时间分辨免疫荧光法测定食物中花生过敏原成分

目的:建立双抗体夹心时间分辨荧光免疫法[Time-resolved Fluoroimmunoassay(TRFIA)]测定食物中花生过敏原蛋白成分,为进出口食品中花生过敏原成分检测和由花生导致的食物过敏性疾病的预防提供技术基础。方法:提取花生蛋白,免疫小鼠制备抗花生总蛋白的多克隆抗体,用该抗体包被酶标板,并用生物素标记该多抗作为捕捉抗体,Eu3+标记的链酶亲和素和以β-二酮体为主的增强液等试剂,建立双抗夹心TRFIA方法,检测该方法的灵敏度,同时用于13种食品中花生过敏原蛋白成分检测。结果:初步地研制出双抗体夹心TRFIA法检测食品中花生过敏原蛋白成分,具有特异性,和其最低检出限为0.1ng/mL,标准曲线在0.1～160ng/mL范围内线性良好;11种食品检测结果与食物过敏原标签标注内容相符,而2种标示不详的食品检测结果均呈现阳性。     

双抗体夹心ELISA法测定食物中花生过敏原蛋白成分

通过建立双抗体夹心ELISA法测定食物中花生过敏原蛋白成分,为进出口食品花生过敏原成分检测和由花生导致的食物过敏性疾病的预防提供技术基础.提取花生总蛋白,免疫小鼠制备抗花生总蛋白的多克隆抗体,用该抗体包被酶标板,并用生物素标记该多抗,从而建立双多抗体夹心ELISA法;自制花生总蛋白标准品并检测该方法的灵敏度,同时检测15种食品中是否含有花生蛋白成分.成功地研制出双抗体夹心ELISA法检测食品中花生过敏原蛋白成分,具有特异性,其最低检出限为8ng/mL,标准曲线在8 ng/mL～125 ng/mL范围内线性良好;13种食品检测结果与食物过敏原标签标注内容相符,而2种标示不详的食品检测结果均呈现阳性.     

双抗体夹心ELISA法测定食物中大豆过敏原蛋白成分

通过建立双抗体夹心ELISA法测定食物中大豆过敏原蛋白成分,为进出口食品中大豆过敏原成分检测和食物过敏性疾病的预防提供技术基础.提取大豆总蛋白,免疫小鼠制备抗大豆总蛋白的多克隆抗体,用该抗体做包被抗体,并用生物素标记该多抗作为捕捉抗体,从而建立双多抗体夹心ELISA法;检测该方法的灵敏度,同时检测10种食品中是否含有大豆过敏原蛋白成分.SDS-PAGE电泳结果显示大豆过敏原总蛋白在120、60、35、30、28、18 ku处条带明显;免疫印迹显示,这些条带与制备的高效价抗大豆蛋白的多抗具有明显的阳性反应.检测食品中大豆过敏原蛋白成分双抗体夹心ELISA法最低检出限为～100 ng/mL,标准曲线在100ng/mL～12.8μg/mL范围内线性良好;10种进口食品检测结果与食物过敏原标签标注内容相符.     

胶体金免疫层析法检测食品中花生过敏原蛋白成分

建立一种简易快速胶体金免疫层析法(GICA)用于检测食品中花生蛋白成分.采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒、标记抗花生蛋白成分的抗体,制成免疫层析测试条.食品中花生蛋白成分与测试条上金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条.自制花生抗原标准品并检测该方法的灵敏度,同时检测19种食品中是否含有花生蛋白成分.结果表明:GICA测试条与花生蛋白抗原呈特异性反应.检测自制的花生抗原标准品的灵敏度可达50ng/mL,用GICA试条检测了19种食品中,其中13种食品标签上标注含有花生过敏原成分的食品检测结果均呈阳性,4种食品标签上标注不含花生过敏原成分的食品检测结果均呈阴性,而2种食品标签上没有标注过敏原成分的食品检测呈阳性.     

双抗体夹心ELISA法测定食物中牛奶过敏原蛋白成分

建立双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定食物中牛奶过敏原成分.通过提取牛奶过敏原蛋白,免疫小鼠制备抗牛奶过敏原的多抗,免疫印迹法鉴定多抗与牛奶过敏原蛋白的反应,并建立双多抗央心ELISA法.结果表明,该法检测牛奶过敏原蛋白的最低检出限为25μg/L,标准曲线在25～1000μg/L范围内线性良好;同时对市场上食物标签标注含有牛奶、未舍牛奶成分以及标注不详共12种食品进行检测,结果10种食品检测结果与食物标签标注内容相符,而2种标示不详的食品检测结果一个呈现阳性,一个呈现阴性.这说明本方法对于未标注牛奶过敏原成份的食品检测具有一定的实际应用价值.     

过敏原小麦醇溶蛋白的ELISA定量检测方法的建立

建立了检测小麦过敏原醇溶蛋白的定量ELISA抗体夹心法,以2μg/mL的鼠抗醇溶蛋白单抗包被酶标板,HRP标记兔抗醇溶蛋白抗体作为酶标抗体,工作浓度为1:8000,将醇溶蛋白精确配制成一定浓度的标准品,检测醇溶蛋白的含量.最佳的线性范围是19.53～5000ng/mL,R2≥0.99,定量检测限为19.53ng/mL,对应的食品样品检测限为7.81ppm.样品的回收率在93.57%～105.72%之间,实验内CV为3.07%～5.91%,实验间CV为0.26%～5.24%,仅对大麦有一定的交叉反应,可在4℃放置两周.本法准确度和精密度高,重复性和稳定性好,特异性较强,适用于食品过敏原小麦醇溶蛋白的检测.     

双抗夹心酶联免疫吸附法检测荞麦过敏蛋白

提取制备荞麦过敏原蛋白(TBt)并免疫动物,分别制备鼠多克隆抗体和兔多克隆抗体,建立了双抗夹心酶联免疫吸附检测法(ELISA)用于检测食品中的荞麦过敏原。SDS-PAGE结果表明,纯化的TBt纯度达到98%以上,鼠抗血清效价为1∶6400。建立的双抗夹心ELISA法对荞麦过敏原蛋白的最低检测限为0.16μg/m L,线性范围为0.16~16μg/m L。并采用建立的双抗夹心ELISA法对市场出售的15种食品中荞麦过敏成分进行了检测。结果显示,该方法对绝大多数食品中的荞麦过敏原都有很好的特异性及灵敏性,说明该法可用于食物过敏原的诊断及食品中微量荞麦过敏成分的检测。     

定量检测转基因植物蛋白Cry1Ac的双抗体夹心ELISA方法建立

以典型且研究较多的抗虫CrylAc基因表达的CrylAc蛋白为检测目标,制备其单克隆抗体及辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体,在优化抗体纯化方案,获得纯化抗体的基础上,以CrylAc单克隆抗体为包被抗体,以辣根过氧化物酶标记的CrylAb单克隆抗体为检测抗体,建立了CrylAc蛋白的双抗体夹心酶联免疫吸附分析(ELISA)检测法,并用于玉米中CrylAc蛋白含量的检测。结果显示,所建立的双抗体夹心ELISA法稳定性较好,测定变异系数在3%以内;在10 ng/mL~200 ng/mL的浓度范围内,线性回归方程为+=0768.0x0114.0y(R2=0.9989),检测限为9.49 ng/mL;对玉米样品提取液中Cry1Ac蛋白含量的测定回收率在102.5%~103%范围内。本研究所建立的双抗体夹心ELISA法为玉米中Cry1Ac蛋白的定量检测提供了有效的手段,可作为一种潜在的检测方法用于转基因产品的检验检疫中,在出入境检验检疫工作中也有较高的应用价值。     

小麦球蛋白单克隆和多克隆抗体制备及建立酶联免疫吸附法快速检测技术

目的建立小麦球蛋白的ELISA检测技术,用于蛋白质掺假以及过敏原成分的快速检测。方法从麦胚粉中提取球蛋白,抗原免疫Balb/c小鼠进行4次免疫后,通过脾脏细胞杂交瘤技术及间接ELISA筛选制备单克隆抗体,同时制备兔抗小麦球蛋白的多克隆抗体。通过棋盘滴定法,初步确定单克隆抗体和多克隆抗体的最佳工作浓度,建立双抗夹心ELISA。结果通过免疫和杂交瘤技术获得了抗小麦球蛋白的单克隆抗体,纯化后抗体的效价均达到1:107,通过免疫兔制备的多克隆抗体经纯化后效价在1:2.4×105左右,所建立的双抗体夹心ELISA方法最低检测限为10 ng/m L,与其他物种的蛋白不发生交叉反应。结论本文建立的双抗体夹心ELISA方法具有良好的特异性和灵敏度,为建立乳品中小麦成分掺假及过敏原成分快速检测提供理论依据。     

榛子过敏原双抗夹心酶联免疫吸附方法的建立及应用

目的 建立榛子过敏原双抗夹心酶联免疫吸附法(sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,sELISA)快速检测食品中微量榛子的方法.方法 对两株抗体进行配对,确定捕获抗体和检测抗体,利用棋盘法确定捕获抗体、检测抗体、辣根过氧化物酶标记的兔抗大鼠IgG(horseradish p...