丹参酮ⅡA增效大鼠骨髓源性内皮祖细胞VEGF、SDF-1表达

目的：研究在丹参酮ⅡA的辅助下,骨髓源性内皮祖细胞（EPCs）VEGF与SDF-1表达是否能增强,从而促进细胞归巢。方法：Percoll密度梯度离心法分离SD大鼠骨髓单个核细胞,血管内皮生长因子（VEGF）、表皮生长因子（（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导培养,并进行形态学、免疫学（免疫细胞化学染色）、功能学（Dil-acLDL与FITC-UEA-1双荧光染色）鉴定。将鉴定为EPCs的细胞分为单纯EPCs组（对照组）、EPCs＋丹参酮ⅡA组（加药组）。细胞培养第9d,Western blot与实时荧光定量PCR检测各组VEGF、SDF-1基因与蛋白表达。结果：EPCs＋丹参酮IIA组VEGF、SDF-1基因与蛋白表达均高于EPCs组（p均〈0.05）。结论：丹参酮ⅡA可上调大鼠骨髓源性内皮祖细胞VEGF及SDF-1表达,从而可能在缺血环境中更好促进EPCs归巢,更有效促进血管修复与再生。     

VEGF165基因修饰的神经干细胞对脑外伤大鼠的神经保护作用及机制

目的：探讨移植转染pDsVEGF165Redl-N1质粒的神经干细胞对脑外伤大鼠的神经保护作用及机制。方法：由新生大鼠脑组织分离培养神经干细胞,应用Lipofectamine2000介导pDsVEGF16sRed1-N1质粒转染神经干细胞;分别将PBS（A组）、神经干细胞（B组）、转基因神经干细胞（C组）移植到脑外伤大鼠局部损伤灶边缘;利用ELISA法检测转基因细胞在体内的表达情况,以免疫组化检测移植后局部损伤组织中微血管密度变化,通过NSS评分评价移植后大鼠神经功能的变化。结果：转基因细胞移植后在一定时间内持续表达VEGFl65,C组大鼠NSS评分从移植后第3天开始明显低于A组（P〈0．05）,而B组大鼠NSS评分则从移植后第7天开始明显低于A组（P〈0．05）,C组大鼠微血管密度从移植后第7天开始明显高于其他两组（P〈0．01）。结论：转基因神经干细胞表达的VEGF165既可以通过促进微血管再生和改善微循环发挥保护作用又可以直接作用于神经细胞发挥保护作用。     

阻断ERK1／2蛋白激酶可促进BMP9诱导的C3H10T1／2细胞成骨分化

目的：初步分析丝裂原活化蛋白激酶家族成员ERKl／2在BMP9诱导间充质干细胞成骨分化中的作用及可能机制。方法：BMP9重组病毒感染巳H10T1／2细胞,Westemblot检测ERKl／2激酶的磷酸化。ERKl／2的特异性抑制剂PD98059阻断ERKl／2活性,细胞化学染色和活定量检测碱性磷酸酶（AlkalinePhosphatase,ALP）的表达情况;Westernblot检测骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）表达,茜素红染色检测钙盐沉积情;荧光素酶报告基因实验检测srn日d经典途径的变化。RNA干扰抑制ERK1／2表达,分析其对-于BMP9诱导的C3H10T1／2细胞ALP活性和钙沉积的影响。结果：BMP9可以促进ERK1／2激酶的磷酸化;ERK1／2抑制剂PD98059可增强由BMP9诱导的c3H10T1／2细胞早期和晚期成骨化,并促进由BMP9诱导的Smad经典途径的活化;RNA干扰导致ERK1／2基因沉默同样也可促进BMP9诱导的QHIOT1／2细胞成骨分化。结：BMP9可以促进ERKI／2蛋白激酶的活化,而阻断ERK1／2蛋白激酶可进一步增强BMP9诱导的GH10T1／2细胞成骨分化。腺性况盐分论     

原代大鼠肾小球系膜细胞最佳电转染条件的探索和验证

目的探索并验证原代大鼠肾小球系膜细胞最佳电转染条件。方法设立不同的电压与电容组合、电击前孵育温度、质粒DNA浓度等电转染条件,将绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1导入原代大鼠肾小球系膜细胞。24h后比较各组细胞存活率和绿色荧光蛋白表达情况,确立最佳电转染条件。再以此条件电转染质粒pcDNA3.1和pcDNA3.1-FHL2,48h后收取两组细胞RNA和蛋白。应用RT-PCR和Western印迹检测目的基因FHL2的核酸和蛋白表达,验证电转染效果。结果在电击前室温孵育,40μg质粒,340V电压、550μF电容的最佳电转染条件下,原代大鼠肾小球系膜细胞的电转染效率可达40%以上,细胞存活率在50%左右。转染FHL2质粒组较对照组检测FHL2的核酸和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论适当的电转染条件可以有效转染原代大鼠肾小球系膜细胞。     

慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白两种途径体内转染大鼠角膜基质细胞有效性的试验研究

目的:观察慢病毒载体介导的增强型绿色荧光蛋白(lenti-EGFP)通过两种途径体内转染大鼠角膜基质细胞的有效性,为角膜疾病尤其是准分子激光术后角膜Haze形成的基因治疗提供实验基础.方法:Lenti-EGFP通过角膜基质注射和刮除角膜上皮敷贴带lenti-EGFP的棉片两种不同方法体内转染大鼠角膜基质细胞,转染后定期...     

心力衰竭时大鼠心肌细胞肌浆网钙回摄的变化

目的：探讨心力衰竭时心肌细胞肌浆网钙回摄异常的机制。方法：结扎大鼠冠状动脉左前降支制备慢性心衰模型。4周后采用酶解法分离假手术组和心衰组大鼠心室肌细胞,利用激光扫描共聚焦显微镜检测心肌细胞肌浆网钙含量。采用western?blot技术检测心肌细胞肌浆网钙调蛋白SERCA2a、PLN、PP1的表达水平。结果：心衰组的大鼠心肌细胞荧光强度小于假手术组,并且心衰组大鼠心肌细胞咖啡因诱导的钙瞬变也低于假手术组;心衰组大鼠心SERCA2a表达水平降低,PP1的水平升高,PLN总体水平不变,但磷酸化的PLN水平降低。结论：钙泵表达量下降和钙泵活性降低是心力衰竭时心肌细胞肌浆网钙回摄减少的主要原因。     

RNAi沉默整合素连接激酶基因对人膀胱癌BIU-87细胞体内成瘤的影响

目的：研究RNAi沉默整合素连接激酶（integrin-linked kinase,ILK）基因对人膀胱癌BIU-87细胞裸鼠皮下成瘤的影响。方法：构建4条针对ILK基因的特异性miRNA干扰载体和1条阴性对照载体,并利用脂质体转染法将其转染BIU-87细胞,并筛选获得稳定转染细胞株。利用RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测抑制效果。将10只裸鼠随机分为2组,皮下分别接种转染组细胞和未转染组细胞,观察瘤体的生长情况,并于接种4周后处死裸鼠,测量其瘤体体积和重量,并将瘤体做HE染色,观察瘤体病理情况。结果：转染组细胞ILK的表达明显受到抑制,以miR-3组的抑制效率最高。裸鼠皮下成瘤实验检测发现：两组均有瘤体形成,未转染组较转染组瘤体生长快,未转染组体积平均为：289.56±36.49mm3,转染组为：56.67±4.32mm3。瘤体重量分别为：1.265±0.02 g和0.518±0.03g。转染组与未转染组相比差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：利用RNAi技术能有效抑制靶基因ILK的表达,从而降低膀胱癌细胞的体内的增殖能力。     

缺氧诱导因子1α对大鼠骨髓间充质干细胞核心结合因子α1表达的影响

目的：研究体外低氧实验中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）对大鼠骨髓间充质干细胞核心结合因子α1（Cbfα1）表达的影响。方法：将体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞分别置于常氧（含有5％c02的培养箱中）和低氧（含4％02、5％CO2和91％N2的三气培养箱中）中培养,分别于1d、3d、5d和7d用实时荧光定量PCR检测细胞内HIF-1α和CbfalmRNA的表达水平：用siRNA抑制细胞HIF-1αmRNA表达后用Westernblot法检测HIF-1α和Cbfal蛋白表达。结果：与常氧组相比,低氧组细胞HIF-1αanRNA的表达均增加（1d、3d、5d和7d：P〈0．05）,且3d达到最高峰;细胞CbfalmRNA的表达明显下降,3d尤为明显（P〈0．05）：低氧组细胞转染siRNA干扰HIF-1α表达后,能促进细胞内Cbfcd蛋白的表达（P〈0．05）。结论：低氧微环境抑制骨髓间充质千细胞的成骨向分化,细胞内HIF-1α反向调节Cbfal的表达。     

姜黄素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的：探讨姜黄素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制。方法：采用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,随机分成假手术组、对照组、100mg/kg姜黄素组及300mg/kg姜黄素组及300mg/kg姜黄素组,分别在脑缺血再灌注后24h处死,观察大鼠神经功能缺失的评分,应用TTC染色观察梗死体积,尼氏染色观察神经元形态结构特征,TUNEL染色计数凋亡神经元,荧光免疫组化及Western-blot检测caspase-3蛋白的表达变化。结果：姜黄素能明显改善大鼠缺血再灌注后的神经功能缺损,缩小梗死体积,明显减少TUNEL染色阳性细胞数,下调caspase-3蛋白的表达。结论：姜黄素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有良好的神经保护作用,这可能与其减少caspase-3的表达,抑制缺钱神经元的凋亡密切相关。     

慢病毒载体转染离体兔角膜基质细胞的实验研究

目的：观察慢病毒载体转染离体兔角膜基质细胞的有效性及对细胞活性的影响。方法：转染组用慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白（Lentivirus-enhanced green fluorescent proteins,Lenti-EGFP）转染细胞,对照组则加入空白培养液,在不同感染复数（multiplicity of infection,MOI）及感染后不同时间段在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况并计算转染率;RT-PCR检测EGFP mRNA的表达;MTT比色法和流式细胞技术（Flow cytometer,FCM）检测病毒对细胞增殖和凋亡的影响。结果：Lenti-EGFP转染细胞后从48h开始可见绿色荧光,在MOI=500时,转染后第5天转染率可达51%;RT-PCR检测转染组有EGFP的mRNA表达;MTT结果显示在MOI为1~500时,漫病毒不影响细胞的增殖;在MOI=500时,FCM检测慢病毒载体对细胞凋亡无影响。结论：慢病毒载体可以在体外稳定有效转染兔角膜基质细胞且不影响细胞活性,是角膜基质细胞理想的基因转染载体。     

酪氨酸蛋白激酶抑制兔角膜新生血管的实验研究

目的：探讨酪氨酸蛋白激酶抑制剂sunitinib对碱烧伤诱导的兔角膜新生血管的抑制作用。方法：采用碱烧伤法诱导兔角膜新生血管模型。将30只新西南大白兔随机分为3组,A组：给予0.5mg/ml sunitinib滴眼,B组：给予1mg/ml sunitinib滴眼,C组：给予生理盐水滴眼作为实验对照组。于碱烧伤后4d、7d、14d显微镜观测新生血管长度及面积。在4d、14d时各组处死4只兔,角膜作病理分析和免疫组织化学法测定血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达。结果A、B组的角膜新生血管长度及面积均显著少于C组（p〈0.01）;A、B组VEGF蛋白表达较C组弱,具有统计学差异（p〈0.01）;结论：酪氨酸蛋白酶抑制剂sunitinib能降低兔角膜碱烧伤后角膜VEGF的表达,有效抑制角膜新生血管的形成。     

纳米羟基磷灰石/聚酰胺复合材料的人工肱骨头体内成骨中BMP-2及其基因表达研究

目的：对新型纳米晶骨修复和前建复合材料（n-HA／PA66）人工肱骨头的成骨能力及将其作为人工关节替代品的可行性进行评价。方法：新西兰大白兔20只，行双侧肱骨头切除，以nHA／PA人工肱骨头进行双侧肱骨头置换术。术后1、2、3、4、6、12、24周处死周分别处死动物。对假体与受体骨界面先行大体观察，然后分别用甲基丙烯酸甲酯（PMMA）制作硬组织片，甲苯胺兰染色和Masson染色后，对n-HA／PA人工肱骨头与受体骨界面进行BMP-2免疫组织化学检测和原位杂交BMP-2基因表达检测。结果：人工肱骨头在动物体内成骨的BMP-2及其基因表达研究显示，假体植入第3周，免疫组织化学染色显示BMP-2即有弱阳性表达，至6，12周为强阳性；第24周，BMP表达阳性率及阳性程度均有所降低。此外，原位杂交观察假体植入第1、2周，成骨细胞中BMP-2 mRNA表达呈弱阳性，第3周成骨细胞中BMP-2 mRNA表达呈强阳性，而在第4周，成骨细胞中表达阳性率和阳性程度均有所下降。研究显示人工肱骨头体内成骨的BMP-2及其基因表达高峰时间较文献报道的骨折模型晚。结论：n-HA／PA66人工肱骨头具有良好的成骨能力，作为新型人工关节材料为可与受体骨发生生物键合。     

FTY720抑制小鼠植骨气囊模型中聚乙烯磨损颗粒诱导的骨溶解效应

目的：在小鼠植骨气囊动物模型中,观察外源性FTY720（Hngolimod,芬戈莫德）对骨溶解的抑制作用。方法：构建小鼠植骨气囊模型,将构建好气囊模型的小鼠分成4组：空白组（气囊内注人生理盐水、腹腔注射DMSO）,FTY720组（气囊内注入生理盐水、腹腔注射FTY720）,聚乙烯颗粒组（气囊内注入聚乙烯颗粒、腹腔注射DMSO）,聚乙烯颗粒＋FTY720组（气囊内注入聚乙烯颗粒、腹腔注射FTY720）。4周后处死小鼠后取气囊组织进行HE染色观察炎症反应和炎症细胞渗出情况,取组织匀浆行Elisa法检测气囊组织中IL-6和TNF-α浓度、取骨组织行电镜扫描观察骨片吸收情况,取组织匀浆行RT—PCR检测破骨细胞相关基因抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）mRNA表达水平。结果：①HE染色后炎症细胞渗出量,聚乙烯颗粒＋FTY720组（4892±457）与聚乙烯颗粒组（4931±572）比较无统计学差异（P〉0．05）,[TY720组（2013±375）与空白组（2151±310）比较无统计学差异（P〉0,05）;含有聚乙烯颗粒组高于无聚乙烯颗粒组（P〈0．05）。②Elisa法检测炎症因子（IL-6、TNF-α）浓度,聚乙烯颗粒＋FTY720组[（130．13±3．22）、（129．22±5．02）]与聚乙烯颗粒组[（149．22±6．09）、（140．52±2．68）]比较无统计学差异（P〉0．05）;FTY720组[（68．24±2．83）、（82．88±5．34）]与空白组[（69．51±2．31）、（74．15±4．64）]比较没有统计学差异（P〉0．05）;含有聚乙烯颗粒组高于无聚乙烯颗粒组（P〈0．05）。③扫描电镜检测骨片吸收面积与视野面积百分比,聚乙烯颗粒＋FTY720组[（10．21±1．78）％]低于聚乙烯颗粒组[（17．79±2．56）％],FRY720组[（1．82±1．37）％]低于空白组[（6．27±2．11）％];并且含有聚乙烯颗粒组高于无聚乙烯颗粒组（P〈0．05）。④破骨细胞相关基因TRAPmRNA表达量,聚乙烯颗粒＋FTY720组（0．53±0．04）低于聚乙烯颗粒组（0．74±0．05）,FTY720组（．22±0．03）低于空白组（0．38±0．04）;而含有聚乙烯颗粒组高于无聚乙烯颗粒组（P〈0．05）。结论：在小鼠植骨气囊动物模型中,FTY720能有效抑制聚乙烯颗粒诱导的局部骨溶解作用。     

Enhanced Physiochemical and Mechanical Performance of Chitosan‐Grafted Graphene Oxide for Superior Osteoinductivity

The regeneration of artificial bone substitutes is a potential strategy for repairing bone defects. However, the development of substitutes with appropriate osteoinductivity and physiochemical properties, such as water uptake and retention, mechanical properties, and biodegradation, remains challenging. Therefore, there is a motivation to develop new synthetic grafts that possess good biocompatibility, physiochemical properties, and osteoinductivity. Here, we fabricate a biocompatible scaffold through the covalent crosslinking of graphene oxide (GO) and carboxymethyl chitosan (CMC). The resulting GO‐CMC scaffold shows significant high water retention (44% water loss) compared with unmodified CMC scaffolds (120% water loss) due to a steric hindrance effect. The modulus and hardness of the GO‐CMC scaffold are 2.75‐ and 3.51‐fold higher, respectively, than those of the CMC scaffold. Furthermore, the osteoinductivity of the GO‐CMC scaffold is enhanced due to the π–π stacking interactions of the GO sheets, which result in striking upregulation of osteogenesis‐related genes, including osteopontin, bone sialoprotein, osterix, osteocalcin, and alkaline phosphatase. Finally, the GO‐CMC scaffold exhibits excellent reparative effects in repairing rat calvarial defects via the synergistic effects of GO and bone morphogenetic protein‐2. This study provides new insights for developing bone substitutes for tissue engineering and regenerative medicine.     

羊同种庆大霉素抗菌骨的制备及抗感染和成骨效果的扫描电镜观察

目的：研制一种既有抗感染能力，又有成骨作用，且免疫原性低的新型植骨材料。方法：采用超声和负压双重复合法制备复合庆大霉素羊同种抗菌骨，辐照灭菌后，植入羊股（肱）骨骨缺损合并感染模型，通过扫描电镜观察其抗感染效果及成骨能力。结果：抗菌骨组在体内抗感染和成骨效果明显优于对照组。结论：庆大霉素羊同种抗菌骨具有较好的局部抗感染效果及成骨能力。     

神经源性休克死亡家兔心肌组织差异蛋白分析

目的:采用比较蛋白质组学方法分析正常与神经源性休克死亡蛋白表达差异.方法:外力打击兔颈动脉窦建立神经源性休克死亡模型.提取死亡组与对照组在心室肌蛋白进行二维电泳和凝胶图像分析,对差异蛋白质用HPLC-Chip/Ms纳流液质联用技术进行序列分析,经spectrum Mill搜索UniProtKB/SWISS-PORT后签...     

鼻内镜下Nd：YAG激光在预防鼻息肉术后复发中的应用

目的：探讨鼻内镜下Nd：YAG激光在复发性多发性鼻息肉术后处理及防止息肉复发的优越性,方法：168例鼻息肉术后患者被随机分成两组,分别经鼻内镜下Nd：YAG激光和传统方法处理术腔。结果：随访1年至3年,对首发的鼻息肉经激光治疗的无息肉复发,对于复发性多发性鼻息肉患者术后半年内仅有9％的复发率,传统的术后处理方法治疗术后半年仍有30％的复发率。结论：鼻内镜下Nd：YAG激光可有效的预防鼻息肉术后复发,尤其对于复发性多发性鼻息肉更有其独特的优点。     

中医气虚血虚模型与造血干／祖细胞衰老

目的：构建中医“气虚血虚”模型,探讨造血干／祖细胞（HSC／HPC）衰老及检测相关生物学指标,为阐释中医“气虚血虚”的现代生物学机理和探讨“补气生血”药物的作用提供理论与实验依据。方法：6．5Gy的X射线一次性全身辐射C57小鼠,辐射6h内腹腔注射盐酸苯肼40mg/kg,建立“气虚血虚”模型（即骨髓抑制与贫血模型）,分别在第3、7、14、28d观察小鼠的行为学变化、外周血象、骨髓单个核细胞总数、免疫磁性分选法分离鉴定小鼠Sca-1＋HSC／HPC、检测骨髓单个核细胞数（MNCs）与造血干／祖细胞（Sca-1^＋HSC／HPC）数量、衰老SA-β-半乳糖苷酶染色检测Sca-1^＋HSC／HPC阳性率、Sca-1^＋HSC／HPC细胞周期分布、脾指数与脾脏病理变化。结果：与对照组相比,在各时间段上模型组小鼠均表现出精神萎靡,行为迟缓,进食量下降等中医“气虚血虚”症候、外周血象各项指标降低,MNCs数下降,Sca-1^＋HSC／HPC数下降、SA—β-半乳糖苷酶染色阳性百分率（11．82±3．24）％,高于对照组[（2．07±2．21）％,P〈0．05]、细胞周期G1期阻滞,G0／G1期比例为（86．70±3．79）％,高于对照组[（69．31±3．07）％,P〈0．05],S期比例减少、脾指数降低和脾脏退行性变化显著。结论：辐射和盐酸苯肼并用法可成功的建立中医“气虚血虚”动物模型,并导致造血干／祖细胞衰老。     

奥拉西坦治疗OSAHS大鼠认知障碍的研究

目的：研究奥拉西坦对阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）大鼠认知障碍的影响。方法：成年雄性SD大鼠24只,建立慢性间歇性缺氧模型,随机分为空白对照组、慢性间歇性缺氧组、药物组,并用Morris水迷宫实验,评价三组大鼠的空间学习记忆功能。结果：Morris水迷宫学习成绩（定位航行实验）：从第一天开始,慢性间歇性缺氧组的逃避潜伏期明显长于空白对照组,（P〈0.05）,药物组的逃避潜伏期接近空白对照组,无显著差异（P〉0.05）。Morris水迷宫记忆成绩：慢性间歇性缺氧组的穿越平台次数较空白对照组显著减少（P〈0.05）,药物组的穿越平台次数接近空白对照组,两者无显著差异（P〉0.05）。各组在跨越目标象限时间占整个游泳的时间百分率的比较：慢性间歇性缺氧组较空白对照组显著减少（P〈0.05）,药物组接近空白对照组,两者无显著差异（P〉0.05）。结论：慢性间歇性缺氧对大鼠的学习能力有一定的损伤;经奥拉西坦治疗后的大鼠学习能力有了提高。