反相高效液相色谱法测定蛹虫草中腺苷和虫草素的含量

建立一种新的反相高效液相色谱方法,用于蛹虫草中腺苷和虫草素的定性定量分析。样品经水超声提取,以终浓度20mmol/L柠檬酸、40mmol/L醋酸、20mmol/L三乙胺的混合溶液- 乙腈(体积比98:2)为流动相,流速1.0mL/min,色谱柱Capcellpak C18(150mm × 4.6mm,5μm)分离,柱温40℃,进样量10μL,紫外检测波长260nm。在此条件下,腺苷在1～1000μg/mL 范围内有良好的线性关系(Y=33574X+54.526,R2=0.9999),检测限0.2μg/mL,回收率93.75%～96.90%,RSD 为0.116%;虫草素在2～1000μg/mL 范围内有良好的线性关系(Y=34385X+23.103,R2=1.0000),检测限0.2μg/mL,回收率92.03%～97.35%,RSD 为0.104%。该方法样品处理简便、分离度高、杂质干扰小、回收率高、重复性好,能够对蛹虫草中腺苷和虫草素进行准确的定性定量分析。     

RP-HPLC测定虫草菌粉中核苷类成分

采用高效液相色谱法测定虫草菌粉中核苷类成分,尿苷、鸟苷、腺苷及腺嘌呤能很好分离,其优化的色谱条件为:AlltimaC1 8(2 5 0mm×4 .6mm ,5 μm)色谱柱,乙腈-水(V/V =4 :96 )为流动相,流速为1 .0ml/min ,检测波长为2 6 0nm。该方法灵敏度高、定量准确、重现性好、回收率高(98.7%～1 0 1 .5 %) ,适合用于虫草菌粉中核苷类成分的分析。虫草菌粉中尿苷、鸟苷、腺嘌呤和腺苷的含量分别为1 0 .5 2mg/g ,8.5 6mg/g ,0 .70 8mg/g和1 .79mg/g ,其测定RSD范围为0 .5 1 %～1 .30 %(n =5 )。     

高效液相色谱法测定保健食品中虫草素和腺苷的含量

样品中的虫草素和腺苷用纯水经80℃水浴提取,采用CALESIL ODS-100C18柱（5μm,4．6×250mm）,在流动相为10mmol／LKH2PO4缓冲液（pH=6．0）：甲醇=85：15的色谱条件下分离,紫外260nm下检测。虫草素和腺苷的线性范围分别为1．05μg／mi-10．5μg／ml和10．3ug／ml～103μg／ml,加标回收率分别为95．8％和96．5％,相对标准偏差分别为0．10％和1．8％,检测限均为0．05μg／ml（以进样浓度计）。该方法简便、快速、结果准确、可靠,能应用于保健食品中虫草素和腺昔含量的测定。     

HPLC法同时测定蛹虫草中虫草素、腺苷和麦角甾醇的含量

建立一种利用高效液相色谱法同时测定蛹虫草中虫草素、腺苷和麦角甾醇含量的方法,并对沈阳、广东、江苏3个产地的蛹虫草进行测定结果的比较。结果表明,虫草素、腺苷和麦角甾醇分别在5μg/mL～65μg/mL、5μg/mL～35μg/mL和25μg/mL～300μg/mL范围内线性关系良好,江苏的虫草素含量最高,为1.3 mg/g,广东的含量最低,为0.5 mg/g,广东的腺苷和麦角甾醇含量最高分别为1.9、5.8 mg/g。不同产地蛹虫草中的腺苷、虫草素和麦角甾醇的含量差异较大;该方法准确性高,重复性好,适用于蛹虫草中腺苷、虫草素和麦角甾醇的含量测定,为其质量评价提供参考。     

人工冬虫夏草不同部位核苷类成分分析

目的:分析测定人工冬虫夏草不同部位核苷类含量,为充分利用人工冬虫夏草资源提供参考。方法:水提醇沉,RP-HPLC分离,紫外检测器检测虫草素、腺苷和腺嘌呤含量。结果:人工虫草中子实体、菌丝体和固体培养残基中腺嘌呤含量(μg/g)分别为193.92、142.66、71.25;腺苷分别1302.52、635.02、171.73;虫草素分别为1356.92、1101.04、350.96。结论:人工虫草中不但子实体含有腺嘌呤、腺苷和虫草素,菌丝体及固体培养残基也含有这3种主要核苷类物质,具有进一步开发利用价值。     

HPLC测定利奈唑胺原料药中3个降解杂质

目的建立测定利奈唑胺原料药中3种主要降解杂质的高效液相色谱(HPLC)法。方法采用ZORBAX SB-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以0.1 %三氟乙酸乙腈溶液-0.1 %三氟乙酸水溶液为流动相,线性梯度洗脱,检测波长254 nm,流速1.0 ml/min,柱温30℃,进样量10 μl。结果利奈唑胺与杂质Ⅰ、杂质Ⅱ、杂质Ⅲ的线性范围分别为0.1072～10.72 μg/ml (r=1.0000),0.1026～10.26 μg/ml(r=0.9999),0.1033～10.33 μg/ml (r=0.9999),0.1015～10.15 μg/ml (r=0.9998);利奈唑胺与杂质Ⅰ、杂质Ⅱ、杂质Ⅲ的定量限分别为0.032,0.031,0.031,0.030 μg/ml;检测限分别为0.011,0.010,0.010,0.010 μg/ml;3种杂质平均回收率分别为97.36 %,96.76 %和95.54 %,RSD分别为1.62%,1.22%和1.82%。结论该方法简便灵敏,结果准确可靠,重复性好,可用于利奈唑胺有关物质的控制。     

超声-微波-HPLC联合提取检测CS-4菌丝体中的腺苷类物质

北冬虫夏草(CS-4)富含虫草多糖、虫草酸、腺苷类物质等多种生物活性成分,是野生冬虫夏草最佳的替代品,试验建立了一种超声-微波联合提取法,辅助HPLC测定CS-4菌丝体冻干粉中腺苷类活性成分。结果表明:用料液比1︰300(g/m L)的蒸馏水超声提取15 min,440 W微波提取6 min,腺苷类物质的提取率高达61.24%。经HPLC检测,对菌丝体冻干粉中5种生物活性成分(胞苷、尿嘧啶、尿苷、腺苷和虫草素)进行了定性定量分析,含量分别为92.54μg/g,305.79μg/g,1.79 mg/g,785.85μg/g和695.64μg/g。     

高效液相色谱法同时测定保健食品中红景天苷和腺苷

目的 建立同时测定保健食品中的红景天苷和腺苷含量的高效液相色谱测定方法.方法 采用50％甲醇为溶剂,超声提取样品中的的红景天苷和腺苷成分.采用shim-pack CLS-ODS色谱柱(150 mm ×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇+ 20 mmol/L磷酸二氢钾水溶液(15 +85,V/V),流速1.0 ml/min,进样量10 μl,紫外检测波长为红景天苷275 nm,腺苷260 nm.结果 红景天苷在10.0 ～200 μg/ml范围内线性良好(r=0.999 5),平均回收率92.5％～99.5％,精密度2.8％～4.7％(n=6);腺苷在2.50～50.0μg/ml范围内线性良好(r=0.999 6),平均回收率90.0％～ 94.0％,精密度2.1％～5.2％(n=6).红景天苷和腺苷检出限LOD分别为0.01和0.005μ g/g.结论 本方法快捷、简便、灵敏度高,可准确同时测定保健食品中的红景天苷和腺苷含量.     

RP-HPLC法测定冬虫夏草发酵液冻干粉中虫草素和腺苷含量

目的 有效地控制冬虫夏草发酵液冻干粉的质量.方法 建立了测定虫草素和腺苷含量的反相高效液相色谱法（RP-HPLC）.色谱条件：C18柱（250 mm × 4.6mm ,5μm）;流动相为乙腈＋水＋甲醇（2＋85＋2）;流速为1.0 ml/min;紫外检洲波长260 nm.结果 虫草素浓度在0.45～18.00 μg/ml范围内与峰面积呈线性相关,r=0.999 3,平均回收率为96.5%,RSD为2.3%.腺苷浓度在1.76-17.60μmg/ml范围内与峰面积呈现性相关,r=0.9990,平均回收率为97.3%,RSD为1.0%.结论 该方法样品处理简便,结果可靠,重现性好,可有效地控制冬虫夏草发酵液冻干粉的质量.     

芝麻油中芝麻素、芝麻林素的研究

本文利用高效液相色谱测定不同芝麻样本提取油以及市购芝麻油中芝麻素、芝麻林素的含量。色谱柱为HibarRT250-4(C18,250mm×4.6mm,填充粒度5μm);流动相:甲醇:水=75:25(V/V);流速:1ml/min;检测波长:280nm。测定结果表明:被测两峰完全分离,且峰形较好,线性范围10～100μg/ml,芝麻素、芝麻林素平均回收率分别为101.1%、100.2%重现性(n=5)分别为芝麻素RSD=2.31%、芝麻林素的RSD=3.05%,最低检出限:芝麻素为1.5μg/ml,芝麻林素为2.5μg/ml(以进量浓度计)。油样中芝麻素的含量范围为0.35%～0.72%、芝麻林素的含量范围为0.32%～0.48%,制油工艺中焙炒工序强度对芝麻林素含量变化具有一定影响。     

HPLC法测定北虫草中的虫草素含量

建立了快速测定北虫草及其制品中虫草素的含量测定方法。采用ApolloC18色谱柱(250mm×4.6mm);流动相甲醇(10%～40%)—水(90%～60%),30min内梯度洗脱;流速1.0ml/min;检测波长260nm。在此液相条件下,虫草素在浓度0.05～0.25mg/ml范围内有良好的线性关系(r=0.9999);仪器精密度考察RSD为1.65%;稳定性考察RSD为0.51%;重现性考察RSD为0.70%;加样回收率试验RSD为1.25%。结果表明,该法测定北虫草及其制品中虫草素的含量,快速准确,重现性好。     

RP-HPLC同时测定消风止痒颗粒中9种化学成分

目的建立反相高效液相色谱(RP-HPLC)同时测定消风止痒颗粒中梓醇、阿魏酸、毛蕊花糖苷、苍术素、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、胡薄荷酮、甘草苷和甘草酸铵的方法。方法采用Waters XTERRA C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);乙腈-1.5 mmol/L KH_2PO4溶液(稀磷酸调pH3.5)(25:75)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 ml/min;柱温:35℃,进样量:10μl。结果梓醇、阿魏酸、毛蕊花糖苷、苍术素、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、胡薄荷酮、甘草苷和甘草酸铵9种成分能达到很好分离;其线性范围分别为9.076～63.53μg/ml(r=0.9995),4.660～32.62μg/ml(r=0.9997),8.452～59.16μg/ml(r=0.9993),4.028～28.19μg/ml(r=0.9996),5.088～35.62μg/ml(r=0.9994),4.992～34.94μg/ml(r=0.9991),8.020～56.14μg/ml(r=0.9992),3.792～26.55μg/ml(r=0.9993),4.116～28.81μg/ml(r=0.9991),平均加样回收率分别为99.74%,99.21%,99.54%,99.03%,99.91%,98.99%,100.04%,98.79%,99.09%,RSD分别为0.55%,0.92%,0.69%,0.81%,1.13%,0.72%,1.14%,0.59%,0.68%(n=6)。8批次消风止痒颗粒中梓醇、阿魏酸、毛蕊花糖苷、苍术素、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、胡薄荷酮、甘草苷和甘草酸铵质量浓度分别为0.4101～0.4159 mg/g,0.2409～0.2448 mg/g,0.3989～0.4015 mg/g,0.1571～0.1599 mg/g,0.2557～0.2582 mg/g,0.2511～0.2551 mg/g,0.3842～0.3866 mg/g,0.1001～0.1018 mg/g,0.1251～0.1276 mg/g。结论方法简便快速、回收率高、重现性好,可用于提升消风止痒颗粒的质量标准。     

蜜柚中主要苦味物质的快速测定方法研究

目的:建立HPLC法测定琯溪蜜柚中3种苦味物质,即柚皮苷(naringin)、柠檬苦素(limomin)和诺米林(normilin)的含量.方法:WaLters svmmetrv C18柱(4.6mmx150mm,3.5μm),流动相为甲醇-乙腈-磷酸缓冲液(0.01 mol/L、pH3.5,三者体积比9:3:8),检测波长210nm.结果:本体系条件下,柚皮苷、柠檬苦素和诺米林分别在1.80～115 μg/mL、4-30～137.5μg/mL和5.82～186.25μg/mL范围内呈良好的线性关系.R2值分别为0.999、0.9968和0.9993;加样回收率分别为97.80%(RSD=1.86)、95.32%(RSD=2.04)和98.54%(RSD=3.17).结论:本法操作简便、快速、重现性好,结果准确.可用于柚类果实天然苦味物质的检测.     

蛹虫草液态深层发酵的研究

采用二次饱和D 最优试验设计方法 ,在 3 0L生物反应器中进行了蛹虫草液态深层发酵。当初始温度为 2 2℃ ,pH 6 3～ 6 5 ,搅拌速度 1 80r/min ,通风量 1 2 1m3/h ,发酵 72h和 96h ,蛹虫草菌丝体 (干 )产率分别为 3 8 6g/L和 42 3g/L。用HPLC法检测腺苷和蛹虫草菌素的含量 ,72h时分别为湿菌丝体中 0 3 5 2 μg/g和 0 1 3 4μg/g ,发酵液中 0 1 79μg/mL和 0 1 0 2 μg/mL ;用比色法在41 2nm处检测虫草酸的含量 ,湿菌丝体中为 2 3 40 6mg/g,发酵液中为 6 61mg/mL。     

HPLC法测定绿豆芽中四种大豆异黄酮的含量

建立同时测定绿豆芽中4种大豆异酮(大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素)含量的高效液相色谱方法,对从绿豆芽中提取4种大豆异黄酮的工艺进行优化,最佳工艺为:用60%的乙醇在55℃条件下超声提取60 min,料液比为1:12(g/mL),同时探究绿豆发芽不同天数4种大豆异黄酮的含量.采用日本岛津LC-20A高效液相色谱仪进行测定的色谱条件为:色谱柱为 phenomenex C18(150 mm×4.6 mm,5.0 μm),采用乙腈-0.2%甲酸为流动相进行梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,检测波长为260 nm.大豆苷,染料木苷,大豆苷元,染料木素的线性范围分别是0.74 μg/mL～100.00 μg/mL,0.74 μg/mL～200.00 μg/mL,0.167 μg/mL～500.00 μg/mL,0.198 μg/mL～160.00 μg/mL(r>0.9996),线性关系良好;加样回收率(n=9)分别为100.02%,98.95%,99.28%,99.63%.     

焙烤工艺优化对蛹虫草焙烤食品的非功能性研究

为了开发蛹虫草焙烤食品并提高其中营养价值和保健功能,以虫草素和腺苷含量为评价指标,研究面粉类型、焙烤温度、焙烤时间、初始水分含量、蛹虫草粉添加量、蛹虫草粉固体大小和面团静置时间对焙烤后虫草素和腺苷含量的影响。根据单因素试验结果,对蛹虫草焙烤食品的焙烤工艺进行正交试验的优化,得到最佳的焙烤工艺为使用高筋粉、焙烤温度上火140℃、下火120℃、焙烤时间20 min、初始水分含量15%、蛹虫草粉添加量10%、蛹虫草粉过80目筛和面团静置时间5 min,该条件下焙烤后虫草素含量为1521.0413μg/g,腺苷含量为1281.8962μg/g。     

栽培基质及碳源对蛹虫草子实体中主要有效成分的影响

主要通过改变蛹虫草固体栽培基质(大米、小米、高粱米、玉米、小麦)和添加不同的碳源(葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、蔗糖、乳糖、甘露醇),探索这2个因素对蛹虫草子实体中腺苷、虫草素、SOD酶、多糖等的影响。综合分析如上有效成分含量值,据此选取葡萄糖为最佳碳源(腺苷含量为169.5 mg/100 g,虫草素含量为149.0 mg/100 g,SOD活力值为5568.0 U/g,粗多糖含量为2.791 g/100 g),玉米为最佳培养基质(腺苷含量为248.5 mg/100 g,虫草素含量为221.1 mg/100 g,SOD活力值为2325.0 U/g,粗多糖含量为2.774 g/100 g)组合,为蛹虫草保健品中多种有效成分含量的提高提供了理论依据。     

虫草素的微波- 超声波协同提取

研究蛹虫草菌丝体中虫草素的提取工艺及检测方法。确定微波- 超声波协同提取法为虫草素提取的最佳方法,依据单因素和正交试验获得最佳的提取工艺：乙醇体积分数70%、提取功率200W、提取时间110s、料液比1:240(g/mL)。此时虫草素含量达9.228mg/g。采用紫外分光光度法测定样品中虫草素含量,回收率为97.41%～99.60%,RSD 为1.469%,准确度和精密度都较高,是一种方便、成本较低的检测方法。     

HPLC法测定龙眼肉中的几种核苷类物质

目的:建立HPLC法测定龙眼肉中腺苷、尿苷和腺嘌呤的含量。方法:采用NucleosilC18反相柱(250mm×4mm),以0.01mol/L的KH2PO4:乙腈=92:8为流动相,流速为1ml/min,检测波长为254nm,柱温40℃,用外标法,测定了龙眼肉中腺苷、尿苷和腺嘌呤的含量。结果与结论:分析中选取腺苷的线性范围0.1～20.0μg/ml,相关系数r=0.9999,回收率94.59%,RSD3.10%;尿苷的线性范围0.05～10.0μg/ml,相关系数r=1,回收率97.49%,RSD4.50%;腺嘌呤线性范围0.05～10.0μg/ml,相关系数r=1,回收率103.11%,RSD1.90%。该方法简便快速,线性关系良好。     

蛹虫草发酵产虫草素的培养条件研究

研究外源添加物,麸皮、玉米芯、腺苷等对蛹虫草液体发酵合成虫草素的影响,结果表明,发酵5d后加入3g/L腺苷,虫草素的产量最高。当腺苷添加量大于4g/L时,虫草素对腺苷的得率维持在25%,虫草素产量最大能达到1.62g/L。通过分析菌丝体生长与虫草素合成的动力学关系,发现虫草素的合成属于部分生长偶联型发酵。当振荡发酵4d后,静置发酵7d,虫草素的产量达到1.60g/L,产率达到145.5mg/L/d。这一蛹虫草合成虫草素的发酵工艺具有潜在的工业应用价值。