不同核酸提取方法用于检测明胶动物源性成分的比较分析

为筛选适用于食用明胶核酸提取的方法,用标准推荐方法、改良十六烷基三甲基溴化铵(Cetyltrimethyl ammonium bromide, CTAB)法、QIAGEN食品基因组脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid, DNA)提取试剂盒法和TIANGEN深加工食品因组DNA提取试剂盒法这4种方法提取牛皮明胶、牛骨明胶、猪皮明胶和鱼皮明胶的DNA。通过所提DNA纯度、浓度和物种来源荧光(Polymerase chain reaction, PCR)的扩增效率比较各种方法的提取效果。结果表明,标准推荐方法提取的DNA纯度较低,蛋白污染严重,荧光PCR扩增成功率低。TIANGEN试剂盒法提取DNA纯度高,但仅对皮来源明胶有较好的检测效果,适用范围有限。改良CTAB法和QIAGEN试剂盒法提取DNA纯度高、杂质少,对荧光PCR的抑制小。除鱼皮明胶外,所有样品均检测到了相应的动物源性,可用于大多数明胶样品的DNA提取。     

不同核酸提取方法用于多重荧光PCR法检测3种混合熟肉的比较分析

目的 探讨不同核酸提取方法以及蒸、煮、烤烹饪方式制作的混合熟肉制品的多重荧光定量PCR检测结果之间的差异。方法 用3种不同的提取方法：抽提法、离心柱法及磁珠法,提取经过蒸、煮、烤烹饪方式制作的牛、鸡、猪、鸭混合样品的DNA,通过对不同方法提取DNA的质量及提取DNA用于多重荧光PCR检测的效果方面进行比较。结果 三种方法提取DNA的浓度及纯度无明显差别,磁珠法提取的混合样品DNA进行多重实时荧光PCR检测的Ct值最小,扩增效果最佳。结论 该研究中磁珠法提取熟肉制品DNA的检测效果更为理想。     

PCR 检测牛乳中大肠杆菌基因组DNA 的提取方法

为获得一种适于牛乳样品大肠杆菌PCR 检测的基因组DNA 提取方法,对饱和酚法、CTAB 法、试剂盒法及溶剂裂解法等4 种提取方法加以比较,通过考察DNA 的纯度、定量分析以及PCR 分析,确定一套有效、快速、适合牛乳中提取大肠杆菌的基因组DNA 方法--溶剂热裂解法。结果显示该方法提取的DNA 模板,适于PCR扩增大肠杆菌DNA,可以用于牛乳中的大肠杆菌检测。     

快速提取鸭血基因组DNA方法的研究

目的:以鸭血为原料,筛选出高质量、高效率的DNA提取方法。方法:选用4种不同方法提取样品DNA,并建立实时荧光PCR实验,以此鉴别掺假伪劣产品。通过研究DNA质量浓度、提取时间和扩增效果,选取高质量、高效率的提取方法。结果:苯酚/氯仿抽提法提取浓度高、成本低,但步骤烦琐、耗时长,易接触有毒有害试剂;试剂盒法提取DNA纯度较高,但价格昂贵,不适用于大批量样品;核酸提取仪操作简便,但前处理耗时长,适用于大批量产品的检验检测;细胞裂解法操作简单、快速、成本低,因未经后续纯化,所得到的DNA纯度相对较低,但同样满足PCR扩增的检测要求,适用于大批量监督抽查任务。结论:对于大批量的鸭血源性成分检测推荐使用细胞裂解法,但一旦出现阳性样品需要进行复测则需要使用不同的提取方法,以确保实验的准确性。     

乳品中微生物的分子生物学检验技术研究

本论文主要研究运用分子生物学中的PCR法快速检测乳品中的大肠杆菌，即根据大肠杆菌的丙氦酸消旋酶基因（alrgene）所设计的一对正反特异的引物，对从人工染菌牛乳中提取的DNA模板进行扩增，再通过电泳检测结果。实验同时对酚／氯仿抽提法、CTAB法、溶剂提取热裂解法、水煮法四种DNA模板提取方法进行比较，选出最优方案。研究结果表明，酚／氯仿抽提法为最佳DNA模板提取方法，普通大肠杆菌原料乳，脱脂乳和全脂乳的最低检出限均为103CFU／mL，大肠杆菌0157：H7原料乳最低检出限为104CFU／mL，符合国家标准。     

燕窝DNA提取方法比较

为建立不同燕窝样品有效DNA提取方法,分别用试剂盒法、改良CTAB裂解法以及改良试剂盒法提取燕窝总DNA,进行浓度纯度检测,并以此为模版,进行PCR扩增及凝胶电泳。结果表明,改良试剂盒法扩增结果条带明亮,信号较强,较改良CTAB裂解液法与试剂盒法,更适于燕窝样品DNA提取,可用于PCR模版DNA制备,为进一步鉴定燕窝真伪提供参考。     

一种适用于乳制品基因组DNA快速提取方法的研究

目的对比NaOH裂解法、PBS裂解法以及直接煮沸法3种方法提取乳制品中核酸的提取效果,优化提取条件,确定一种更适用于现场检测、简便快速的的乳制品DNA快速提取技术。方法以牛奶、水牛奶、牦牛奶、羊奶、骆驼奶、以及驴奶6种常见的乳制品为材料,分别用NaOH裂解法、PBS裂解法以及直接煮沸法3种提取方法提取乳制品中的DNA,并根据裂解液用量和裂解时间进行优化,通过PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分析,检测DNA提取的质量和灵敏度。结果 NaOH裂解法能够提取所有物种的乳制品DNA,而且可以在最佳裂解条件下提取模拟掺假混合乳的DNA进行检测,发现其检测限能达到1%的牛奶含量。结论该方法取样量小,成本低,在15 min内即可完成快速提取,为实验室乳制品DNA定性或定量鉴别,以及乳制品的现场掺假鉴别提供了一种快速灵敏低成本的样品前处理技术。     

一种适用于大规模转基因作物PCR检测的简易DNA提取方法

近年来,转基因农作物的数量和种类大幅度增加,其安全性一直受到各国政府的重视和关注,转基因食品的检测也是各国贸易壁垒的一个重要方面.PCR技术作为—种快速、准确的核酸检验方法,广泛地应用于转基因农作物和食品的检测中.DNA样品的制备谜度和质量是PCR检测方法的限速步骤之一,本文改进了碱裂法提取植物DNA,并与SDS快速提取法及CTAB法作比较,用于不同长度片段的PCR扩增.结果显示:利用改进后的碱裂解法提取的DNA为模板可以稳定扩增出1000bp以内的片段,这是一种简易的适合于大规模转基因作物和食品PCR检测的DNA提取方法.     

快速提取肉类基因组DNA的裂解液的研究

目的配制一种快速提取肉类DNA且满足重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)要求的裂解液。方法分别配制3种裂解液:Na OH裂解液、Chelex裂解液与PBS裂解液,取200μL裂解液与20 mg肉类样品进行混合,振荡5 s,取上清液稀释10倍直接作为扩增模板。结果 3种裂解液中Na OH裂解液提取DNA在稀释与未稀释条件下均有较好的扩增,Chelex裂解液提取DNA在稀释与未稀释下均无扩增,PBS裂解液提取DNA在稀释作用下有较好的扩增,在未稀释作用下无扩增。裂解液提取法和试剂盒方法提取的纯度、产物的大小几乎一致,所扩增的为同一产物,裂解液所需成本与试剂盒方法相比较低。结论 Na OH裂解液可以在5 min内提取肉类中的DNA,浓度与纯度均较高,所需时间短,成本低,且满足分子检测要求。     

棉籽油中DNA不同提取方法的比较研究

在食用油DNA提取的SDS法和国标法基础上,设计5种不同方案对15种来自不同生产厂家及加工精度的棉籽油进行DNA的抽提,通过比较各来源DNA提取液中内源基因tRNALeu的PCR扩增结果判断DNA的提取效率;并对方案5获得的DNA样品进行外源基因FMV35S的PCR扩增以检测转基因成分。结果表明方案5提取棉籽油DNA的效率最高,而且方案5提取到的DNA能用于棉籽油的转基因成分定性检测。     

麦芽糊精基因组DNA不同提取方法的比较

采用不同方法对麦芽糊精基因组DNA进行提取,从中选取满足麦芽糊精材料进行分子标记检测的最好的DNA提取方法。以市售麦芽糊精为材料,分别采用CTAB、SDS和异硫氰酸胍3种方法提取基因组DNA,比较不同方法的提取效果。光密度检测结果显示,异硫氰酸胍法的提取量和纯度均优于SDS法和CTAB法;琼脂糖凝胶电泳检测结果显示异硫氰酸胍法提取的基因组DNA谱带清晰、重复性好,SDS法和CTAB法提取的基因DNA观察不到谱带;3种方法提取的麦芽糊精基因组DNA都能够满足PCR分析的需要。结果表明,3种方法均能有效地从麦芽糊精中获得DNA,然而异硫氰酸胍法优于SDS法和CTAB法。     

Changes in functional properties of shark (Isurus oxyrinchus) cartilage gelatin produced by different drying methods

Fish gelatins extracted from shark ( Isurus oxyrinchus ) cartilage were dried by three different methods: freeze drying, hot-air drying and spray drying; and their functional properties were investigated. Freeze-dried gelatin was found to have the strongest gel strength, while gelatins made at high temperatures formed weaker gels. The 135-kPa gel strength of freeze-dried gelatin was relatively high. While foam formation ability of the freeze-dried gelatin was the highest, its foam stability was the lowest. In addition, spray-dried gelatin had the best emulsion capacities. Dynamic viscoelastic properties of shark cartilage gelatins prepared by these drying methods were closely correlated with their gel strength. Elasticity modulus ( G '; Pa) and loss modulus ( G "; Pa) of the freeze-dried gelatin had higher values than those prepared by hot-air drying and spray drying; viscoelastic properties of the freeze-dried gelatin were maintained longer than those of other drying methods.     

基于简单加权分析的花椒果皮DNA快速提取方法比较研究

目的 开发和探究适用于花椒基因组DNA的快速提取方法。方法 选取8种不同品种的花椒,分别利用3种不同的DNA提取方法,包括一管式植物DNA抽提试剂盒、基于载体的纤维素滤纸提取法和无菌拭子浸入法,进行花椒果皮基因组DNA快速提取,比较不同DNA提取方法在花椒果皮基因组提取中的效果。其中纤维素滤纸提取法和无菌拭子浸入法均通过载体转移进行DNA的快速提取,基于十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide, CTAB)和十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate, SDS)两种不同的裂解液,在3 min以内即可提取DNA并得到聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增体系。通过简单加权(simple additive weighting, SAW)分析,基于PCR扩增能力、提取时间、提取成本、试剂安全性、程序简单性等方面进行综合评分。结果 所选的快速提取试剂盒不适用于花椒果皮这类含次生代谢物较多的实验材料,而无菌拭子、纤维素滤纸两种载体提取得到的花椒果皮DNA均可以进行后续的PCR操作,...     

DNA 提取方法对实时荧光定量 PCR 检测花生过敏原 Ara h 2 基因的比较研究

目前,食物过敏是一个世界性的公共卫生问题,其中花生过敏最为严重。基于DNA的分子生物学检测方法目前已广泛应用于花生过敏原检测,样品DNA的提取质量会显著影响检测的灵敏度及准确率。本研究比较了5种DNA提取方法,包括十六烷基三甲基溴化铵（cetyl trimethyl ammonium bromide,CTAB）法、柱式法及3种基于磁珠纯化技术的DNA快速提取法,对生花生、煮花生、炸花生、烤花生、花生酥和花生酱6种不同加工方式的花生基质样品进行DNA提取,考察了不同方法获得的DNA浓度、纯度指标,并采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR, qPCR）对花生过敏原Ara h 2基因进行了检测分析。结果表明,月桂酰肌氨酸钠（Sodium Lauroyl Sarcosine）磁珠法（简称SLS磁珠法）的适用性广、提取率高,对于6种花生基质提取的DNA均能高效检出花生过敏原Ara h 2基因;对于花生含量为0.05%～1.00%的小麦粉二元混合物,SLS磁珠法的DNA提取率总体优于CTAB法,并且能有效提取出与花生共用一条生产线的燕麦片中污染的花生DNA,证实SLS磁珠法提取的实际样品DNA能够满足花生过敏原检测目的。本研究为花生及其制品DNA提取方法提供了参考,特别是磁珠类方法,高效快速,提取质量能够保障后续基于DNA的花生过敏原分子生物学方法检测结果的准确性。     

Rheological Properties of Fish Gelatins

ABSTRACT: The rheological properties of fish gelatins (cod, megrim, tuna, and tilapia) and conventional gelatin (bovine and porcine) were compared. The different fish gelatins had from low to high viscosity values. They also had from low to high gel strength values. However, they had lower melting and gelling temperatures than gels from conventional gelatins. Cold-water fish gelatins were more different from conventional gelatins than warm water fish gelatins reflecting the different amino acid composition, as cold-water fish gelatins are low in imino acids. Binary blends of cod and other fish or conventional gelatins seemed to be completely compatible.     

实时荧光定量PCR法测定发酵乳中双歧杆菌

对实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测发酵乳中双歧杆菌的DNA提取方法、PCR扩增效率、标准曲线绘制进行探讨,通过比较分析碱式提取法、玻璃珠破碎法和酶解法3种提取方法对发酵乳中总DNA提取效率、4种不同参考菌株的PCR扩增效率以及单一菌株标准曲线与混合菌株标准曲线的计数结果,建立实时荧光定量PCR快速测定发酵乳制品中双歧杆菌数量方法。结果表明：酶解法提取发酵乳中总DNA效果最好,OD260/280比值基本接近1.80,且提取的质量浓度含量最高;不同菌株的PCR扩增效率不同,其中参考菌株1.2213的Ct值与其他3菌株的Ct值存在显著性差异;根据单一菌株绘制标准曲线与混合菌株绘制标准曲线计数结果无显著性差异,后者计数结果更客观、准确。采用酶解法获取样品中的菌体细胞,基于混合菌液绘制标准曲线,采用实时荧光定量PCR技术确定发酵乳中双歧杆菌种属数量,可快速、准确地测定发酵乳中双歧杆菌的数量。     

Development of a Protocol for Efficient DNA Extraction of Patulin-Producing Molds from Food for Sensitive Detection by PCR

Early detection of patulin-producing molds in foodstuffs is very important for food industry and for ensuring the consumers’ health. For precise and sensitive detection of patulin-producing molds by polymerase chain reaction (PCR) protocol, a previously efficient DNA extraction from foods is necessary, since variations in the efficiency can affect the detectability. In this study, eight different DNA extraction methods including a wide variety of treatments were assayed and compared in order to select the most efficient. Methods which combined thermal conidia breakdown and DNA commercial extraction kits reached higher yields, obtaining more quantity and quality in DNA extraction than those methods without extraction kit. In the present work, a simple method for fungal DNA extraction which is relatively rapid by means of minimizing the use of costly chemicals such as sodium dodecyl sulfate, mercaptoethanol, etc., or dangerous such as phenol/chlorophorm, was developed. When the detection limits were evaluated after PCR amplification using DNA from nine inoculated food matrices with the eight methods tested, the method including thermal conidia breakdown, extraction with cetyl trimethylammonium bromide/phosphate-buffered saline (1:2) buffer, and E.Z.N.A. Fungal DNA Mini Kit was chosen as the most adequate for detecting patulin-producing molds by PCR. This method allowed detection limits ranged from 10²–10³ conidia/g.     

酶解法测定山药多糖含量的研究

目的：探讨用酶解醇沉法测定山药多糖的含量。方法：采用淀粉酶水解法、温浸法、煮提法提取山药多糖,用滴定法及硫酸-苯酚法测定多糖含量。结果：淀粉酶水解法、温浸法、煮提法测得的多糖含量分别为3.53%、0.44%、8.77%。结论：温浸法提取不完全,所得多糖值明显偏低;而煮提法则因淀粉溶出而结果虚高;与之相比,用酶解法既可较好的消除原料内淀粉的影响,多糖提取也较完全,是山药及薯蓣属植物多糖含量测定的一种较为简便、准确的方法。