离子交换树脂固定化α-淀粉酶的研究

选择12种吸附和离子交换树脂对α-淀粉酶进行固定化,筛选出固定效果较好的D380大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂为载体,通过先吸附后交联的方法固定化.通过实验对加酶量、交联剂浓度、吸附时间、吸附pH等能够影响固定化酶活力回收率的因素的研究和优化,得出较优的固定化条件为:戊二醛浓度0.1%、处理时间45min、加酶量3mg/g(蛋白量/载体)、酶液pH5.8、25℃、固定化处理时间为6～10h,获得的固定化酶活力可达80U/g(载体),并进一步对固定化后的酶学性质作了初步研究.     

阴离子交换树脂固定化果糖基转移酶的研究

从13种离子交换树脂和吸附树脂中,筛选出固定化效果较好的大孔弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂D380为载体,以戊二醛为交联剂,通过先吸附后交联的方法对果糖基转移酶的固定化进行分析,并对固定化条件进行了优化。结果表明,最佳固定化条件为:加酶量为200U/g树脂,吸附pH为6.0,吸附时间为6h,吸附温度为30℃,交联剂戊二醛浓度为0.01%,交联时间为6h,交联温度为4℃,固定化酶活回收率最高可达87.6%以上。     

D-塔格糖3-差向异构酶的固定化研究

从14种离子交换树脂和吸附树脂中,筛选出固定化效果较好的大孔弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂D301-Ⅲ为载体,以戊二醛为交联剂,通过先吸附后交联的方法对D-塔格糖3-差向异构酶的固定化进行研究。结果表明,最佳固定化条件为：加酶量为2.00mL/g（粗酶液/树脂）,吸附pH7.5,吸附时间为8h,吸附温度为30℃,戊二醛浓度为0.05%,交联时间为3h,固定化酶活回收率可达50%以上。固定化酶重复使用10次,酶活仍能稳定保持在初始酶活的65%以上,具有良好的操作稳定性。     

固定化精氨酸脱亚胺酶的制备与性质研究

从7种大孔型离子交换树脂中筛选出固定化效果最好的弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂D301-G,通过先吸附后交联的方法对精氨酸脱亚胺酶进行固定化条件及固定化酶性质研究。经单因素实验,结果表明,最佳固定化条件为每克树脂加入156 U精氨酸脱亚胺酶液,p H4.0,28℃条件下吸附4 h后,在4℃冷却,加入戊二醛溶液至体系内戊二醛体积分数为0.07%,4℃下交联4 h,最优条件下固定化酶活回收率可达85%以上。固定化酶的最适温度和p H分别为50~60℃和5.0~5.5,较游离酶具有更高的温度稳定性,同时固定化酶的米氏常数Km值比游离酶高。固定化酶在重复使用8次后仍保留57.7%的酶活,表明该固定化酶具有较好的操作稳定性,可为连续生产瓜氨酸提供技术依据。     

糖化酶固定化技术在糯米酒生产中的应用

采用吸附交联法 ,以Al2 O3为载体、戊二醛为交联剂 ,研究了糯米酒酿造过程中糖化酶的固定化技术及固定化酶的性质。结果表明 ,加酶量及戊二醛的浓度对酶固定化有重要影响 ,其中酶浓度为 1 80IU/mL时 ,酶活力回收率为 79 0 0 %,交联剂戊二醛浓度为 1 5 %时 ,相对酶活力为86 86%。另外 ,固定化酶的最适pH值为 4 5 ,最适温度为 5 5℃。     

不同固定化菊粉酶方法的比较及条件优化

采用聚乙烯醇-海藻酸钙(PVA-CA)凝胶包埋法、壳聚糖交联法、D201-GM阴离子大孔树脂吸附交联法及人造棉绒布共价偶联法对菊粉酶进行固定化。通过对四种方法的对比得出最佳固定化方法为D201-GM阴离子大孔树脂吸附交联法,其固定化酶酶活力、酶活力回收率及操作稳定性均优于其它三种方法。以D201-GM阴离子大孔树脂为载体,对影响菊粉酶固定化的重要因素进行了考察,获得最佳固定化条件。实验结果表明,在pH为5.4,载体与酶的比例为1:2的条件下,振荡吸附3h后,加入0.5%(终浓度)戊二醛,15℃交联4h时即可获得较好的固定化效果。     

离子交换树脂共固定葡萄糖氧化酶-过氧化氢酶

从5种大孔阴离子交换树脂中,筛选出固定化效果较好的大孔强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂D 201为载体,以戊二醛为交联剂,通过先吸附后交联的方法共固定化葡萄糖氧化酶(GOD)和过氧化氢酶(CAT),研究了固定化酶的制备条件和酶学性质。结果表明,共固定化的最佳条件是:GOD∶CAT=1∶1(酶活力之比),吸附p H值为7.5,吸附温度30℃,吸附时间为8 h;交联剂戊二醛质量分数为1%,交联温度4℃,交联时间8 h。在此条件下固定化,以GOD计,最高酶活回收率为30.8%。与游离酶相比,共固定化GOD-CAT树脂的热稳定性、p H稳定性均增强,间歇操作10批次后酶活力仍然保持在初始活力的90%以上。     

弱碱性大孔树脂固定化硫磺菌β-葡萄糖苷酶的实验研究

通过实验筛选出弱碱性大孔树脂 D301R 作为固定化酶的吸附载体.以戊二醛为交联剂,采用吸附交联相结合的方法制备了固定化硫磺菌β-葡萄糖苷酶.将 D301R 大孔树脂与硫磺菌鲜菌丝提取液混合后4℃振荡吸附 12 h,用 0.075%戊二醛20℃交联 1 h 可以获得最佳的固定化效果,酶活性回收率为 46.2%,固定化酶活性为 0.38 U/g.固定化酶的最适温度略有提高,最适 pH 不变,而温度稳定性与贮存稳定性优于溶液酶.     

绿豆酯酶的固定化条件优化

为了探索绿豆酯酶的固定化方法,对阴离子交换树脂D261、D280、D301、D380酸碱处理后,通过离子交换吸附法来固定绿豆酯酶,筛选出固定效果较好的阴离子交换树脂D380,并进行固定化条件的优化研究。考查了固定化温度、固定化时间和粗酶液稀释倍数对固定化绿豆酯酶活力的影响,通过响应面法优化绿豆酯酶的固定条件。结果表明较佳的固定化条件为:粗酶液稀释25倍,固定化温度为30℃,固定化时间为3.0 h。实际测得固定化绿豆酯酶活力为0.825 1 U/g,与理论预测值相对误差为-1.7%,二者基本吻合。     

ECR-1030M树脂固定化单宁酶

制备了一种新型固定化单宁酶并优化了固定化工艺。用米曲霉固态发酵单宁酶,然后分别用不同类型树脂以戊二醛交联法固定单宁酶并筛选出最佳树脂载体;通过均匀试验和统计分析优化了单宁酶固定化工艺条件;对固定化单宁酶的保藏稳定性和循环使用次数进行了测定。结果显示:二苯乙烯/丙烯酸酯基型大孔吸附树脂ECR-1030M固定化单宁酶性能最佳。最优固定化工艺条件为:戊二醛浓度3.5%、固定化时间5.5 h、料酶比1︰16(g/m L)。此条件下制备的固定化单宁酶活力最高,为1480.5±32.6 U/g,酶活回收率为64.5%。固定化单宁酶在4℃下保藏20 d,以及循环使用6次后,仍可保留超过80%的酶活力。由此可见,ECR-1030M树脂固定化单宁酶是一种酶活力高、稳定性好、可多次高效使用的酶制剂。     

壳聚糖—戊二醛固定化木聚糖酶的技术研究

采用壳聚糖微球一戊二醛交联的方法固定木聚糖酶,探讨壳聚糖浓度、戊二醛体积分数和交联时间对固定化酶相对酶活力的影响.以正交试验确定木聚糖酶的最佳固定化条件,比较固定化酶与其游离酶的最适反应pH值、pH值稳定性、最适反应温度及热稳定性.结果表明,在壳聚糖质量浓度0.1g/mL、戊二醛添加量3％、给酶量2000U/g载体、交联时间2.5h时,固定化酶的回收率较高,可达到65.38％,同时固定化和游离酶的最适温度分别为60℃、55℃,最适pH值分别为4.5、5.0,热稳定性有不同程度的提高,pH稳定性两者变化不大.木聚糖酶的固定化能有效地提高其作用性能,从而为木聚糖酶的工业化应用提供了一定的理论依据.     

脯氨酰内肽酶的固定化研究

以D380为载体进行脯氨酰内肽酶的固定化研究,确定了其最佳固定化条件为加酶量为140U/g,戊二醛浓度为0.3%,固定化温度为25℃,吸附14h,交联6h。固定化酶活达到89.5U/g,酶活回收率63.9%。固定化酶最适反应温度为40℃,最适反应pH值为5.5。     

磷脂酶A1(Lecitase Ultra)大孔树脂固定化研究

选用9种树脂对磷脂酶A1(Lecitase Ultra)进行固定化,比较得出最适合的固定化载体为D101型号的大孔树脂.对其固定化条件进行优化,得到了固定化最优的条件为:酶液和树脂液料比1∶1(mL/g),磷酸盐缓冲液pH为6.5,室温下固定化时间60 min.在此条件下的得到的固定化酶的酶活力为750.0 U/g.通过扫描电子显微镜观测了固定化前后,树脂表面特征的变化.     

介孔分子筛MCM-41固定糖化酶的研究

以介孔分子筛MCM-41为载体、戊二醛为交联剂,对糖化酶进行了固定化.考察了固定化温度和时间、给酶量、pH值以及戊二醛浓度等因素对固定化效果的影响,并对固定化酶的酶学性质进行了研究.结果表明,糖化酶最佳固定化条件是:酶与载体比例为50mg/g、固定化温度20℃、固定化时间8h、pH值6.1、戊二醛浓度7.5％,此条件下固定化酶的相对酶活力为47％.固定化酶的最适作用温度和最适作用pH值没有改变,同游离酶一样,分别为60℃和4.6,米氏常数Km由原来的0.031 mol/L降为0.018mol/L.     

多酚氧化酶的固定化及其酶学性质研究

游离多酚氧化酶在使用过程中容易流失,无法重复利用。文章主要研究了低成本、高效率的两种固定化方法:海藻酸钠包埋法和戊二醛交联法,确定了其最优固定化条件,分别为海藻酸钠包埋法:2.5%CaCl2,2.5%海藻酸钠,固定化时间2h;戊二醛交联法:1.25%戊二醛,振荡固定pH 4.5,酶与载体质量比75(mg/g),固定化反应时间6.5h。同时对游离多酚氧化酶及固定化多酚氧化酶的酶学性质进行了研究。结果表明:游离酶、海藻酸钠包埋法固定多酚氧化酶(polyphenol oxidase immobilized by sodium alginate,A-PPO)和戊二醛交联法固定多酚氧化酶(polyphenol oxidase immobilized by glutaraldehyde crosslinking,C-PPO)的比活力分别为864,490,371U/mg,A-PPO和C-PPO的酶活回收率分别为18.6%和24.0%。同时,固定化酶在pH稳定性、热稳定性上优于游离酶,戊二醛交联法固定酶的效果优于海藻酸钠包埋法。     

磁性壳聚糖微球固定化脂肪酶研究

以磁性壳聚糖微球为载体,通过戊二醛交联进行脂肪酶固定化,对影响脂肪酶固定化各种因素进行考察,确定最佳条件,并比较游离酶与固定化酶pH和热稳定性。结果表明,固定化适宜条件为:脂肪酶加入量5.0 mg/100 mg载体、温度40℃、时间5 h、pH 8.04、戊二醛浓度10%、最高固载率可达90.56%,酶活4034 U/g载体;与游离酶相比,固定化酶pH和热稳定性都有较宽适用范围。     

壳聚糖固定瑞士乳杆菌蛋白酶的条件研究

以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,采用交联-吸附法对瑞士乳杆菌蛋白酶的固定化条件进行研究。在单因素试验基础上,以固定化酶活力为主要指标,研究凝结液、壳聚糖质量浓度、酶用量、交联时间、戊二醛质量浓度对瑞士乳杆菌蛋白酶固定化的影响。运用响应面对固定化条件进行优化,确定瑞士乳杆菌蛋白酶的最优固定条件：凝结液为4g/100mL NaOH-甲醇(体积比3:1)、壳聚糖质量浓度2.89g/100mL、酶用量2.95mg、交联时间1h、戊二醛质量浓度0.40g/100mL,此时固定化酶活力为28.67U。