十五 向技术进步的深度进军

自六十年代人工培养老窖成功之后,已由泸州大曲酒厂向全国广为传播,并被广为应用,取得了显著效果。中国科学院成都生物研究所吴衍庸教授及该所名酒研究组一九八二年以来,利用微生物技术在提高浓香型白酒质量方面又取得新的进展:如从麦曲中分离优良菌系,从老窖泥中分离产酸细菌(丁酸菌,己酸菌),并首次发现窖泥中存在的多种产甲烷菌,分离纯化出甲烷杆菌,初步探讨了甲烷菌与己酸菌的共生关系。这些,对进一步提高人工培养老窖、制作强化曲及强化功能菌进行人工培养母糟方面,揭     

浓香型白酒窖泥古菌群落结构及其多样性

以泸州老窖1、50、100和400年窖泥为研究对象,采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)研究浓香型白酒窖泥古菌的群落结构及其多样性。DGGE图谱显示,同窖池窖泥多样性指数(H)和均匀度指数(EH)均以窖底泥较高。不同窖池同部位窖泥的H值差异较大,窖壁泥和窖底泥H值分别为2.54².86和2.762.86和2.76³.23;EH值差异较小,且随窖龄延长而上升,分别为0.9853.23;EH值差异较小,且随窖龄延长而上升,分别为0.985⁰.991和0.9910.991和0.991⁰.995。此外,同窖池窖泥的群落结构相似性系数(S C)水平较高,为0.360.995。此外,同窖池窖泥的群落结构相似性系数(S C)水平较高,为0.36⁰.74;其次是窖底泥,为0.420.74;其次是窖底泥,为0.42⁰.63;窖壁泥为0.360.63;窖壁泥为0.36⁰.52。测序结果显示,与DGGE条带序列亲缘最近的种属均为产甲烷菌,归于甲烷短杆菌属(Methanobrevibacter)、甲烷杆菌属(Methanobacterium)、甲烷鬃菌属(Methanosaeta)和甲烷囊菌属(Methanoculleus)。其中,甲烷短杆菌属(Methanobrevibacter)在不同窖泥中占优势,优势度为7.23%0.52。测序结果显示,与DGGE条带序列亲缘最近的种属均为产甲烷菌,归于甲烷短杆菌属(Methanobrevibacter)、甲烷杆菌属(Methanobacterium)、甲烷鬃菌属(Methanosaeta)和甲烷囊菌属(Methanoculleus)。其中,甲烷短杆菌属(Methanobrevibacter)在不同窖泥中占优势,优势度为7.23%³9.64%。实验结果表明,浓香型白酒窖泥古菌群落结构及其多样性因窖龄和空间分布的不同而存在差异,其中以同窖池古菌种类较相似,窖底泥群落结构较稳定;窖泥中蕴藏着产甲烷菌资源,具有进一步开发研究的价值。     

不同质量窖泥古菌群落的研究

采用多聚酶链式反应结合变性梯度凝胶电泳指纹分析技术(PCR-DGGE)对不同质量窖泥中古菌群落结构进行分析,说明了不同质量窖泥古菌种群的复杂性,再次印证了产甲烷菌是窖泥中古菌的优势菌,并在此基础上揭示了窖泥中产甲烷菌种属上的多样性。发现了以最优质窖泥为参照,窖泥质量与其古菌群落间的相似性指数总体呈正相关这一规律,为今后研究窖泥培养、养护和应用提供了理论依据。     

甲烷氧化菌及甲烷单加氧酶的研究进展

甲烷氧化菌在全球大气甲烷平衡中起着重要的角色,同时甲烷氧化菌中所含特征酶甲烷单加氧酶又具有将由于甲烷氧化菌能氧化一系列的烷烃类、烯烃类以及取代型脂肪族类化合物,因而在生物修复、生物催化和温室气体甲烷的吸收中具有的应用前景和潜力.该文对甲烷氧化菌的分类,甲烷单加氧酶的特性以及在工业应用方面的研究作了简单的概述,分析目前将甲烷氧化菌或甲烷单加氧酶应用于工业化生产存在的问题,并指出今后应加强研究的方面.     

窖泥甲烷细菌与浓香型曲酒

窖是浓香型曲酒酿制之本,老窖是产妤酒的最根本条件,老窖泥中存在有多种生香功能菌,除窖泥已酸菌外,还有窖泥甲烷菌,它们既是生香功能菌,又是标志老窖生产性能的指示菌,这里所说的窖泥甲烷细菌,不涉及分类学上的名称;而赋予生态学上的意义,这里对窖泥甲烷细菌提出的专门论述将有助于推动浓香型优质酒的发展。一甲烷细菌研究历程的回顾甲烷细菌是一类非常独特的微生物,严格的绝对厌氧是为主要特微之一,因此,用一般分离厌氧菌的方法来分离、培养甲烷细菌是难以成功的。     

白酒工业微生物资源的发掘与应用

对中国白酒中微生物（特殊功能菌）的发掘与应用研究，进行了深入研究和不懈的努力，取得了可喜的成果，为中国白酒的发展做出了重大贡献。①利用甲醇的生丝微菌的发现与分离，可降低白酒中甲醇含量，还可利用其去除再利用水中的硝酸盐。②分离到了高乙醇浓度特殊环境中甲烷氧化菌，其应用方面范围广、潜力大。③从浓香型酒老窖中分离出一株产甲烷杆菌，开发出甲烷细菌与己酸菌共酵的二元发酵技术。④从泸州老窖泥中分离出产己酸的细菌，为推广人工老窖发酵浓香型酒作出了重要贡献。⑤杂醇油利用菌的发现与分离，为酒精工业降低杂醇油提供了新方法。⑥从郎酒高温曲中分离得到一株嗜热芽孢杆菌。⑦从泸型麦曲中分离出一株红曲霉菌，用于强化菌曲的研究。（陶然）     

己酸菌的分离纯化及生长规律的研究

浓香型大曲酒的窖池中栖息着己酸菌、乳酸菌、丁酸菌、甲烷菌、硫酸盐还原菌、硝酸盐还原菌等大量的微生物,这种独特的微生物环境对形成窖香浓郁、绵甜悠长的浓香型典型风格起着举足轻重的作用。其中,己酸菌是浓香型白酒生产中非常重要的产酸微生物,由它代谢产生的己酸与大曲发酵产生的酒精生成己酸乙酯．是浓香型大曲酒的主体香成分。本试验通过对老窖泥富集培养、多次分离纯化等一系列菌种培养工作,并经过产己酸鉴定,筛选出一株高产酸己酸菌,然后,着重研究该己酸菌的生长规律,为科研和生产提供理论指导,促进了己酸菌的科学应用。     

动物源弯曲菌分离纯化鉴定方法优化

【目的】弯曲菌是重要的食源性人畜共患病原菌,通常难以诊断,而动物源方向缺少系统的检测分析方法及相应的优化。为了获得更适宜分离动物来源的空肠弯曲菌和结肠弯曲菌,提高分离效率,降低分离成本,特开展方法优化,填补动物源弯曲菌分离方法建设的空白,为耐药菌株的有效追踪溯源和风险评估提供依据。【方法】对已有的空肠弯曲菌和结肠弯曲菌分离纯化鉴定方法Preston肉汤和Bolton肉汤增菌;CCDA选择性培养分离、弯曲菌显色培养分离、Skirrow选择性培养分离;生化鉴定和分子生物学鉴定做了筛选优化,针对目前存在的分离纯化和鉴定方法进行了调查比较,得到了更适合于健康动物来源的粪便和盲肠中的分离方法。【结果】牛血清预增菌、CCDA选择性分离、弯曲菌显色培养基纯化、哥伦比亚血琼脂进行扩增及分子学方法鉴定,同时建议采用厌氧条件进行培养。该流程简单易行,成本较低,适合于绝大多数实验环境条件,是获取弯曲菌的首选流程,便于推广实施。【结论】通过将现研究阶段存在的大多数检测方法进行了综合分析,整理出一套针对于动物来源的粪便及肠道内容物的检测分析方法,对健康动物中弯曲菌的分离效率能够提高30%,同时空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的分离效率无明显差异。     

基于荧光定量PCR技术的浓香型白酒窖泥中甲烷菌的检测

甲烷菌是窖泥中重要的功能菌,也是标志老窖生产性能的指示菌之一。利用荧光定量PCR技术精确定量甲烷菌在20年、50年、150年窖龄窖泥中的数量,分析甲烷菌随窖龄增加的变化情况。结果表明,在同一酒厂相同窖龄窖泥中,由于窖泥质量比较相近,甲烷菌数量较为稳定。在老窖形成过程中,甲烷菌数量逐渐增加,在50年达到最多;50年至150年窖龄窖泥中,甲烷菌数量出现一定程度的减少并趋于稳定。本研究为进一步揭示窖泥微生物变化规律以及判断窖泥的老熟程度提供了相关依据。     

蓖麻变应原生物脱毒方法的优化及脱毒机理的初步探讨

以蓖麻饼粕中蓖麻变应原降解菌的分离、筛选及菌株的生理特性为研究对象,对挑选出脱毒效果明显的菌株进行单菌脱毒及复配脱毒研究,然后对变应原降解条件进行优化分析研究并测定其脱毒效果,采用L9(33)正交设计实验,设计不同发酵温度、发酵时间、接菌量对蓖麻饼粕中变应原的脱毒条件进行优化分析.结果表明,蓖麻变应原较佳脱毒效果的工艺参数为:发酵温度33℃,发酵时间5 d,接菌量10%.