碳纳米管组装电化学免疫传感器测定IgG抗体的研究

应用吸附法将IgG抗原固定于多壁碳纳米管修饰的玻碳电极表面,制备用于IgG抗体检测的电化学免疫传感器。以辣根过氧化物酶为标记物,对苯二酚为底物,利用辣根过氧化物酶标记IgG抗体与待测IgG抗体竞争电极表面固定的IgG抗原,建立了免疫竞争法检测IgG抗体的高灵敏度电化学分析方法。碳纳米管的大比表面积和电化学催化作用,提高了分子识别物质的固定量和电化学检测的灵敏度。工作电位为 0.030 V(vs.SCE)时,响应电流与IgG抗体浓度在0.30~10μg/mL范围内呈良好的线性关系,检出限为0.11μg/mL。     

基于磁性纳米颗粒的化学发光酶免疫分析用于日本血吸虫抗体的检测

该文提出了一种高灵敏的基于磁性纳米颗粒的化学发光酶免疫分析方法用于感染兔血清中日本血吸虫抗体的检测.日本血吸虫抗原通过N-(3-二甲基氨丙基)-N-乙基碳二亚胺盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)固定在磁性纳米颗粒的表面,选择性地结合与富集血清中的日本血吸虫抗体,然后与辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗夹心进行免疫分析.对免疫反应的实验条件如日本血吸虫抗原在磁性纳米颗粒表面的标记浓度,磁性纳米颗粒的用量,抗原与待测抗体的反应时间及辣根过氧化物酶标记二抗的浓度进行了优化.发光强度与感染兔血清的稀释比在1:10000～1:100的范围内成良好的线性关系,检测下限为1:13442.     

石英晶体微天平传感的酶联免疫分析法测定免疫球蛋白IgM

结合酶联免疫分析技术与石英晶体微天平检测技术,发展了一种基于石英晶体微天平传感的免疫传感器用于测定血液中免疫球蛋白IgM的量.羊抗人IgM抗血清通过氨基硅烷化共键固定在石英晶体表面上,采用竞争吸附免疫分析法,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的IgM作标记物,N-四甲联苯胺(TMB)和H2O2作酶的底物.结合在石英晶体微天平上的酶标记物催化TMB氧化形成沉淀,使石英晶体微天平的振荡频率发生改变,据此测定标记物HRP-IgM和IgM的量.实验优化了分析条件下,对IgM的检测范围为0.03μg/mL to 7μg/mL,它具有仪器简单、操作方便、灵敏度高等优点.     

日本血吸虫抗体电化学免疫传感器研究

该文研制了一种高灵敏的基于辣根过氧化物酶(HRP)放大的电化学免疫传感器用于日本血吸虫抗体的检测.实验采用夹心法的模式,在电极表面固定了日本血吸虫抗原(SjAg),用以捕获血清中的日本血吸虫抗体(SjAb),然后再与辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG二抗形成免疫复合物.用计时安培法检测HRP酶催化H2O2还原对苯二酚底物产牛的电流,其大小与日本血吸虫抗体(SjAb)浓度在一定范围内成正比.对免疫反应的实验条件如电极表面固定抗原的浓度,HRP酶标二抗的浓度进行了优化.此外,还考察了其它蛋白质对测定结果的影响.结果表明,该方法操作简单,灵敏度高,线性范围宽,检测下限低.     

电聚合二氧化锆固载辣根过氧化物酶的第三代生物传感器的研制

利用生物相容性良好的无机材料二氧化锆(ZrO2)对辣根过氧化物酶(HRP)进行直接固定,用交流阻抗法对修饰电极进行了表征,并用循环伏安法和计时电流法对过氧化氢(H2O2)生物传感器的性能进行了研究.结果表明,该法成功的制备了以电聚合ZrO2为载体的无介体第三代电流型生物传感器.其线性范围为1.00×10-6～1.87×10-3mol/L,线性回归方程为:ip(μA)=0.002 3 c(μmol/L)+2.9324,相关系数r为0.996 8,检测限为2.86×10-7 mol/L.     

基于纳米金标记和银增强放大的血吸虫抗体的免疫分析

该文提出了一种新的、高灵敏的基于银增强放大和免疫胶体金技术的血吸虫抗体的免疫分析方法.免疫反应在聚苯乙烯微孔板中以间接分析模式(血吸虫抗原-兔抗血吸虫抗体-纳米金标记的羊抗兔IgG二抗)进行,通过反应上去的纳米金催化银离子的还原,使大量的银沉积在纳米金的周围,用酸将银溶解后,通过阳极溶出伏安法(ASV)对银离子进行检测,溶出峰电量的大小与待分析物血吸虫抗体(一抗)的浓度成正比.对免疫分析的一些实验条件如抗原与待测抗体的反应时间、纳米金标记二抗与待测抗体的反应时间、纳米金标记抗体稀释度以及银增强时间进行了优化.阳极溶出峰电量与日本血吸虫抗体的浓度在6.4μg/L～100mg/L范围内呈良好的线性关系,检测下限为3.0 μg/L.将该方法应用于兔血清中日本血吸虫抗体的测定,取得了满意的结果.     

丙烯腈-丙烯酸共聚物多孔膜的硫化物传感器

采用自由基聚合方法在金电极表面合成丙烯腈-丙烯酸的共聚物多孔膜并用作固定酶的载体.再通过戊二醛将辣根过氧化物酶交联固定在丙烯腈-丙烯酸的共聚物多孔膜上制得过氧化氢生物传感器.硫化物抑制酶的活性使还原电流减小,根据电流域小的程度实现了对硫化物的测定.丙烯腈-丙烯酸共聚物多孔膜具有大的表面积和高的吸附能力.有利于改进传感器的检测下限.实验结果表明:将辣根过氧化物酶固定在丙烯腈-丙烯酸的共聚物多孔膜金电极上,作为一种检测硫化物的抑制型传感器,分析响应性能良好.     

5’－核苷酸酶和HRP酶共固定修饰电极快速检测鸡肉中肌苷酸含量

利用气相沉积方法在玻碳电极表面得到二氧化钛凝胶膜,并在电极表面同时固定5'-核苷酸酶(5'-NT)和辣根过氧化物酶(HRP),构建了一种新型快速测定肌苷酸(IMP)含量的安培传感电极(5'-NT-HRP/GCE).在溶解氧存在的条件下,IMP被凝胶膜中的5'-NT催化氧化,通过产物H2O2在电位-150 mV下被HRP酶催化还原的电化学响应对IMP进行测定.在邻苯二酚存在下,该传感器对IMP表现出快速的响应(响应时间小于10 s).该电极对IMP的测定具有较宽的线性范围(1×10-6-2×10-4mol/L)和较低的检测限(0.5×10-6mol/L).该电极对IMP的测定具有很高的准确度和良好的重现性.除抗坏血酸以外,与IMP共存的其它物质对其测定没有干扰.结果表明,该电极显示出很好的重现性和稳定性,能用于鸡肉中IMP的在线检测.     

5′-核苷酸酶和HRP酶共固定修饰电极快速检测鸡肉中肌苷酸含量

利用气相沉积方法在玻碳电极表面得到二氧化钛凝胶膜,并在电极表面同时固定5'-核苷酸酶(5'-NT)和辣根过氧化物酶(HRP),构建了一种新型快速测定肌苷酸(IMP)含量的安培传感电极(5'-NT-HRP/GCE).在溶解氧存在的条件下,IMP被凝胶膜中的5'-NT催化氧化,通过产物H2O2在电位-150 mV下被HRP酶催化还原的电化学响应对IMP进行测定.在邻苯二酚存在下,该传感器对IMP表现出快速的响应(响应时间小于10 s).该电极对IMP的测定具有较宽的线性范围(1×10-6-2×10-4mol/L)和较低的检测限(0.5×10-6mol/L).该电极对IMP的测定具有很高的准确度和良好的重现性.除抗坏血酸以外,与IMP共存的其它物质对其测定没有干扰.结果表明,该电极显示出很好的重现性和稳定性,能用于鸡肉中IMP的在线检测.     

辣根过氧化物酶脂膜生物传感器的研究

以微孔纤维素滤膜为载体,制成辣根过氧化物酶人造双分子层脂膜,组装到自制探头中,构成脂酶膜生物传感器。测定了该膜酶的动力学参数K_m和V_m,最适温度和最适pH值,并和自由酶进行了对比。用蒸馏水配制的双氧水溶液作为模拟试样,测定了该膜膜电位差△φ(mV)和H_2O_2浓度C_(H_2O_2)(μmol/L)的线性关系:拟合直线的相关系数K=0.97。