血红素氧合酶-1介导海参蛋白肽对脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的抑制作用

为研究海参蛋白肽对脂多糖(LPS)诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症反应的抑制作用及作用机制,本研究利用LPS刺激RAW264.7巨噬细胞建立炎症模型,采用Griess法测定细胞一氧化氮(NO)含量,实时荧光定量PCR测定细胞内诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)以及血红素氧合酶-1(HO-1)m RNA表达。结果表明,海参蛋白肽以浓度依赖效应显著抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞NO生成以及TNF-α、IL-1β、IL-6和i NOS m RNA表达(p0.05),显著提高细胞内HO-1 m RNA表达(p0.05)。HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ(Zn PP-Ⅸ)部分逆转海参蛋白肽对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的抑制作用。具有抗炎活性的海参蛋白肽富含甘氨酸、谷氨酸和天冬氨酸,分子量180~1000 u的组分为72.12%。这些结果说明海参蛋白肽通过上调细胞HO-1 m RNA表达发挥抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的作用。     

阿里红多糖组分对RAW264.7巨噬细胞免疫功能的影响

目的研究阿里红多糖(Fomes Officinals polysaccharide,FOPS)及其组分FOPS-a、FOPS-b对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用。方法以小鼠RAW264.7巨噬细胞为研究对象,不同浓度(50~1600μg/m L)FOPS、FOPS-a、FOPS-b干预后,用cck-8试剂盒测定细胞活力,中性红法测定其吞噬活性,NO试剂盒测定NO的含量,ELISA试剂盒测定TNF-α和IL-1β释放能力。结果 FOPS、FOPS-a、FOPS-b在一定的浓度范围内可以提高RAW264.7巨噬细胞的增殖活性、吞噬活性、一氧化氮以及TNF-α、IL-1β的释放量。结论 FOPS、FOPS-a、FOPS-b一定浓度范围内具有良好的增强RAW264.7巨噬细胞免疫功能的作用。     

紫球藻多糖免疫调节作用初步探究

探究紫球藻多糖对体外免疫细胞免疫功能的影响。用不同浓度的紫球藻多糖刺激小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7,用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作为阳性对照,格里斯试剂(Griess)法检测细胞上清液中一氧化氮(nitric oxide,NO)释放量,噻唑蓝(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)法测定紫球藻多糖对RAW264.7细胞活力的影响,中性红法检测细胞的吞噬能力。采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent,ELISA)检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)与白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的分泌情况。结果表明:不同浓度紫球藻多糖能够促进NO的释放,增强巨噬细胞对中性红的吞噬能力,刺激TNF-α与IL-6的释放。紫球藻多糖浓度在12.5μg/mL～400μg/mL的范围内,对细胞无毒性。试验结果初步证明:紫球藻多糖对巨噬细胞RAW264.7具有免疫调节作用,这将为进一步开发应用紫球藻多糖奠定基础。     

蒲公英糖蛋白体外抗炎作用及对NF-κB信号通路的调控

探讨蒲公英糖蛋白(glycoprotein from Taraxacum,TG)对由脂多糖引起的RAW264.7细胞炎症的抗炎效果,并阐明其活性的基本分子机制。利用脂多糖刺激RAW264.7细胞,建立体外炎症模型,采用噻唑蓝比色法检测TG对RAW264.7细胞的增殖毒性,Griess试剂法检测了一氧化氮(nitric oxide,NO)的分泌情况,反转录聚合酶链式反应检测炎症细胞因子——白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)m RNA以及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)m RNA的表达水平,酶联免疫吸附测定法测定IL-6和TNF-α的分泌量,Western blot检测P-IκB-α蛋白的表达水平,用以研究TG对核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号转导通路的抑制作用。结果表明:TG能够显著甚至极显著地抑制NO的分泌,IL-6、TNF-α、i NOS的m RNA的表达,IL-6和TNF-α的分泌(P0.05、P0.01)。TG高度显著上调了IκB-α的蛋白表达(P0.001),并显著下调了P-IκB-α的蛋白表达(P0.05),且与TG质量浓度成正比。其中在TG质量浓度为250、500、1 000μg/m L时对TNF-α分泌量的抑制率分别为28.6%、65.4%、89.3%,对IL-6分泌量的抑制率分别为32.3%、54.1%、85.7%。TG间接抑制了NF-κB信号转导途径,有显著的体外抗炎效果且抗炎效果与TG的质量浓度呈剂量依赖性。     

纳豆菌糖肽对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

为考察纳豆菌糖肽(BNGP)对正常状态及脂多糖(LPS)激活状态巨噬细胞的免疫调节作用,本文用不同浓度的BNGP单独处理或LPS和不同浓度的BNGP共同处理RAW264.7巨噬细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖作用,中性红吞噬试验检测吞噬能力,Griess试剂检测细胞培养上清液中NO含量,酶联免疫分析法(ELISA)检测细胞培养上清液中细胞因子(IL-1β、TNF-α)、促炎介质(PGE2)含量,Western Blot检测COX-2和i NOS蛋白表达水平。试验结果表明:BNGP在62.5~500μg/m L浓度范围内能提高正常状态的RAW264.7巨噬细胞的代谢活力,增加NO、IL-1β、TNF-α、PGE2的分泌量,提高COX-2和i NOS的表达量,高浓度(125μg/m L)能增强巨噬细胞的吞噬能力;当细胞处于LPS激活状态时,BNGP在62.5~500μg/m L浓度范围内能抑制IL-1β、TNF-α、PGE2的分泌,浓度为500μg/m L时可抑制NO的产生及i NOS的表达,高浓度(125μg/m L)则能下调COX-2的表达。     

阿魏侧耳胞外多糖对小鼠巨噬细胞的激活作用

利用巨噬细胞体外培养体系,研究阿魏侧耳胞外多糖对小鼠巨噬细胞的激活作用。无菌获得小鼠腹腔巨噬细胞,中性红吞噬实验检测细胞吞噬活性;荧光探针标记和Griess反应分别检测细胞内外NO的含量,酶联免疫吸附法检测细胞内一氧化氮合成酶(NOS)、培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)和白细胞介素12(IL-12)的含量。结果表明,与空白组相比,25~200 mg/L阿魏侧耳胞外多糖可显著增强巨噬细胞的吞噬活性(p0.05),增加细胞因子IL-1(p0.05)和IL-12(p0.05)的分泌量;50~200 mg/L阿魏侧耳胞外多糖可显著提高细胞NOS(p0.05)和NO(p0.05)的含量以及TNF-α的分泌量(p0.05)。因此,一定浓度阿魏侧耳胞外多糖对体外培养的小鼠巨噬细胞具有激活作用。     

费菜粗多糖对小鼠免疫活性的研究

目的 :研究费菜(Sedum aizoon L.)粗多糖对小鼠免疫活性的研究 方法 :首先采用水提醇沉法以及Sevage法去蛋白等工艺提取费菜粗多糖。体外实验需将配置成不同浓度的多糖提取液分别与脾脏细胞,RAW 264.7共培养,采用ELISA法检测细胞上清中细胞因子IL-2,IFN-γ, IL-6,TNF-α浓度的变化。采用cck-8法,研究费菜粗多糖对RAW 264.7增殖的影响。Griess法测定细胞上清液中NO的含量变化。结果 :与正常组相比,费菜粗多糖组显著增加IL-2,IFN-γ,IL-6,TNF-α,NO的分泌量,差异具有统计学意义(p0.01)。促进RAW 264.7增殖,差异具有统计学意义(p0.05)。结论 :费菜多糖轮增加脾淋巴细胞与RAW264.7分泌IL-2、IFN-γ、 IL-6、TNF-α、NO,促进RAW 264.7增殖.     

香乳菇多糖对Hela细胞凋亡及对RAW264.7细胞免疫活性的影响

为研究香乳菇多糖(LC-1)的抗肿瘤和免疫调控活性,将人的宫颈癌Hela细胞和小鼠巨噬细胞RAW264.7体外培养,分别通过CCK-8法、流式细胞术和ELISA技术检测不同浓度LC-1对Hela细胞增殖和凋亡周期的影响,对RAW264.7细胞增殖、吞噬的影响,及对RAW264.7细胞分泌NO、IL-6和TNF-α的影响。结果表明:香乳菇多糖对体外培养的Hela细胞有明显的抑制作用,且影响Hela细胞的形态及凋亡周期,当LC-1浓度为10μg/mL时,Sub峰含量可达19.4%;同时,LC-1能调控巨噬细胞的免疫活性,当LC-1浓度为10μg/mL时,巨噬细胞增值率和吞噬活性分别为67.48%和87.09%,亦能促进巨噬细胞从G0/G1期向G2期和S期转化,同时刺激巨噬细胞产生IL-6和TNF-α,且呈现出明显的剂量依赖性,但对NO生成没有明显的促进作用。综上,在体外试验中,香乳菇多糖LC-1能抑制宫颈癌Hela细胞生长,促进RAW264.7细胞增殖和吞噬活性,刺激巨噬细胞产生免疫因子。     

锁阳多糖对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用的影响

目的 研究锁阳多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的影响。方法 以巨噬细胞RAW264.7为研究对象, 设置空白对照组、阳性(LPS)对照组、锁阳多糖给药组(25、50、100、200、400 μg/mL), 用CCK-8法测定细胞增殖活性, 中性红法测定其吞噬活性; Griess法测定其对NO分泌量的影响; ELISA法测定其IL-6和TNF-α的释放能力。结果 与空白组比较, 不同浓度(25~400 μg/mL)锁阳多糖均能够促进巨噬细胞RAW264.7的增殖(P<0.05或P<0.01), 干预24 h和48 h的增殖活性明显高于干预6 h和12 h的增殖活性(P<0.05); 锁阳多糖(25~ 400 μg/mL)能显著促进细胞的吞噬活性(P<0.05); 干预48 h后, 锁阳多糖(25~400 μg/mL)的NO分泌量显著高于空白组和LPS组(P<0.05); 与空白组和LPS组相比, 锁阳多糖(25~400 μg/mL)能显著促进细胞IL-6和TNF-α的释放(P<0.01)。结论 锁阳多糖在一定浓度范围内对巨噬细胞RAW264.7具有良好的免疫调节作用。     

大粒车前子多糖对脂多糖刺激RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

采用脂多糖构建RAW264.7巨噬细胞炎症模型,研究大粒车前子多糖的抗炎作用。培养巨噬细胞RAW264.7,利用脂多糖构建细胞炎症模型,中性红吞噬实验检测细胞吞噬活性;酶联免疫吸附法检测车前子精制多糖（Plantago asiatica L. crude polysaccharide,PLCP）处理前后细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosisfactor-α,TNF-α）、白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）和IL-6的分泌量,Griess反应测定RAW264.7细胞释放NO水平。结果表明,PLCP可显著抑制RAW264.7炎症细胞的吞噬活性,降低炎症细胞因子TNF-α、IL-10和IL-6的分泌量及NO的释放量。