超声-微波协同提取蝉花虫草腺苷条件优化及不同产地腺苷测定

以野生蝉花虫草子实体为材料,采用超声-微波协同法提取蝉花虫草腺苷并对其提取条件进行优化,经单因素及正交实验,确定优化的提取条件:微波功率150 W、超声-微波协同提取时间120 s、料液比为1∶30、甲醇体积分数为20%,蝉花虫草腺苷提取率为(0.53±0.02)mg/g;并利用高效液相色谱法测定不同产地蝉花虫草菌丝体腺苷含量,结果表明:测得4个产地的蝉花虫草菌丝体腺苷含量为0.14~0.40 mg/g,其中井冈山分离获得JJS0017菌株的菌丝体腺苷含量最高(0.40 mg/g),其次为九江市莲花镇莲花林场分离获得JJS0007菌株,江西省鄱阳县饶埠镇分离获得JJS0032菌株的菌丝体腺苷最低(0.14 mg/g)。本文可为蝉花虫草的开发利用提供一定的理论依据。     

泰山虫草菌丝体与冬虫夏草有效成分的TLCS分析

以腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷、虫草素及次黄嘌呤为指标,测定泰山虫草菌丝体与天然冬虫夏草中相应成分的含量,探索泰山虫草代替天然冬虫夏草开发药物或保健食品的可能性。采用80%乙醇超声提取,在GF254硅胶板上点样后,以薄层色谱扫描法(TLCS)测定上述各种成分的含量。首次证明泰山虫草菌丝体核苷类及次黄嘌呤等有效成分含量明显高于冬虫夏草。其腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤含量分别是冬虫夏草的8.25倍、3.76倍、11.8倍和1.55倍。2种虫草中有效成分的含量均表现为尿苷>次黄嘌呤核苷>腺苷>次黄嘌呤>虫草素。说明泰山虫草可以作为冬虫夏草代用品进行综合开发利用。TLCS法简捷快速,重现性、稳定性良好,能有效地对虫草中的有效成分进行定性定量分析。     

人工冬虫夏草不同部位核苷类成分分析

目的:分析测定人工冬虫夏草不同部位核苷类含量,为充分利用人工冬虫夏草资源提供参考。方法:水提醇沉,RP-HPLC分离,紫外检测器检测虫草素、腺苷和腺嘌呤含量。结果:人工虫草中子实体、菌丝体和固体培养残基中腺嘌呤含量(μg/g)分别为193.92、142.66、71.25;腺苷分别1302.52、635.02、171.73;虫草素分别为1356.92、1101.04、350.96。结论:人工虫草中不但子实体含有腺嘌呤、腺苷和虫草素,菌丝体及固体培养残基也含有这3种主要核苷类物质,具有进一步开发利用价值。     

球孢虫草(CCordycepa bassiana)活性威分分析

以球孢虫草为材料,采用气相色谱测定了虫草多糖的单糖组成,高碘酸钠比色法测定了D-甘露醇含量,应用HPLC测定了核苷类物质的含量及组成,并与野生冬虫夏草进行了比较.结果表明,球孢虫草胞外多糖(EPS)由甘露糖和半乳糖组成,摩尔比是1.2:1.0;胞内多糖(IPS)由甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,摩尔比为5.4:4.0:1.0.球孢虫草子座与发酵菌丝体中甘露醇的含量分别为4.01%和12.05%;且它们中均含有鸟苷、腺苷和尿苷三种成分,但发酵菌丝体中三者的含量高于子座及野生冬虫夏草.通过三种活性成分测定,为综合评价球孢虫草内在品质和开发球孢虫草提供了科学依据.     

培养基质对蛹虫草中虫草酸及核苷类物质的影响

采用燕麦、小米、大麦、大米4种培养基质固体培养获得蛹虫草子座,比较子座中虫草酸、虫草素、腺苷、尿苷、鸟苷及胸苷含量的差异。采用比色法测定虫草酸含量,采用高效液相法测定核苷类物质含量。结果表明:培养基质对蛹虫草代谢产物合成的影响各有不同,小米培养的子座虫草酸(9 000μg/g)及虫草素(9 531.0μg/g)含量最高,大米培养的子座腺苷(818.9μg/g)和尿苷(2 028.4μg/g)含量最高,大麦培养的子座鸟苷(1 105.3μg/g)含量最高。     

人工培养的兰坪虫草子实体中核苷类成分研究

兰坪虫草(Ophiocordyceps lanpingensis)产于我国滇西北地区,是一种寄生在钩蝠蛾幼虫上的虫生真菌。本文以四种不同培养基培养的兰坪虫草子实体为原料,采用高效液相色谱法(HPLC)同时检测10种核苷类成分(尿嘧啶、尿苷、2'-脱氧尿苷、肌苷、鸟苷、腺嘌呤、胸腺、腺苷、2'-脱氧腺苷、虫草素),并将其与野生冬虫夏草(Ophiocordyceps sinensis)、野生兰坪虫草进行对比分析,初步评估人工培养兰坪虫草子实体的质量。结果表明,以大米和蚕蛹粉为主要原料的培养基所培养的兰坪虫草子实体生长时间平均为40 d,周期短于其他三种培养方式;且其腺苷、总核苷含量分别为2744μg/g和8015μg/g,明显高于野生冬虫夏草、野生兰坪虫草,有较好的质量水平。因此,人工培养的兰坪虫草子实体具有重要的研究价值和应用潜力。     

HPLC法测定冬虫夏草菌丝体及发酵液中核苷类成分

以百令胶囊及野生冬虫夏草作为对照品,优化了HPLC法测定冬虫夏草菌F4539指纹图谱的色谱条件,并计算其中4种核苷成分的含量。结果表明:采用YMC-Pack Pro C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,甲醇∶水(20∶80,体积比)为流动相,流速0.6 m L/min,检测波长为260 nm时,待测样品得到较好的基线分离;冬虫夏草菌F4539发酵菌丝体及发酵液中含有与野生冬虫夏草及百令胶囊相同的有效成分;4种核苷物质在2、4、6、8、10 mg/L的浓度梯度下,线性关系良好;通过定量计算,冬虫夏草菌F4539菌丝体及发酵液中的腺苷含量分别为0.094 mg/g和2.53 mg/g,百令胶囊中腺苷含量为1.45 mg/g。本研究对于冬虫夏草F4539的功效评价、发酵后处理及产业化开发提供了重要技术参数。     

冬虫夏草液态发酵菌丝体中化学成分分析

对冬虫夏草(Cordyceps sinensis)液态发酵菌丝体的主要化学成分进行了分析.冬虫夏草液体发酵菌丝体中粗蛋白和粗脂肪的含量分别为24.53%和6.69%;腺苷含量为0.3755mg/g,D-甘露醇含量为88.80mg/g,胞内多糖含量为133.9mg/g,麦角甾醇含量为1.80mg/g.冬虫夏草液态发酵菌丝体主要成分含量与天然虫草相似.     

泰山虫草菌丝体液体发酵培养基的优化及其有效成分含量测定

以（NH4）2SO4作为氮源进行单因素试验,通过改变（NH4）2SO4的含量以构成不同的碳氮比,以菌丝干重为指标,确定最佳碳氮比,得出其最佳碳氮比在3．0到4．0之间。以玉米粉、葡萄糖、黄豆粉、酵母膏添加剂为考察因素进行L,（3。）正交试验,确定最佳培养基配方,得到其最佳培养基配比为：玉米粉3．0％,葡萄糖1．5％,黄豆粉1．O％,酵母膏0．8％,菌丝体的最大生长量平均在1．29g／100ml。以薄层色谱扫描法（TLCS）~定泰山虫草菌丝体与天然冬虫夏草中腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤成分的含量,结果表明：泰山虫草菌丝体核苷类有效成分及次黄嘌呤含量明显高于冬虫夏草。其腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤的含量分别是冬虫夏草的8．25、3．76、11．8和1．55倍。两种虫草中核苷类成分的含量均表现为尿苷〉次黄嘌呤核苷〉腺苷〉次黄嘌呤。     

陈皮中黄酮和辛弗林的不同提取方法优化比较

陈皮中的橙皮苷、柚皮苷和辛弗林同时提取的不同提取技术参数的优化。通过正交设计实验研究超声提取与微波提取同时提取橙皮苷、柚皮苷和辛弗林的最佳实验条件。采用高效液相(HPLC)测定提取的橙皮苷、柚皮苷和辛弗林的含量。对于陈皮药材,不同提取方法对3种活性成分的提取率影响较大,微波提取对这3种成分具有最高的提取率。在优化工艺条件下:80%甲醇水溶液,料液比1:200、微波功率300W、微波时间2min,陈皮中橙皮苷、柚皮苷和辛弗林产率分别可达(58.72±0.939)mg/g,(2.12±0.084)mg/g和(3.32±0.086)mg/g。     

细脚拟青霉活性成分分析及清除自由基活性研究

以冬虫夏草生药为对照品,对细脚拟青霉RCEF0441的深层发酵菌丝体和发酵液冻干粉进行活性成分分析。结果表明：RCEF0441 菌丝体和发酵液冻干粉中粗蛋白和氨基酸总量均明显高于冬虫夏草生药;菌丝体中多糖、麦角甾醇、甘露醇及腺苷等多种物质的含量亦高于冬虫夏草生药;RCEF0441 深层发酵菌丝体和发酵液冻干粉中还含有丰富的对人体健康非常重要的Zn、Fe、Ca 等元素。用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)-TLC 法和DPPH 酶标仪法对RCEF0441菌丝体和发酵液冻干粉的甲醇- 乙酸乙酯混合液提取物清除DPPH自由基活性进行分析,发现两种提取物均具有较强的清除自由基活性,在浓度为5.0mg/ml,于37℃下保温10min 时,两种提取物对0.4 mg/ml 的DPPH自由基的清除率分别达到61.28% 和81.12%。     

蛹虫草液体发酵产虫草素研究

以蛹虫草液体发酵菌丝体为原料,通过超声、微波方法提取蛹虫草中的虫草素,超声提取时间为20min;微波功率为200W,微波提取时间为110s,提取得到虫草素结晶体,含量是0.006mg/g.以虫草素为指标,通过正交试验确定蛹虫草液体发酵条件,虫草素含量最高的方案为:接种量15％,温度25℃,转数140r/min,培养时间96h.     

高效液相色谱-质谱联用法分析冬虫夏草及其功能食品中的活性成分

目的分析冬虫夏草及其功能食品中的主要活性成分.方法选择不同溶剂提取冬虫夏草样品,比较它们的提取效果;采用高效液相色谱-电喷雾质谱结合选择离子监测(SIR)法分析冬虫夏草中虫草酸、虫草素、尿嘧啶等活性成分.结果确立了样品提取的最佳溶剂;经色谱、质谱条件的优化,建立了定量分析冬虫夏草及其功能食品中活性成分的方法.虫草酸、尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、腺苷、虫草素的定性离子分别为183、111、137、265、136、268、252,检出限(LOD)分别为74.2、72.0、85.0、82.0、4.2、50.0、65.0 ng/mL(进样量5μL),回收率90%～110%.结论该方法灵敏度高、选择性好、操作简便、定量准确,适用于冬虫夏草及其功能食品中的活性物质分析及产品质量控制.     

蜂头虫草无性型——蜂头层束梗孢活性成分分析

测定了蜂头虫草无性型——蜂头层束梗孢(Hymenostilbe sphecophila Kob)HS01胞外多糖含量、5种核替代谢量和氨基酸含量。结果表明,胞外多糖含量最高可达1.75 g/L,胞内多糖含量最高可达2.423%;发酵液与菌丝体中均含有尿苷、鸟苷、肌苷、胸腺嘧啶核苷和腺苷5种核苷,其含量均高于对照品冬虫夏草生药;HS01发酵菌丝体与天然虫草生药在氨基酸种类上一致,但氨基酸总量和人体所必须氨基酸总量明显高于冬虫夏草生药,氨基酸总量为8.330 mg/g。     

蛹虫草液态深层发酵的研究

采用二次饱和D 最优试验设计方法 ,在 3 0L生物反应器中进行了蛹虫草液态深层发酵。当初始温度为 2 2℃ ,pH 6 3～ 6 5 ,搅拌速度 1 80r/min ,通风量 1 2 1m3/h ,发酵 72h和 96h ,蛹虫草菌丝体 (干 )产率分别为 3 8 6g/L和 42 3g/L。用HPLC法检测腺苷和蛹虫草菌素的含量 ,72h时分别为湿菌丝体中 0 3 5 2 μg/g和 0 1 3 4μg/g ,发酵液中 0 1 79μg/mL和 0 1 0 2 μg/mL ;用比色法在41 2nm处检测虫草酸的含量 ,湿菌丝体中为 2 3 40 6mg/g,发酵液中为 6 61mg/mL。     

古尼拟青霉小孢变种核苷类成分分析

以已知核苷为标样,并以冬虫夏草生药作对比,利用反相高效液相色谱法对古尼拟青霉小孢变种RCEF0864菌丝体和发酵液中核苷类化学成分进行分析,结果表明古尼拟青霉小孢变种RCEF0864菌丝体中主要含有胞苷、尿苷、鸟苷、肌苷、环磷腺苷和腺苷等6种,其中腺苷和尿苷的含量均为冬虫夏草生药的3倍左右,肌苷和鸟苷的含量则分别是冬虫夏草生药的7倍和10倍左右,尿苷的含量也高于对照品冬虫夏草生药。古尼拟青霉小孢变种RCEF0864发酵液中主要含有尿苷、胞苷、胸苷、肌苷、环磷腺苷和腺苷等6种核苷类物质,其中,腺苷和胞苷的含量均高于对照品冬虫夏草生药。     

轮枝拟青霉中虫草素的微波提取工艺优化

采用微波提取轮枝拟青霉发酵菌丝体中的虫草菌素,HPLC法测定提取液中的虫草素含量,在单因素试验的基础上,用正交试验进行工艺参数的优化.优选出的最佳提取工艺为蒸馏水40mL,固液比1∶200,中火(P50)处理3min.在此最佳条件下,轮枝拟青霉中虫草素含量为3.247mg/g,工艺简便可行.     

环磷酸腺苷微波辅助萃取工艺研究

研究利用微波辅助萃取技术MAE(Microwave-assisted extraction)从冬枣中提取环磷酸腺苷的新方法.以高效液相色谱法HPLC(High Performance Liquid Chromatography)量测定所萃取的环磷酸腺苷.采用正交试验考察浸泡时间、处理时间、微波功率和料液比对环磷酸腺苷提取率的影响,确定了最佳工艺条件为微波功率200 W、浸泡时间4 h、处理时间3 min、料液比1:25.提取率为241.37μg/g枣粉.     

HPLC法同时测定党参中5种核苷和碱基

建立了超声辅助提取结合高效液相色谱(HPLC)测定党参中胞苷、尿苷、腺嘌呤、鸟苷和腺苷含量的方法。党参的最佳提取条件为:20倍量的纯净水超声提取60 min,提取2次。采用Venusil MP C_(18)(2)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分离和测定目标分析物,流动相为甲醇-水梯度洗脱,检测波长260 nm,体积流量1.0 m L/min,柱温35℃。结果表明,5种化学成分的质量浓度与峰面积的线性关系良好(R~20.9995),平均回收率为97.05%~101.08%,RSD≤3.01%。不同产地党参核苷类成分含量有所差异,18个党参样品中胞苷、尿苷、腺嘌呤、鸟苷、腺苷及核苷总量介于68.71~478.82、171.33~629.60、33.63~140.05、221.31~651.37、143.26~511.78、679.87~2011.67μg/g之间。本研究所建立方法操作简便,精密度、稳定性和重复性良好,准确可靠,适用于党参药材中5种核苷和碱基成分的同时测定,为全面客观地认识党参药材功效物质基础、丰富和发展党参药材多指标评价体系研究提供科学依据。     

冬虫夏草深层发酵与功效成分分析

研究了重大害虫松毛虫作为冬虫夏草主要氮源基质的深层发酵技术,并对所得冬虫夏草菌体中的关键功效成分进行分析。结果表明,最适宜冬虫夏草菌体生长的松毛虫基质为松毛虫幼虫冻干粉,补充碳源为玉米粉,补充氮源为(NH_4)2SO_4,无机盐为KH_2PO_4。采用均匀设计优化了培养基组成,获得适宜该菌株液体发酵的最佳培养基为:松毛虫冻干粉13.0 g/L、玉米粉38.0 g/L、(NH_4)_2SO_43.0 g/L、葡萄糖3.0 g/L、KH_2PO_41.4 g/L、蛋白胨1.0 g/L、Mg SO_4·7H_2O 0.75 g/L。在此条件下,冬虫夏草菌体生物量可达8.68 g/L。功效成分分析表明,所得冬虫夏草菌体中多糖和腺苷的含量显著高于野生冬虫夏草中对应两成分的含量,而D-甘露醇的含量低于野生冬虫夏草中的含量。所得冬虫夏草菌体经小鼠急性毒性试验和家兔皮肤刺激试验法检测为实际无毒级别,为高价值冬虫夏草真菌的深层发酵培养提供了一种全新的虫类基质资源。