一步法分离鸡蛋清中三种主要过敏原的研究

为快速高效分离鸡蛋中主要过敏原开展鸡蛋过敏的研究,本实验采用DEAE-Sepharose FF 色谱柱一步分离鸡蛋中的三种主要过敏原卵白蛋白、卵转铁蛋白和溶菌酶,通过SDS-PAGE 比对,纯度均高于相应标准品纯度,得率分别为87.66%、55.87% 和92.80%。本实验操作简便、设备简单、分离效率高,是一种分离鸡蛋过敏原的好方法。     

鸡蛋卵转铁蛋白过敏原B细胞线性表位的预测研究

为预测鸡蛋过敏原卵转铁蛋白的B细胞线性表位,以GenBank中提供的鸡蛋卵转铁蛋白氨基酸序列为基础,分别用Jameson-Wolf法、Kyte-Doolittle法、Emini法和Karplus-Schulz法对鸡蛋卵转铁蛋白的抗原指数、亲水性、蛋白表面可及性及柔韧性进行预测,并用Chou-Fasman法和Deleage-Roux法预测其二级结构,综合分析以上预测结果,得出鸡蛋卵转铁蛋白可能的B细胞线性表位区。结果表明鸡蛋卵转铁蛋白存在7个潜在表位区,包括蛋白第174～181、215～222、231～240、288～294、332～344、415～429、547～555位可能为B细胞线性表位优势区域。该结果将有助于鸡蛋卵转铁蛋白B细胞表位的进一步精确定位。     

鸡蛋卵转铁蛋白铁结合能力及性质的研究

本试验研究了鸡蛋卵转铁蛋白与不同浓度铁离子的结合能力,以及卵转铁蛋白在不同p H值和Na HCO3条件下与铁离子的结合能力;采用差示扫描量热仪(DSC)和圆二色性(CD)光谱分析卵转铁蛋白铁饱和度对其热变性温度和结构的影响。结果表明,铁离子与卵转铁蛋白的摩尔比值在2.2左右时,卵转铁蛋白铁达到完全饱和;在中性和偏碱性的条件下,卵转铁蛋白对铁结合能力比较高;卵转铁蛋白铁结合能力随着Na HCO3浓度的增加而增强,当其浓度超过75 mmol/L以后,铁结合能力基本保持不变。卵转铁蛋白铁饱和度越高,其热变性温度越高,由去铁卵转铁蛋白的63.41℃到饱和铁卵转铁蛋白的83.29℃;去铁卵转铁蛋白比饱和铁卵转铁蛋白的远紫外CD光谱带更加趋于负值,α-螺旋含量有微小的减少,减少量为4.40%,而β-折叠、β-转角和其它的含量均有所增加,增加量分别:2.80%、1.20%、12.90%;在近紫外CD光谱区,饱和铁卵转铁蛋白的三级结构发生了较为明显的变化。     

卵转铁蛋白和卵白蛋白相互作用研究

卵转铁蛋白是蛋清中主要的抗菌蛋白质之一,卵白蛋白在蛋清中的含量也高达56%,在储藏过程中卵白蛋白可能会与卵转铁蛋白发生相互作用,进而影响鸡蛋的品质。研究采用一系列方法对卵白蛋白和卵转铁蛋白之间相互作用现象、动力学参数以及互作对卵转铁蛋白的功能性质进行了研究。循环伏安法以及双偏振极化干涉的方法初步鉴定了二者之间相互作用的存在,并推断其作用模式为嵌合式,表面等离子共振测定相互作用参数K_A/K_D值分别为152×10~(-3)和6.59×10~(-3),同时对相互作用后卵转铁蛋白的转铁性质进行测定,得到相互作用对卵转铁蛋白的转铁活性有一定的影响。     

色谱法在鸡蛋清主要过敏原分离纯化中研究进展

鸡蛋营养丰富,同时也是引起人体过敏的主要食物之一。蛋清中含有4种主要过敏原,包括卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类黏蛋白和溶菌酶。概述了鸡蛋中4种主要过敏原的理化特性及色谱法纯化过敏原的研究进展,旨在为规模化分离得到高纯度和高活性的过敏原提供参考。     

两步超滤法分离鸡蛋清中卵转铁蛋白的研究

以配有聚砜树脂衍生物膜的超滤装置为栽体,结合透析、冷冻干燥处理,发展一种从蛋清中分离提取卵转铁蛋白经济简单的方法,并研究操作压力、搅拌速度、溶液PH值、稀释倍数等操作参数对膜通量的影响,并优化工艺.结果表明,两步超滤法分离鸡蛋清中卵转铁蛋白的最佳条件是操作压力0.15 MPa,蛋清液和溶剂按体积比1:10进行稀释,搅拌速度125r/min,体系pH值为7.该条件下得到卵转铁蛋白纯度为29.6%.     

鸡蛋过敏原卵转铁蛋白标准物质候选物的研究

目的:制备高纯度的鸡蛋过敏原卵转铁蛋白,并详细表征其理化性质及免疫学性质,满足标准物质候选物的质量要求。方法:通过两步柱层析法制备卵转铁蛋白并分装、冻干,然后借助质谱鉴定身份;采用SDS-PAGE银染方法鉴定纯度,圆二色光谱、荧光光谱和核磁共振表征高级结构;利用Bradford法检测含量和SDS-PAGE银染方法评估稳定性,间接ELISA方法评估其与Ig E结合能力。结果:制备的蛋白经质谱鉴定为鸡蛋卵转铁蛋白,分子量约79.55 ku,等电点为6.85,纯度高达94.6%;结构分析显示,制备的卵铁蛋白保留了其天然结构特性,并且冻干未使卵转铁蛋白的结构产生明显的变化;在4℃条件下储藏5个月,卵转铁蛋白的含量、纯度、结构和免疫学活性均无明显变化。结论:制备的卵转铁蛋白可作为标准物质候选物。     

鸡蛋卵转铁蛋白螯合铁及其对大鼠贫血模型的影响

将从鸡蛋中分离纯化的卵转铁蛋白与FeCl3结合,研究其在不同铁离子浓度、pH值、NaHCO3和温度条件下与铁离子的结合能力。通过色度仪、红外光谱仪、粒径分析仪、扫描电镜等仪器研究冷冻和喷雾干燥对螯合铁卵转铁蛋白理化性质的影响。在0.4 mmol/L FeCl3,120 mmol/L NaHCO3,pH 8.0,温度低于60℃时,卵转铁蛋白铁结合能力为91.5%,结合的铁含量为1.28μg/g。冷冻和喷雾干燥对螯合铁卵转铁蛋白的色度、粒径分布、完全溶解时间存在极显著的差异,而在水分活度和化学键结构方面无明显差异。建立缺铁大鼠模型,考察30 d内卵转铁蛋白对大鼠贫血的改善作用,结果表明:冷冻和喷雾干燥处理的螯合铁卵转铁蛋白对贫血大鼠体重和脏器指数升高有显著作用;对血常规中的红细胞计数、血红蛋白浓度、血细胞压积、红细胞平均体积均有正向促进作用(P<0.01),能够显著增加大鼠血液中血清铁含量,提高血清铁蛋白含量,降低血清总铁结合力(P<0.05),部分指标优于对照组硫酸亚铁。卵转铁蛋白可作为一种生物补铁剂显著改善大鼠的缺铁性贫血状况。     

卵转铁蛋白双抗夹心ELISA方法的建立

卵转铁蛋白是鸡蛋中的主要过敏原,针对鸡蛋中主要过敏原卵转铁蛋白建立了双抗夹心ELISA方法,该方法检出限为(15.37±1.20)ng/m L。除白蛋白外,该方法对粘蛋白、溶菌酶、α-乳白蛋白、牛奶总蛋白、β-乳球蛋白、酪蛋白、花生总蛋白、大豆、杏仁和绿豆等致敏蛋白几乎没有交叉反应。板内重复性和板间重复性较好,因此所建立的方法可用于对卵转铁蛋白的检测。     

鸡蛋清中卵转铁蛋白的分离纯化

鸡蛋清经去卵粘蛋白、盐析后,获得卵转铁蛋白粗提物,通过两步Q-Sepharose Fast Flow离子交换色谱纯化卵转铁蛋白(OVT),利用SDS-PAGE电泳和HPLC法检测其纯度.结果表明,两步阴离子交换色谱获得纯度分别为78.26%和97.53%的卵转铁蛋白.