金银花叶黄酮体外抗氧化能力及对H2O2诱导RAW264.7巨噬细胞损伤的保护作用

目的：研究金银花叶黄酮的体外抗氧化能力和对H2O2诱导RAW264.7巨噬细胞损伤的保护作用。方法：金 银花叶粉经提取纯化后得到金银花叶黄酮粉,以抗坏血酸为阳性对照,测定金银花叶黄酮的总还原力,对羟自由 基、超氧阴离子自由基及1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基的清除能力。体外培养RAW264.7巨噬细胞,实验分为空 白组、模型组、对照组和金银花叶黄酮低、中、高剂量组,用H2O2诱导损伤RAW264.7细胞,噻唑蓝法测定细胞存 活率,试剂盒法测定细胞和细胞培养液中丙二醛、谷胱甘肽含量及超氧化物歧化酶、乳酸脱氢酶活力。结果：金银 花叶黄酮的总还原力及对各自由基的清除能力较强,并在足够质量浓度下等同于对照品抗坏血酸。金银花叶黄酮呈 剂量依赖性保护H2O2引起的RAW264.7细胞的损伤,降低细胞及细胞培养液中丙二醛含量,提高超氧化物歧化酶活力 及谷胱甘肽含量,提高细胞内乳酸脱氢酶活力。结论：金银花叶黄酮抗氧化能力较强,可修复H2O2诱导的RAW264.7 巨噬细胞的损伤,其作用可能与调节细胞氧化还原系统、清除自由基、提高细胞内抗氧化酶系的活力有关。     

生姜油树脂对过氧化氢引起RAW264.7巨噬细胞损伤的保护作用

目的:研究生姜油树脂对过氧化氢引起的RAW264.7巨噬细胞损伤的影响。方法:以生姜油树脂为研究对象,建立RAW264.7细胞的过氧化氢损伤模型,测定质量浓度分别为1、3、5μg/mL的生姜油树脂联合过氧化氢对RAW264.7细胞和细胞培养液中丙二醛、谷胱甘肽、超氧化物歧化酶以及谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化指标的影响。结果:生姜油树脂各剂量组均能显著缓解过氧化氢引起的RAW264.7细胞的损伤,降低细胞及细胞培养液内的丙二醛含量,提高谷胱甘肽含量以及超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性,其中5μg/mL生姜油树脂对过氧化氢引起的细胞损伤的保护作用效果最好。结论:生姜油树脂对过氧化氢引起的RAW264.7细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能是生姜油树脂通过调节细胞氧化还原系统,提高抗氧化能力,有效清除自由基的产生,从而对细胞的氧化性损伤起保护作用。     

金银花黄酮对过氧化氢诱导RAW264.7巨噬细胞损伤的保护作用

探讨金银花黄酮对RAW264.7巨噬细胞抗氧化活性的影响。通过过氧化氢诱导RAW264.7细胞损伤,建立细胞氧化损伤模型,研究金银花黄酮低、中、高剂量组(62.5,125,250 mg/mL)对损伤细胞的保护作用。研究结果表明:质量浓度62.5～250 mg/mL范围的金银花黄酮可显著促进RAW264.7细胞的增殖(P0.05)。金银花黄酮各剂量组显著提高了细胞及细胞培养液中总抗氧化能力(P0.05),显著提高了SOD、GSH-Px、CAT活性及GSH含量(P0.05);显著降低了细胞及细胞培养液中MDA含量(P0.05);显著降低了细胞中LDH活性并提高了细胞培养液中LDH活性(P0.05)。金银花黄酮促进RAW264.7细胞的增殖,并且对过氧化氢诱导的RAW264.7细胞损伤有良好的保护作用,存在剂量依赖效应。本研究为金银花功能性食品及保健品的开发提供理论依据。     

绿豆皮黄酮对H2O2诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用

目的:研究绿豆皮黄酮对H2O2诱导损伤人脐静脉血管内皮细胞的保护作用及其机制。方法:用体积分数70%的乙醇提取绿豆皮中黄酮,采用高效液相色谱法测定其有效成分;通过H2O2诱导HUVEC细胞损伤,建立细胞氧化损伤模型。试验被分为正常对照组、H2O2组、维生素C组、绿豆皮黄酮低、中、高剂量组(20,60,80μg/m L),通过MTT法测定细胞增殖能力,生化比色法检测各组细胞及培养液中的超氧化物酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量。结果:H2O2呈剂量依赖性降低内皮细胞活力,并引起细胞凋亡。其中1 000μmol/L H2O2处理HUVEC后,与正常组相比,细胞存活率明显受到抑制,而绿豆皮各剂量组能显著提高细胞和细胞培养液中的GSH-Px、SOD、GSH活性,降低MDA含量,同时降低细胞中LDH活性并增强细胞培养液中的LDH含量。结论:绿豆皮黄酮能抑制H2O2诱导的内皮细胞凋亡,减轻H2O2对内皮细胞的损伤作用,其机制是:绿豆皮黄酮抑制损伤细胞脂质过氧化,提高机体抗氧化酶活性,清除自由基。     

银杏花粉黄酮苷的恶味乳杆菌B2生物转化产物及其抗氧化活性评价

目的：研究恶味乳杆菌B2（Lacbacillus perolens B2）生物转化对银杏花粉黄酮组分及其抗氧化活性的影响。方法：分析银杏花粉及其生物转化产物的提取物和各自石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相萃取物的得率和高效液相色谱图,通过2,2’-连氮基-双-（3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力评价其体外抗氧化活性,通过对H2O2损伤小鼠巨噬细胞RAW264.7的保护作用评价其细胞抗氧化活性。结果：通过L. perolens B2的生物转化,提取物及各相萃取物得率均有所提高,银杏花粉主要黄酮苷被转化为以山柰酚为代表的黄酮苷元,并富集于乙酸乙酯萃取相。体外抗氧化活性评价显示,通过L. perolens B2的生物转化,提取物和各相萃取物的体外抗氧化能力均得到提高,其中生物转化产物的乙酸乙酯相萃取物的体外抗氧化活性最高。细胞实验显示,供试的银杏花粉及其生物转化产物的提取物和各自的乙酸乙酯相萃取物均可减缓由H2O2损伤导致的RAW264.7细胞凋亡,并且存在剂量依赖关系。生物转化产物的提取物及乙酸乙酯相萃取物对H2O2损伤RAW264.7细胞的保护能力均高于对应的银杏花粉样品,其中生物转化产物的乙酸乙酯相萃取物保护能力最强,当其质量浓度为15 μg/mL时,几乎可以完全保护RAW264.7细胞不受H2O2损伤。结论：通过L. perolens B2的生物转化,银杏花粉主要黄酮苷被转化为以山柰酚为代表的黄酮苷元,提取物及各相萃取物的得率、体外抗氧化活性及对H2O2诱导损伤的RAW264.7细胞的保护作用均显著提高（P＜0.05）,其中生物转化产物的乙酸乙酯相萃取物抗氧化活性最高。     

小米糠黄酮对H_2O_2致HepG2氧化应激损伤的保护作用

目的:研究小米糠黄酮对H2O2致HepG2细胞氧化损伤的修复作用及其机制。方法:实验分为正常组、氧化应激模型组以及小米糠黄酮低、中、高剂量组,测定小米糠黄酮对H2O2诱导构建氧化应激损伤模型的细胞增殖率、胞内活性氧水平、抗氧化物酶系和凋亡蛋白表达量的影响。结果表明:小米糠黄酮显著缓解H2O2对HepG2造成的细胞生长抑制(P0.05),显著降低胞内活性氧和丙二醛的水平(P0.05),显著提高超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力(P0.05),并且显著下调bax、p53、Caspase-3凋亡蛋白的表达量(P0.05)。小米糠黄酮对H2O2致HepG2氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能和抑制细胞凋亡通路蛋白的表达,调控细胞的氧化还原系统、清除胞内活性氧水平、提高胞内抗氧化酶系的活性有关。     

西番莲果皮花色苷对H2O2诱导L02细胞氧化损伤的抑制作用

目的 探究西番莲果皮花色苷(peel of passion fruits anthocyanins, PPFA)对H2O2诱导人正常肝细胞L02氧化损伤的抑制作用。方法 采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT]法建立H2O2诱导L02细胞氧化损伤的模型, 通过测定细胞丙二醛(malondialdehyde, MDA)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)指标, 观察PPFA对细胞氧化损伤的抑制作用, 结合非靶向代谢组学显著差异代谢物分析, 探讨其抗氧化机制。结果 PPFA体外清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH)自由基的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50)值为34.62 μg/mL, 有一定的羟自由基、超氧阴离子自由基清除能力。细胞实验表明, PPFA能够显著提高H2O2损伤的L02细胞总抗氧化力(P<0.05), 并显著降低损伤细胞中MDA生成量和LDH的释放量(P<0.05); 与损伤组相比, PPFA各剂量组SOD活性均显著升高(P<0.05), 中剂量组CAT与低剂量组GSH-Px的活性显著升高且达空白组水平(P<0.05)。代谢组学分析表明, 与损伤组相比, PPFA处理后细胞存在23种显著差异代谢物, 涉及到谷胱甘肽代谢、胆汁分泌、铁死亡和脂肪酸生物合成途径。结论 PPFA对H2O2诱导L02细胞的氧化损伤有抑制作用, 表现出显著的细胞抗氧化活性。     

海参蛋白肽对H_2O_2诱导RAW264.7细胞氧化损伤的保护作用

以海参为原料,研究海参蛋白肽的抗氧化性以及对H2O2诱导RAW264.7巨噬细胞氧化损伤的保护效果和作用机制。以清除羟自由基(·OH)能力、Fe2+螯合能力和Fe3+还原能力为指标,评价海参蛋白肽的体外抗氧化活性。以H2O2刺激RAW264.7巨噬细胞建立氧化损伤细胞模型,采用2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针法测定细胞活性氧(ROS)水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞活力,实时荧光定量PCR测定细胞血红素氧合酶-1(HO-1)m RNA表达水平。结果表明,海参蛋白肽能够清除·OH,具有Fe2+螯合能力和Fe3+还原能力,海参蛋白肽的这种体外抗氧化能力呈现浓度依赖效应。海参蛋白肽显著降低氧化损伤RAW264.7巨噬细胞ROS水平和提高氧化损伤细胞活力(P0.05)。而且,海参蛋白肽显著提高巨噬细胞内HO-1 m RNA表达(P0.05),HO-1抑制剂锌原卟啉IX(Zn PPIX)部分逆转海参蛋白肽对氧化损伤巨噬细胞活力的促进作用。这些结果说明,海参蛋白肽通过上调RAW264.7巨噬细胞HO-1 m RNA表达水平,发挥对巨噬细胞氧化损伤的保护作用。     

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷保护RAW264.7细胞免受过氧化氢诱导的氧化损伤

本研究旨在探究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷（cyanidin-3-O-glucoside,C3G）对H2O2诱导RAW264.7细胞氧化损伤的保护作用及其机制。通过噻唑蓝法测定C3G和过氧化氢分别对RAW264.7细胞存活率的影响;采用酶联免疫吸附测定法检测细胞内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力以及一氧化氮（nitric oxide,NO）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平;利用2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯活性氧荧光探针检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;通过逆转录定量聚合酶链式反应和Western blot法分别测定相关mRNA和蛋白表达水平。结果表明,C3G（6.25～25.00 μmol/L）能显著抑制H2O2诱导RAW264.7细胞活性降低（P＜0.05）。C3G显著降低H2O2诱导RAW264.7细胞内ROS过表达、MDA水平和NO释放（P＜0.05）,显著增加SOD和GSH-Px活力（P＜0.05）。此外,与空白对照相比,400 μmol/L H2O2处理组中,蛋白激酶Mst1/2和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白Keap1的mRNA及蛋白相对表达水平显著上调（P＜0.05）,而细胞中核因子E2相关因子和下游抗氧化酶HO-1的mRNA及蛋白相对表达水平显著下调（P＜0.05）;而采用C3G干预RAW264.7细胞,上述相关mRNA及蛋白的相对表达水平被逆转。结论：C3G对H2O2诱导RAW264.7细胞氧化损伤保护作用,可能与激活Mst/Nrf2信号通路和提高抗氧化酶活性有关。     

红毛藻多糖对H2O2诱导的Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究红毛藻多糖（Bangia fusco-purpurea polysaccharide,BFP）对H2O2诱导的人结肠腺癌（Caco-2）细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：构建过氧化氢（H2O2）诱导的Caco-2细胞氧化损伤模型,通过形态学观察和测定细胞裂解液中的抗氧化物水平及相关酶活力,评价BFP对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用。结果：BFP可明显提高H2O2诱导氧化损伤的Caco-2细胞活力,降低细胞内活性氧生成水平,提高细胞内超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活力以及还原型谷胱甘肽水平,减少丙二醛生成,并通过抑制Caspase-3和Caspase-9活性来改善氧化应激损伤引起的细胞凋亡。结论：BFP对H2O2诱导氧化应激损伤的Caco-2细胞具有保护作用,可通过增强细胞内源性抗氧化酶活力、提高非酶类抗氧化物水平和抑制细胞凋亡明显缓解H2O2诱导的Caco-2细胞氧化应激损伤。     

不同形态硒与VE联用对H_2O_2诱导人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:研究不同形态硒化合物(有机硒:L-硒甲基硒代半胱氨酸;无机硒:亚硒酸钠)单独使用及其与VE联合使用后对H_2O_2诱导人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)产生氧化应激损伤的保护作用。方法:采用体外细胞培养方法,将HUVECs随机分为7组:对照组、H_2O_2组、L-硒甲基硒代半胱氨酸(L-Se-methylselenocysteine,L-Se MSC)组、亚硒酸钠(sodium selenite,SS)组、VE组、L-Se MSC+VE联用组、SS+VE联用组。经不同样品干预处理后,采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测HUVECs存活率;检测各组细胞内脂质氧化终产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性的变化。结果:各处理组HUVECs存活率之间没有显著差异;与H_2O_2组比较,0.1 mg/L亚硒酸钠、10 mg/L VE处理能使HUVECs内MDA生成量显著减少,SOD和GSH-Px活性显著升高,并且亚硒酸钠和VE联合使用在细胞水平上具有显著的协同作用,而L-Se MSC组与对照组无显著差异。结论:亚硒酸钠和VE均可保护由H_2O_2诱导引起的HUVECs氧化损伤,提高HUVECs抗氧化能力,并且亚硒酸钠和VE联用具有明显的协同抗氧化作用。     

Antioxidative and anti-inflammatory protection of oleanolic acid and ursolic acid in PC12 cells

PC12 cells were used to examine the in vitro antioxidative and anti-inflammatory effects of oleanolic acid (OA) and ursolic acid (UA). PC12 cells were pretreated with OA or UA at 20 and 40 microM and followed by exposure of hydrogen peroxide (H(2)O(2)) or 1-methyl-4-phenylpyridinium ion (MPP(+)) to induce cell injury. Results showed that H(2)O(2)- or MPP(+)-treatment significantly decreased cell viability and increased lactate dehydrogenase (LDH) release (P < 0.05). The pretreatment from OA or UA significantly and concentration-dependently reduced subsequent H(2)O(2)- or MPP(+)-induced cell death and LDH release (P < 0.05). Either H(2)O(2)- or MPP(+)-treatment significantly increased malonyldialdehyde (MDA) formation, decreased glutathione (GSH) content, and diminished glutathione peroxidase (GPX), catalase, and superoxide dismutase (SOD) activities (P < 0.05). The pretreatment from OA or UA significantly retained GSH, and reversed H(2)O(2)- and MPP(+)-induced impairment in catalase and SOD activities (P < 0.05), and decreased MDA formation (P < 0.05). Either H(2)O(2)- or MPP(+)-treatment significantly elevated interleukin-6 (IL-6) and tumor necrosis factor (TNF)-alpha levels (P < 0.05). The pretreatments from OA or UA significantly attenuated subsequent H(2)O(2)- or MPP(+)-induced release of IL-6 and TNF-alpha (P < 0.05). Based on the observed antioxidative and anti-inflammatory activities from OA and UA, these 2 compounds were potent agents against neurodegenerative disorder.     

草苁蓉提取物对HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用

目的：研究草苁蓉乙醇提取物（Boschniakia rossica ethanol extract,BREE）对H2O2诱导的HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：用H2O2诱导HepG2细胞氧化应激损伤,采用噻唑蓝（methylthiazolyldiphenyltetrazoliumbromide,MTT）比色法检测BREE对HepG2细胞氧化损伤的保护作用;比色法测定培养液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartateaminotransferase,AST）的释放率,以及细胞中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）及丙二醛（malondialdelyde,MDA）水平;蛋白印迹法测定细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）、c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）总蛋白及其磷酸化形式的表达水平以及核转录因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）的核内转移。结果：BREE单独处理时,在所测质量浓度范围内对HepG2细胞增殖无显著影响。与模型组相比,BREE能显著提高氧化损伤细胞的存活率;降低氧化损伤细胞培养液中LDH、ALT和AST的释放;降低细胞MDA水平,增高细胞SOD活性和GSH含量。氧化损伤发生的不同时期,ERK、JNK、p38 MAPK和NF-κB蛋白均有激活,而BREE在氧化损伤发生1 h时减少ERK激活和NF-κB核转移,氧化损伤发生12 h时减少JNK蛋白激活。结论：BREE对H2O2所致HepG2细胞氧化应激损伤具有保护作用,此作用可能与其抑制ERK、JNK的活化和NF-κB的核内转移有关。     

大黄酸对正常和氧化损伤内皮细胞的增殖和氧化保护作用

目的：观察大黄酸对正常和氧化损伤的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的影响。方法：建立H2O2氧化损伤模型,采用不同浓度的大黄酸对内皮细胞进行处理,检测内皮细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率、丙二醛(MDA)含量、一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活力和超氧化物歧化酶(SOD) 活力及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px) 活力的变化;采用流式细胞术研究内皮细胞的凋亡情况,探讨大黄酸对内皮细胞的保护作用。结果：大黄酸浓度在16μmol/L以下时,对HUVEC的增殖无显著性影响;浓度在2μmol/L以上时,减轻HUVEC受到氧化损伤的程度,对氧化性损伤具有保护作用;同时降低了LDH释放率,下调了MDA含量,提高了NO含量和NOS、SOD、GSH-Px的酶活力,显著减少了细胞凋亡率。结论：HUVEC经2～16μmol/L大黄酸处理,可以有效减轻H2O2对其造成的氧化损伤,维持正常的生理形态。     

γ-萜品烯的体内外抗氧化性研究

本文通过细胞荧光强度、3种抗氧化酶活性(超氧化物岐化酶,SOD;谷胱甘肽过氧化物酶,GSH-Px;过氧化氢酶,CAT)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量的测定,在细胞模型和动物实验中研究γ-萜品烯的体内外抗氧化能力。结果表明,Hep-G2细胞内的荧光强度随着γ-萜品烯质量浓度的增加而下降,二者呈现良好的剂量-作用关系,说明γ-萜品烯可以有效结合细胞膜内外的自由基或活性氧,从而减少细胞内带有荧光的氧化产物的积累;过氧化氢诱导建立的氧化应激细胞模型和动物实验结果表明,γ-萜品烯可以显著提高超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活性及谷胱甘肽的含量(p<0.05),并显著降低丙二醛的含量(p<0.05)。以上研究结果表明,γ-萜品烯在体内外均表现出一定的抗氧化作用。     

榆干离褶伞发酵液体外抗氧化性能研究

目的:研究榆干离褶伞发酵液的体外抗氧化作用。方法:利用比色法测定榆干离褶伞发酵液对羟基自由基.OH、H2O2、二苯基苦味酰基苯肼(DPPH)的清除能力和红细胞自氧化溶血的影响以及H2O2诱导的肝损伤组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)的活性和丙二醛(MDA)的含量。结果:榆干离褶伞发酵液具有清除.OH、H2O2和DPPH自由基能力,降低红细胞溶血率,提高肝组织SOD、GSH-Px、CAT活性并抑制肝组织MDA的生成。结论:榆干离褶伞发酵液具有体外抗氧化作用。