婴幼儿食品生产环境中阴沟肠杆菌的分离鉴定及其PFGE溯源分析

通过对婴幼儿食品生产环境中可能存在的阴沟肠杆菌污染点进行取样,共分离得到了30株菌株,16S r RNA鉴定结果表明有15株为阴沟肠杆菌,在检出菌株中占50%,且分布较为广泛,在成品区域检出率高达80%。同时,利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型技术对15株阴沟肠杆菌进行了溯源分析,发现生产环境可能成为阴沟肠杆菌二次污染源,原料样品中污染的阴沟肠杆菌经过一系列工序加工后,仍然存在于后续半成品或成品中。     

MALDI-TOF-MS对金桔表面肠杆菌科微生物分布的研究

为了评估金桔的食用风险,试验采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)调查金桔表面肠杆菌科微生物分布情况,筛选致病微生物,同时采用与生化鉴定和16S rDNA测序鉴定辅助鉴定结果。实验共分离6种的肠杆菌科细菌,分别为日沟维肠杆菌、分散泛菌、肺炎克雷伯菌、阪崎肠杆菌、生癌肠杆菌、阴沟肠杆菌,其中分散泛菌、阴沟肠杆菌和肺炎克雷伯菌出现频率较高;对三种鉴定方法进行比较分析,MALDI-TOF-MS鉴定结果与另外两种与属水平一致,种水平有偏离;MALDI-TOF-MS对分离微生物进行聚类分析表明同属微生物亲缘较近,同种微生物峰谱图仍有差异。试验结果表明,金桔表面具有肠道致病微生物,有一定食用风险,建议加强农产品致病菌常规的检测及风险评估力度;MALDI-TOF-MS方法可分辨率高且能提供基于蛋白质水平归类分析可以用于农产品微生物的快速检测。     

中国市售配方粉中阪崎肠杆菌和其它肠杆菌的污染状况

目的:调查和研究我国市售配方粉中阪崎肠杆菌和其它肠杆菌的污染状况。方法:采用传统的微生物学分离和鉴定方法检测212份市售配方粉中阪崎肠杆菌和其它肠杆菌。试验采用无菌水增菌、EE肉汤选择性增菌、VRBGA平板选择性分离、TSA平板分离培养和生化鉴定等。结果:从11份配方粉中分离到阪崎肠杆菌(占检测样品总数的5.19%),从103份样品中检出肠杆菌(占检测样品总数的48.58%)。检出的肠杆菌包括:泛菌属某些种、肺炎克雷伯氏菌、阴沟肠杆菌、醋酸钙-鲍曼复合不动杆菌、阪崎肠杆菌、非脱羧勒克氏菌、伤口埃希氏菌和大肠埃希氏菌等。结论:配方粉中肠杆菌的污染可能会导致婴幼儿,特别是婴儿的严重感染。本研究结果将有助于针对我国市售配方粉的卫生预防和控制。     

八宝粥软罐头中一种致腐微生物的分离鉴定

从胀袋的八宝粥软罐头中分离出一株致腐细菌zjs001,对其进行形态观察、革兰氏染色和API 20E生化鉴定,同时提取其基因组DNA,进行16Sr DNA PCR扩增,对扩增产物进行测序,与NCBI中已知序列进行比对,以确定其种属,研究结果表明,引起八宝粥胀袋的腐败菌为阴沟肠杆菌。     

榴莲冻肉中污染微生物的分离鉴定和低温存活时间研究

建立榴莲冻肉食品的污染微生物分离鉴定方法,研究该类微生物低温保存条件。污染菌经传统的生物梅里埃生化鉴定结合基质辅助激光解析电离时间飞行质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析,并通过对其低温耐受性研究。鉴定结果为50株菌株中10株为粘质沙雷氏菌,8株为阴沟肠杆菌,32株为明串珠菌属,检出率(100%)高于传统生化法(76%)。它们在榴莲冻肉介质内-20℃冷冻存活耐受时间分别为4个月、8个月和超过12个月。2℃~8℃冷藏明串珠菌呈数量级增长。榴莲冻肉污染菌为粘质沙雷氏菌、阴沟肠杆菌和明串珠菌属,保存条件适合冷冻,不宜冷藏。同时验证了MALDI-TOF-MS进行食品微生物鉴定更简便、高效。     

冷却猪肉中特定腐败菌的靶向筛选

根据有氧包装冷却猪肉中特定腐败菌的种类特点和致腐特性,以假单胞菌（Pseudomonas sp.）和肠杆菌（Enterobacteriaceae）为目标菌建立筛选模型,同时结合简单的生理生化鉴定确保筛选方向。以托盘包装冷却猪肉贮藏末期腐败菌为菌源,用铬天青（chromeazurol S,CAS）嗜铁素检测平板法,从假单胞菌CFC选择性培养基上分离的116 株菌中筛选到86 株产嗜铁素的腐败菌;用氨基酸脱羧酶检测管从双层结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂（VRBDA）平板上分离的66 株菌中筛选到21 株产氨基酸脱羧酶腐败菌。采用根癌农杆菌（Agrobacteriumtumefaciens）为报告菌再从上述腐败菌中筛选出产N-酰基高丝氨酸内酯（N-acyl homoserine lactones,N-AHLs）的菌株（产嗜铁素的51 株,产氨基酸脱羧酶的19 株）。根据实验需要,选取其中部分菌株进行16S rDNA鉴定,最后得到产嗜铁素和AHLs的假单胞菌7 株,产氨基酸脱羧酶和AHLs的肠杆菌科菌4 株,为靶向抑菌防腐提供了研究基础。     

葛根异黄酮对唾液淀粉酶及阴沟肠杆菌的抑制作用初探

目的:揭示葛根异黄酮降血糖与减肥作用的机理。方法:以乙醇回流提取法分离提取不同地域的野葛和粉葛葛根异黄酮类;AOAC法和高效液相色谱法分析营养成分;以唾液淀粉酶和阴沟肠杆菌构建试验评价体系,用比色法测定葛根提取物(PREE)添加的抑制活性。结果:野葛与粉葛的基本营养没有显著的差异,但异黄酮成分的含量和组成差异显著;PREE对唾液淀粉酶的半抑制浓度(IC_(50))是0.31~1.14mg/m L、对阴沟肠杆菌的IC_(50)为0.49~0.56mg/m L。随着PREE浓度的增加,唾液淀粉酶活性减弱,阴沟肠杆菌的增殖速率降低。结论:葛根异黄酮对唾液淀粉酶活性和阴沟肠杆菌的增殖均具有抑制效果,直接影响糖代谢的初始阶段而发挥降血糖、减肥作用。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法对金桔表面细菌的筛查

目的采用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法对金桔表面细菌进行筛查,初步掌握金桔表面细菌分布情况,为金桔的食用安全提供科学依据。方法以4种常见食源性致病菌(沙门氏菌、阪崎肠杆菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌)为目标菌,同时分离未知菌,通过基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法进行鉴定。结果共从17个样品中分离到12种细菌,分别为产气肠杆菌、阴沟肠杆菌、蜡样芽孢杆菌、肺炎克雷伯菌、腐生葡萄球菌、木糖葡萄球菌、大肠埃希氏菌、生癌肠杆菌、解鸟氨酸拉乌尔菌、阪崎肠杆菌、分散团菌和恶臭假单胞菌。结论本方法能快速鉴定未知细菌,从金桔上分离到的细菌多数为条件致病菌,存在一定的食用风险。     

香芹酚对阴沟肠杆菌的抑菌作用及机理

香芹酚具有较好的抑菌效果,符合人们对食品防腐剂安全无毒、无副作用的要求。本研究通过最小抑菌浓度和杀菌实验分析了香芹酚对阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae C4）的抑菌活性,并检测其对阴沟肠杆菌细胞膜电势、胞外ATP化学发光值的影响,使用激光共聚焦显微镜观察细胞渗透性,并通过扫描电子显微镜观察香芹酚对阴沟肠杆菌细胞形态的影响,从而探究香芹酚对阴沟肠杆菌的抑菌机理。结果表明：香芹酚对阴沟肠杆菌的最小抑菌浓度为0.5 μL/mL;阴沟肠杆菌细胞膜通透性随着香芹酚含量（0.25～2 μL/mL）的增加而逐渐增加。经香芹酚处理的阴沟肠杆菌细胞膜内外电势改变,ATP大量漏出。通过扫描电子显微镜观察,发现经香芹酚处理的菌体细胞形态干瘪且明显被破坏,含量高于1 μL/mL的香芹酚几乎能够溶解菌体。推测香芹酚通过作用于细胞膜改变膜内外电势,造成细胞膜通透性改变,引起细胞ATP等内容物泄露,从而影响细胞功能,达到抑菌的作用。     

茶叶中污染微生物分析及茶多酚抑菌性研究

对茶饮料中茶叶原料的微生物种类进行了分析、鉴定,并对茶多酚对茶叶中污染微生物的抑菌性进行了研究。结果表明,茶叶中主要污染微生物是枯草芽孢杆菌、阴沟肠杆菌和黑曲霉。当茶饮料中茶多酚含量大于0.6g/L时对枯草芽孢杆菌有很好的抑制作用,而茶多酚含量小于1.2g/L时对阴沟肠杆菌、黑曲霉无抑制作用。实验表明正常的杀菌条件可将阴沟肠杆菌和黑曲霉杀死。因此为保障产品安全,建议茶饮料的茶多酚含量大于0.6g/L。