高效液相色谱法,对该菌的发酵条件及所产糖苷酶的反应条件进行了研究.结果表明,在30 ℃发酵条件下,人参皂苷酶的诱导物人参茎叶总皂苷存在下,该细菌产生较好.其粗酶...     

绞股蓝皂苷糖苷酶的分离纯化及酶性质的研究

为得到纯的绞股蓝皂苷糖苷酶,对Absidiasp.GYP4r菌所产的酶进行了分离提纯,并对其酶反应条件进行优化。该酶经75%饱和度的硫酸铵沉淀、DEAE-cellulose DE52阴离子交换柱分离、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳提纯,得到纯酶,分子质量约为68ku。酶学性质研究表明,酶反应的最适温度为40℃,在20～60℃稳定,最适pH为5.0,在pH 2.2～8.0稳定。Cu2+对该酶的活性有一定的抑制作用,Na+、K+、Mg2+、Zn2+、Fe3+、Ca2+对酶的活性没有影响。该酶的米氏常数为14.20mmol/L,最大反应速率为0.46mmol/(L.h)。     

三七提取中人参皂苷的转化

为提高三七自身含有的人参皂苷糖苷酶的作用,采用TLC和HPLC方法检测,研究了不同温度水提三七过程中人参皂苷的变化。结果表明,在80~100℃,15%以上三七中的人参皂苷Rb1、Rd、Re、Rg1转化为Rg2、Rg3、Rh2、C-K等稀有人参皂苷;提高温度到110~121℃时完全转化;而人参皂苷本身对温度很稳定,在80~121℃不发生转化。这说明三七提取中人参皂苷的变化,主要不是温度的作用,而可能是自身酶等三七内部的特殊物质起的作用。     

麦冬多糖糖苷酶的分离纯化及其酶性质

分离纯化了Absidia sp.O84s菌产的麦冬多糖糖苷酶,并对其酶性质进行了研究。结果表明,酶蛋白的分子质量为72 ku,最适pH为5.0,在pH 4.0~8.0范围内稳定。最适反应温度为40℃,在20~55℃范围内稳定。Ca+、K+、Na+、Fe3+、Mg2+Zn2+对该酶活性没有影响,Cu2+对酶活力具有抑制作用。酶反应动力学参数Vmax=0.131 5 mmol/(h.L),Km=2.375 mmol/L。     

人参皂苷葡萄糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达及包涵体的变复性

将人参皂苷葡萄糖苷酶的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中。对该基因进行诱导表达,并对包涵体进行变性和复性。结果显示,经终浓度为0.5mmol/L IPTG在30℃下诱导表达4h,进行SDS-PAGE分析,目的蛋白主要以包涵体形式存在并确定其分子质量约为75ku,与理论值基本相符,表明该基因得到了表达。包涵体经过变性和稀释复性后,经TLC活性检测,能够水解底物Rb1,表明具有人参皂苷葡萄糖苷酶的活性。