长叶车前花叶病毒血清关系的免疫电镜研究

长叶车前花叶病毒(RMV)寄主范围广,为重要植物病毒,本实验室自70年代发现研究和明确了病毒基本特性,但对它和TMV不同株系间的相互关系了解甚少,且难以用常规方法进行研究,用免疫吸附电镜技术进行研究将是很有益的探索。本文选用YMV_(15),RMV_(ha),TMVⅠ,TMVⅡ,TMV_(no)等五种毒株,并制得相应的抗血清Anti YMV_(15),Anti RMV_(ha),Anti TMVⅠ,Anti TMV_(no),以正常血清为对照,分别用经不同抗血清(1:100)处理的载网吸附病毒(2.5μg/ml),染色后,在10000倍的电镜视野下观察拍照,并分别记数10个电镜视野下病毒的吸附量,把所得结果整理列表如下:     

用免疫电镜技术检测和研究甜菜坏死黄脉病毒和黑色焦枯病毒

本文利用免疫电镜技术准确地检出带有甜菜坏死黄脉病毒的病株，从而正确评价甜菜丛根病防治效果，对甜菜黑色焦枯病毒进行了免疫电镜形态学观察并证实了抗血清制备试验效果良好。     

家蚕质多角体病毒RDRP的免疫电镜定位研究

以原核表达BmCPV RDRP重组蛋白为抗原制备的兔抗血清为一抗,直径15nm山羊抗兔IgG 胶体金为二抗。应用3%多聚甲醛 0 1%戊二醛混和固定液、K4M低温包埋剂和紫外光聚合制备的样品进行免疫电镜观察,结果感染BmCPV(C)病蚕的中肠柱状细胞中,游离和病毒多角体中BmCPV的病毒粒子均能结合胶体金颗粒,平均标记率为25%左右,认为BmCPV(C) RDRP基因编码的蛋白应为BmCPV病毒的结构蛋白,位于病毒的衣壳上。其中一抗的使用浓度为1∶200,二抗的使用浓度为1∶40,可以获得较好的免疫标记效果和较少的非特异性标记。     

烟草胚囊胞外钙调素的免疫电镜定位

烟草胚囊胞外钙调素的免疫电镜定位陈以峰梁世平杨弘远（武汉大学生命科学学院植物生殖生物学研究室，武汉４３００７２）本文报道用免疫电镜方法定位烟草胚囊胞外ＣａＭ的研究结果，并探讨其生理功能。材料与方法取当天开花的大叶烟（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＶ...     

综述：免疫电镜技术中包埋剂的应用

免疫电镜技术中包埋剂的使用直接影响到研究结果,实验室常用的环氧树脂类包埋剂对组织抗原的保存有一定影响,在其处理过程中要损害生物系统。丙烯类树脂包括近年来发展起来的低温包埋剂Lowicryl是属极性包埋剂,粘度低,可迅速浸透组织,而且在进行免疫组化反应时对抗原系统保存较好,能得到较强的阳性结果。本文综述了各种包埋剂的理化特性,应用于免疫电镜技术时的优缺点,及在实际工作中如何选用适当的包埋剂。     

应用免疫吸附电镜技术检测草鱼出血病病毒

免疫吸附电镜技术[ISEM]是免疫学与超微形态学相结合的一种新的检测技术。它快速,灵敏、特异性强,是可靠的病毒诊断技术之一。我们应用免疫吸附电镜技术对草鱼出血病病毒进行了检测,并获得了理想的效果。方法: 将兔抗草鱼出血病病毒血清分别稀释为1:200、1:400、1:800、1:1600、1:3200、1:6400倍,然后取不同稀释度的抗血清分别滴在蜡盘上,把铜网漂浮在液面上(室温18-20(3)孵化5分钟后,将铜网移至病毒粗制样品中悬浮,室温反应15分钟,捞起吸干,用蒸馏水漂洗,2％PTA染色3-5分钟。同时设酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫复合物及PTA负染色电镜观察作比较。     

具有标记靶作用的固相免疫电镜快速诊断法(SPA—G IEM)

目前广泛使用的免疫电镜技术,具有灵敏度高及快速等突出优点,但在实际应用中,尚存在各地结果判断不一致和判断困难的问题。针对这种情况,本文报道了国内首次使用金黄色葡萄球菌(Staphylococcal)菌体,作为标记靶吸附病毒,在电镜下观察的方法(SPA G IEM)。这种方法与常规免疫电镜技术相比,不仅具有免疫电镜的优点,还能有效地避免免疫电镜中,病毒自身聚集与免疫电镜效果二者难区别的缺点。同时也避免免疫电镜形成最佳复合物取决于抗原抗体最适比例的前带效应(Prozont effect)的影响。金黄色葡萄球菌菌体,体积大,电镜下容易识别。用该菌体作为病毒固相载体,可以大大提高观察判断效率。作者认为:这种方法在临床病毒诊断中,具有独特的优点。     

应用酪氨酸羟化酶抗体的免疫电镜技术

免疫电子显微镜技术是近二十年发展起来的一种新技术。应用免疫电镜可以进一步揭示亚细胞水平神经组织的超微结构和化学递质之间的形态学关系。免疫电子显微术与常规的电镜制样技术不同,尤其在胚胎样品制备过程中,不仅要考虑到样品应具有较好的超微结构,同时也要考虑到组织切片中抗原活性的保存,要获得比较理想的标本,需根据自己实验要求,摸索出自己最理想的步骤和参数。我们采用了4％多聚甲醛和1％戊二醛磷酸缓冲液,再用单体多聚甲醛固定液的顺序灌流方法,以及在免疫反应中未加清洁剂的措施,有效地兼顾了免疫反应产物和组织保存两方面。     

杆状病毒螺旋参数的测定

本文用光学衍射方法测定杆状病毒的螺旋参数。用烟草镶嵌病毒(TMV)为实验材料,由衍射谱计算得到的螺距,与已知的相符。从而使实验方法以及自己组合的光学衍射仪得到认证。电镜样品用1％浓度的醋酸双氧铀水溶液负染,染前用0.1M的KCl水溶液漂洗。用日立H-600分析型电镜,液氮冷却及冷针防污染,加速电压75KV、8万倍照像。为减少辐照损伤,采用尽可能低的照射强度。用微栅孔边缘的菲涅尔环进行聚焦,然后移入所需病毒颗粒,用过焦点系列照像法获得照片。见图2。     

葡萄球菌A蛋白在电子显微镜观察病毒中的应用研究

本文报导了国内首次使用葡萄球菌A蛋白(Stophylococca Protein A,简称SPA)在电镜观察病毒中的应用。并使用SPA所建立的固相免疫电镜方法(简称SPA-SPIEM)对轮状病毒、脊髓灰质炎病毒、类SV_(40)猴病毒分别进行了实验和检查。对比了各种浓度SPA、各种稀释度抗血清对检测病毒结果的影响。同时对直接电镜(简称DEM-PTA)、SPA-SPIEM和直接抗原抗体免疫电镜(简称IEM)三种制样方法所观察到的病毒形态结构进行了比较。结果表明:SPA-SPIEM法在镜下检出的病毒颗粒数比DEM-PTA法提高100—300倍左右,在显示病毒形态结构方面接近DEM-PTA法,比IEM法好。整个SPA-SPIEM制样过程,在1小时内可以全部完成。作者认为:SPA-SPIEM制样方法,在电镜检测病毒中是一种用材量微、灵敏度高、分辨率好、特异性强、快速准确的检测方法。在病毒分型、混合病毒分别检测、低滴度未知病毒检测等方面,具有独特的优点。是一种有发展前途,可应用于各种病毒检测的新方法。     

草莓脱毒苗脱毒效果的电镜鉴定

草莓的传统繁殖方法,是利用匍匐茎分株法进行世代繁殖,其后代由于退化,影响了产量和品质。本试验通过分生组织培养,热处理和花药培养进行脱毒和快速繁殖的研究,以提高草莓果实的产量和质量、上述组培苗经草莓指示植物和电镜的鉴定找出了草莓脱毒苗脱毒和快速繁殖的有效培育方法。本试验材料和方法是取田间自然感病苗且具有典型的、斑驳、矮化、镶脉和黄边的病症;草莓脱毒苗采用分生组织培养,热处理和花药组织培养的三种组培苗;草莓指示植物有EMC、UC_4、UC_5和UC_(10)。     

植物钙调素的免疫金标记电镜技术

本文用玉米根尖作为实验材料,建立了植物钙调素免疫胶体全电镜定位技术。采用Epon812常规包埋方法;以脱脂奶粉作为封闭试剂;用过碘酸钠处理切片,使之恢复抗原性。所用的兔抗小麦钙调素抗体对植物钙调素具有较高的亲和力和专一性。本方法具有操作方便。标记特异性较强,超微结构保存较好等特点。     

流行性出血热患者外周血细胞病毒抗原的免疫金标记

应用流行性出血热(EHF)病毒抗体及胶体金探针对EHF患者外周血细胞进行病毒抗原的定位·光镜免疫金银染色(IGSS)结果显示患者外周血淋巴细胞及血小板表面EHF病毒抗原阳性。采用LowicrylK4M低温快速包埋电镜免疫金染色(IGS)方法,发现金探针特异性定位于淋巴细胞胞质的大小空泡和液泡内(可能为病毒芽生、成熟部位增生、扩大的高尔基囊泡)以及血小板质膜、开放管道系统扩张的管腔内。结果表明EHFV能在人外周血淋巴细胞中复制成熟。血小板表面IGSS阳性物质主要为循环血中EHFV抗原与抗体形成的免疫复合物。     

微波照射技术用于电镜植物样品的制备

电镜已作为研究生物科学的基本检测工具。但由于超薄切片制样周期长,影响检测速度。自八十年代末,在国内开始应用微波照射样品制备技术,但在农业科学中,有关植物样品的微波制备方法,未见报导。作者尝试了微波照射技术应用于电镜植物样品制备的全过程中。采用烟草花叶病毒感染的心叶烟叶片,在制备的每一步用不同时间、不同功率进行处理,切片经电镜观察与常规制样相比较,较好地保存了细胞结构,同时也大大缩短了制样时间。     

动物病毒疫苗研制及其产品的电镜检测

应用电镜技术检查了某些原代和传代细胞，并且跟踪检查了疱疹病毒、痘病毒、腺病毒、细小病毒、冠病毒、RNA反录病毒、呼肠病毒、动脉炎病毒、小RNA病毒、弹状病毒、杯状病毒、黄病毒、双RNA病毒、正粘病毒、副粘病毒等某些成员的驯化、培育及筛选的目的毒。结果发现了部分培养细胞有支原体污染，有的还有细菌污染；同时在某些培养的原毒、基础种毒、生产种毒及其产品中也发现了一些病毒的污染和联苗中互相感染现象。如此证明了电镜技术能够及时发现问题，及时解决问题，使之科研少走弯路，提高产品质量。     

人类腹泻粪便中小圆形病毒的电子显微镜研究

我们在研究婴幼儿急性胃肠炎和腹泻及成人流行性腹泻的病原学时,用直接电镜和免疫电镜技术,从患者粪便标本中检出了4种小圆形病毒颗粒。粪便标本用生理盐水制成20～50％的悬液(水样便可不稀释),经超声波粉碎处理(振幅4μ,每次30秒钟,共3～5次),3000rpm离心30分钟,上清为被检样品。被检样品制备直接电镜或免疫电镜标本,用3％磷钨酸(pH6.4)做负染色。     

澄江县烟草病毒的电镜观察

澄江县烟草病毒的电镜观察＊木崇俊龙华刘宇君周庆和积鉴白光启（云南大学物理系，昆明６５００９１）自１９９１年以来，我们在澄江县凤麓镇郊采集受病毒感染的烟叶标本，从中提取病毒，制成电镜样品，进行透射电镜观察。我们的做法是到受病毒害的烟田按常用分类方法［１...     

用鬼笔环肽予处理保存花粉管中微丝超微结构的方法

近年来荧光标记的鬼笔环肽(F1—Ph)作为微丝的荧光探针已被广泛应用,有十多种植物的花粉管和花粉粒中的微丝用这种方法作过观察。此外,有少数电镜工作,阐明花粉管中的微丝与细胞器有联系。然而,花粉管中的微丝常因用常规电镜固定的方法不能保存下来,以致使这方面的研究受到限制。本研究根据鬼笔环肽有稳定微丝的作用,试验了先用鬼笔环肽予处理,然后进行常规透射电镜固定的方法,结果对微丝的保存效果是显著的。     

免疫金银扫描电镜法观察血细胞膜的谷胱甘肽过氧化物酶及泛素肽的方法

免疫胶体金标记扫描电镜法是70年代后期发展起来的新技术,对检查细胞膜的抗原分布和变化有特殊的优点,但该法要求较高活性大颗粒(50nm)胶体金和高分辨扫描电镜,目前我们无这种条件,为此,我们将光镜的免疫金银法过渡到扫描电镜。另外,为解决血浆对血细胞的影响,采用了试管内免疫胶体金一次性染色法,用这种方法检查了血细胞膜谷胱甘肽过氧化物酶和泛素肽(Ubiqnitin)效果良好。经各种对照(去抗体;去胶体金;单纯硝酸银;免疫胶金透射电镜检查;)证明扫描电镜下颗粒物是特异性免疫颗粒。说明免疫金银扫描电镜法有应用价值。主要方法步骤是:1.取适量静脉血注入试管,加2％多聚甲醛一戊二醛液与其混匀,在4℃下固定1小时;2.用TBS缓冲液反复冲洗;3.其余程序同免疫金常规     

马铃薯脱毒组培苗的电镜检测研究

马铃薯脱毒组培苗生产是马铃薯脱毒种薯繁育体系的重要环节,脱毒效果是脱毒组培苗质量的主要评价指标,直接影响到核心种薯的质量及整个体系的运行,因此,脱毒效果的检测是该体系的一个重要的技术组成部分。本项研究应用电镜技术系统地试验了对马铃薯脱毒组培苗的检测方法。(1)负染液的选择。应用烟草花叶病毒(TMV)、香石竹斑驳病毒(CarMV)、马铃薯病毒X(PVX)三种具有代表性的不同形态的植物病毒,对钼酸铵、磷钨酸钠、钨酸钠、醋酸铀等四种染液进行选择,其中2％钼酸铵(pH6.4)对球形病毒CarMV染色极佳,