去甲基金霉素高产菌株筛选

本课题对金色链霉菌进行四种处理:自然分离、紫外诱变、EMS诱变、菌种驯化。其中自然分离得到的CM-23菌株效价达到2730u/m L,提高了11.42%;紫外诱变得到的UC-11菌株效价达到3127u/m L,提高了27.63%;EMS诱变得到的EC-18菌株效价达到2789u/m L,提高13.84%;菌种驯化得到的CM3000-3菌株效价达到3839u/m L,提高了56.69%。通过比较这四种处理方法,发现菌种驯筛选到CM3000-3提高最多,而且远远超过其他诱变方法所筛选到的最高菌株。这实验结果可为其他有特定靶位点的抗生素的高产菌株的诱变筛选提供参考。     

He-Ne激光与紫外线复合诱变选育西罗莫司高产菌株

以吸水链霉菌为出发菌株,采用He-Ne激光-紫外复合诱变对其单孢子悬液进行诱变筛选高单位突变株,经复筛选育出具有较好遗传稳定性的高产突变株11-1-6#,摇瓶效价达到401.9u/mL,比出发菌株提高了79%。     

紫外线—氯化锂复合诱变吉他霉素高产菌株的选育

以一株北里链霉菌(Streptomyces kitasatoensis)Zn1201为出发菌株,使用氯化锂前处理后照射紫外线进行复合诱变,通过L9(34)正交实验等处理结果得知,1.5%的氯化锂浸泡2 h、UV照射90 s得到的正突变株摇瓶效价提高较大,通过耐高浓度豆油和耐自身代谢物的选择性筛选,获得3株高产突变株,其中Zn1401突变株摇瓶发酵效价比出发菌株提高了14.3%,且该菌株传至5代,遗传性状稳定。该菌株应用于生产之后,产量提高7%左右,年新增利润1091万元。     

利用前体物质定向选育阿维菌素高产菌株

以除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)AV-0105为出发菌株,采用紫外线诱变处理,并结合前体抗性定向选育阿维菌素高产菌株. 通过对致死率的考察,确定了紫外线诱变的最适剂量. 在分离培养基中分别加入不同体积分数的缬氨酸和D -脱氧葡萄糖作为前体物质进行正突变株的定向筛选,选育得到阿维菌素高产菌株 AV-03-35,其摇瓶发酵效价达到4 695 u/mL,较出发菌株提高15.5%. 采用该菌株在2 t罐进行生产验证,平均发酵效价达4 592 u/mL,较出发菌株提高了13%.     

泰乐菌素高产菌株的筛选

以弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae)TP-116菌株作为出发菌株,采用紫外线、氯化锂和微波三重复合诱变,通过泰乐菌素抗性定向筛选,获得一株高产菌株YBT-06,并对其进行了遗传稳定性试验,结果表明突变株YBT-06生产代谢旺盛,遗传稳定性好,发酵效价比出发菌株提高了25%,达到11066μg/m L。     

产黄青霉菌高能电子诱变选育

为了选育出青霉素高产菌株,以产黄青霉菌10-2-12为出发菌株,经高能电子诱变后分离。经过18批次筛选得到的突变株13-6-55效价比出发株高8.2%,且菌丝状态、传代稳定性好。在试验罐上的平均发酵单位比对照高3.6%。     

亚硝基胍-紫外复合诱变选育高产衣康酸菌株

为提高土曲霉KYK-031发酵生产衣康酸能力,对出发菌株开展诱变育种和高产能力选育研究。采用亚硝基胍（NTG）和紫外（UV）复合诱变方法,通过平板初筛和摇瓶复筛,筛选衣康酸高产突变株。结果表明,亚硝基胍在500μg/mL浓度下的最佳诱变时间为40 min,15 W紫外诱变的最佳诱变时间为2 min,亚硝基胍-紫外复合诱变后筛选得到一株衣康酸高产菌株KYK-1035,摇瓶发酵产量为73.7 g/L,比出发菌株（41.8 g/L）提高了76.3%,糖酸转化率为63.4%。采用亚硝基胍-紫外复合诱变,提高了出发菌株诱变的正突变率,为衣康酸发酵继续放大和工业化生产奠定了基础。     

赤霉素产生菌原生质体理化诱变-定向筛选模型的建立与应用

针对赤霉素工业生产菌株皆为不产生孢子的多核多细胞菌丝型,通过酶解手段溶去赤霉素菌丝体的细胞壁,使其成为单一游离的原生质体,在此基础上建立赤霉素产生菌原生质体抗药性致死突变标志诱变筛选模型,以解除高浓度反应底物及内源赤霉素对其产生菌生物合成的反馈抑制和阻遏,提高赤霉素生物合成酶的活力,从而获得赤霉素高产菌株。应用所建立的赤霉素诱变筛选模型,进行产生菌原生质体理化诱变-定向筛选,成功得到N7298等多株原生质体再生的抗药性突变高产菌株,其摇瓶效价比出发菌株N提高23.4%,在20m3罐生产水平提高24.1%。     

复合诱变选育高产富硒酵母

以酿酒酵母FX-12-135为初始菌株,以有机硒含量为筛选指标,筛选高产富硒酵母菌。首先采用紫外诱变方法处理菌株,然后利用氦氖激光辐照处理进行选育,得到一株高产突变株HN-14-109,其摇瓶富硒能力比初始菌株提高29.8%,且遗传特性稳定。表明紫外诱变复合氦氖激光辐照是提高酵母富硒能力的有效方法。     

头孢菌素C产生菌的诱变育种及发酵应用

以头孢菌素C产生菌顶头孢霉(Cephalosporium acremonium)B-1822-S-04为出发菌株,经过紫外线和丙二酸复合诱变,筛选得到了4株头孢菌素C高产菌株D-G-017、D-G-083、D-G-096和D-G-133,其中菌株D-G-096的效价高达6 816 mg·L~(-1),较出发菌株提高了50.80%,且高产特性稳定;50 L发酵罐小试结果显示,菌株D-G-096的效价达到了29 270 mg·L~(-1),较出发菌株提高了111.06%,可作为优良高产菌株保存使用。该实验筛选出的高产菌株及其在小试中的应用,可为后期工业化生产提供优质菌种资源,为发酵工艺提供指导。     

紫外诱变复合重金属离子抗性突变选育螺旋霉素高产菌株

以螺旋霉素链霉菌(Streptomyces spiramyceticus)YL0113-01为出发菌株,采用紫外线诱变,并以重金属Co~(2+)为筛选因子,获得一株遗传稳定且螺旋霉素发酵效价比出发菌株提高6%的菌株。再对该菌株采用亚硝基胍(NTG)诱变,以缬氨酸结构类似物L-α-氨基丁酸作为筛选因子得到一株发酵效价较出发菌株提高14%的菌株。     

高产刺糖菌素发酵菌株的选育

采用紫外线结合氯化锂以及硫酸二乙酯结合氯化锂2种常规诱变方法对刺糖多孢菌进行复合诱变,分别筛选鼠李糖抗性突变株、2-脱氧-D-葡萄糖抗性突变株和刺糖菌素抗性突变株,并结合自然分离纯化,最终获得高产菌株D-S-23,其产量达N89.57 mg/L,较出发菌株提高了104.3%.     

多粘菌素E高产菌株的推理选育

根据多粘菌素E生物合成途径进行高产菌株的推理选育.以多粘类芽孢杆菌(Bacillus polymgxa)C105x为出发菌株,采用紫外线诱变处理,并结合2,4-二氨基丁酸(L-DAB)和2-脱氧-D-葡萄糖(2-DOG)的抗性筛选,选育得到较佳正变株CL7-49.该菌株具有多粘菌素E发酵效价高、遗传稳定性好等特性.将该突变株应用于50 m3发酵罐的生产验证,发酵效价较对照菌株C105x提高了48%.     

硫酸二乙酯诱变螺旋霉素高产菌株的选育

以一株螺旋霉素生产菌株为出发菌株,使用硫酸二乙酯(DES)处理进行诱变,获得四株效价较高的突变株,其中有一株经过5代后遗传性状稳定。该菌株在摇瓶试验中能提高效价约6.5%左右,发酵生产中能提高放罐效价6%左右,该高产菌株的获得对提高螺旋霉素发酵生产效率有着重要的意义。     

链霉素抗性诱变筛选阿维菌素高产菌株

以Y 0909-12为原始菌株,经过亚硝基胍诱变后,采用链霉素进行抗性筛选,得到一株高产菌株Y 0910-67,其效价较对照高出16.9%。     

抗药性基因突变筛选高产菌株

本文通过洁霉素对盐酸林可霉素产生菌 98-1菌株孢子的致死浓度测定 ,采用诱变剂EMS的四种不同诱变剂量对菌株孢子进行诱变处理 ,诱变处理的孢子涂布在含洁霉素 ( 2 0 0 0 0ug/ml)的高氏平板上 ,获得了大量的洁霉素抗性基因突变株 ,然后从 90 0株洁霉素抗性基因突变株中通过初筛获得高于诱变出发菌株产素能力的菌株 5 6株 ,再进一步通过摇瓶复筛 ,并结合菌丝生长及摇瓶代谢情况 ,获得优于出发菌株的诱变菌株 4株。将这 4个菌株连同出发菌株连续三批次进行摇瓶发酵 ,结果 4个突变株的产素能力 (产量 )及摇瓶代谢和菌丝生长情况均优于出发菌株 ,试验筛选出最优菌株 0 2 -0 3 -40 2。将 0 2 -0 3 -40 2进行罐上发酵生产试验 ,结果试验罐比对照罐平均效价提高 1 7.5 6% ,平均产量提高 1 9.3 4%。本文建立了林可霉素高产菌株的洁霉素抗性基因突变诱变快速高效的筛选方法     

一种快速诱变筛选雷帕霉素生产菌的方法

研究了一种复合诱变获得雷帕霉素生产菌——吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)高产突变株的方法。采用低剂量紫外诱变复合新型常压室温等离子体(ARTP)诱变技术构建雷帕霉素生产菌的诱变育种体系,获得高产雷帕霉素生产菌突变株,经两次复筛,效价较出发菌株提高18.4%。该方法大幅度减少了筛选量,正突变率高达70.59%,可以较短时间内提高雷帕霉素发酵单位,降低生产成本。     

产1，3-丙二醇菌株克雷伯氏肺炎杆菌的诱变与筛选研究

为提高克雷伯氏肺炎杆茵Klebsiella pneumoniae产1,3-丙二醇的能力,尝试使用紫外线和氯化锂对菌种进行复合诱变,利用产酸圈和产物耐受相结合的平板筛选方法,获得可耐受高质量浓度1,3-丙二醇且副产物中乙醇及乳酸含量较少的优良突变菌株2株.与出发茵株相比,2株高产突变菌株Klebsiella pneumoniaw Kc和Klebsiella pneumoniae Kd发酵最终1,3-丙二醇质量浓度分别提高了34.7%和35.2%,达到66.7 g/L和67.1 g/L;乙醇质量浓度分别降低了49.3%和47.1%,降低至8.1 g/L和8.4 g/L;乙酸质量浓度分别提高了61.5%和68.1%,达到14.7 g/L和15.3 g/L.结果表明,该诱变和筛选方法目标明确、易操作、效率高,在1,3-丙二醇工业规模的生物法生产中将具有良好的应用价值,而且对于其它具有工业应用价值的菌株筛选工作也具有一定的借鉴意义.     

大气压冷等离子体诱变产1,3-丙二醇菌株Klebsiella pneumoniae

采用大气压冷等离子体介质阻挡放电法对产1,3-丙二醇的克雷伯氏菌进行诱变,采用诱变与筛选同时进行的单细胞平板诱变方法,同时获得了可耐受高浓度甘油且1,3-丙二醇产量较高的优良突变株. 对诱变后菌的间歇发酵结果表明,诱变菌株比出发菌株1,3-丙二醇的质量转化率提高了23%,对数期比生长速率提高了18%. 批式流加发酵过程中,1,3-PD浓度在发酵36 h时达到70.5 g/L,甘油的质量转化率为0.57 g/g,分别比野生菌提高47%和58%. 该诱变和筛选方法具有操作简单、效率高等特点,对具有工业应用价值的菌株筛选具有实用价值.     

微生物絮凝剂产生菌的选育及发酵罐放大试验研究

以产微生物絮凝剂的芽孢杆菌DHS-63为出发菌株,采用常压室温等离子体(ARTP)诱变系统进行诱变,经筛选及稳定性分析得到一株遗传稳定的突变株A265,摇瓶发酵絮凝剂产量达到1.08 g·L~(-1),比出发菌株提高12.9%。对该菌株进行发酵罐放大试验,10 L发酵罐絮凝剂产量为1.64 g·L~(-1),发酵时间48 h,比出发菌株缩短了10 h;70 L发酵罐絮凝剂产量为1.55 g·L~(-1),发酵时间44 h,比10 L发酵罐发酵时间缩短了4 h。