汉防己甲素对兔眼角膜基质细胞增殖和凋亡作用的比较研究

目的：探讨汉防己甲素（Tet）对离体兔眼角膜基质细胞抑制增殖作用,及其对增殖率和凋亡率的作用程度比较。方法：选用原代及传代兔角膜基质细胞,实验组加入含不同浓度Tet的培养液,对照组加入含等量PBS的培养液。通过免疫细胞化学技术了解细胞的PCNA表达来枪测细胞增殖情况,计算增殖率并测定变化;流式细胞仪（FCM）测定细胞周期和凋亡率的变化。结果：Tet质量浓度为2μg／ml,3μg/ml,4μg／ml时,作用48h,随着Tet浓度的增大,PCNA阳性细胞数明显减少,角膜基质细胞的增殖率呈递减趋势,存在剂量一效应关系（P〈0．05）;FCM结果显示,随着Tet的浓度增大,实验组G0／G1期细胞增加,细胞删期阻滞在G1期,见细胞凋亡峰,凋亡率也随浓度增大而升高（P〈0．05）;Tet对增殖率影响的曲线斜率绝对值明显大于对调亡率作用的斜率绝对值,结论：Tet对角膜基质细胞的PCNA的表达具有明显抑制作用,随Tet浓度增大,角膜基质细胞的增殖率下降,Tet通过将细胞阻滞在G1期而发挥其抗增殖作用,且存在剂量效应关系;Tet诱导细胞凋亡,且也存在剂量效应关系,随浓度增大,凋亡率增加;在2μg/ml．3μm/ml,4μg／ml的浓度内,Tet对角膜基质细胞同时具有抑制增殖和诱导凋亡作用,但以抑制增殖作用为主.     

5-ALA介导的光动力治疗在耐药白血病中的作用机制研究

目的: 本研究观察了5-氨基乙酰丙酸介导的光动力治疗(ALA-PDT)对耐药白血病细胞株HL-60/ADR的杀伤作用及对耐药白血病原代细胞存活率的影响。方法: 以耐药白血病细胞株HL-60/ADR为实验模型, 同时在11例白血病患者原代细胞中进行检测。实验分为4组, 对照组、单纯ALA组、单纯光照组及ALA＋PDT组。用MTT法测定细胞的存活率, 采用阳离子脂质荧光探针JC-1检测线粒体跨膜电位, 用Real-time PCR检测PDT前后HL-60/ADR细胞株中bcl-2基因及多药耐药基因MRP的表达变化。结果: ALA-PDT后HL-60/ADR细胞株线粒体跨膜电位出现快速下降, 0, 2, 4 h时线粒体跨膜电位崩塌的细胞比例分别升高至55.91%±2.60%、64.27%±1.08%、82.17%±0.43%, 与对照组相比皆有显著差异(P＜0.05), 呈时间依赖性。而单纯ALA组和单纯光照组则无明显变化。HL-60/ADR细胞株在ALA-PDT后Bcl-2和MRP基因均呈明显下降趋势。在初发和复发难治急性白血病原代细胞中ALA＋PDT组均显示较强的光动力效应。结论: ALA-PDT诱导的HL-60/ADR细胞的杀伤可能与其影响线粒体跨膜电位有关, 即通过影响线粒体功能促进细胞凋亡。同时表明ALA介导的光动力作用部分是通过在基因转录水平下调抗凋亡基因Bcl-2而促进凋亡的发生, 另一方面通过下调耐药基因MRP的表达而部分逆转耐药。同时ALA-PDT对原代白血病细胞同样有较大的抑制作用。     

优化ALA-PDT对正常人角质形成细胞凋亡的影响

目的:本文通过不同浓度的ALA与不同用药时间对体外培养的人角质形成细胞(KC)PDT的生物效应研究,观察PpⅨ荧光强度及KC凋亡和生长周期的影响,优化ALA最佳药物浓度和用药时间,探讨ALA-PDT抑制银屑病KC异常增生的可行性和最佳效果.方法:将新鲜包皮组织经两次酶消化法进行KC分离与培养,分设KC对照组、单纯ALA组、单纯照光组及0.1、0.6、1.2、1.8、3.6mmol/L ALA五个浓度组,经0.5、1、3、5h四个避光孵育时间后PDT.FCM、酶标仪、荧光显微镜检测KC中PpⅨ荧光强度,确定ALA最佳药物浓度和最佳用药时间;Hoechst33342 / PI双染法和Annexin V / PI双染法检测KC凋亡率和对生长周期的影响.结果: 0.6mmol/L ALA(用药1h)-PDT组为最佳药物浓度和最佳用药时间, 显示PpⅨ荧光强度表达与KC凋亡率最高,能明显抑制S期与G2期的细胞增值,使细胞增殖指数降为最低,与其他各组相比差异显著(P<0.05).结论: 0.6mmol/L ALA(用药1h)-PDT能明显抑制KC增殖,优化后的ALA-PDT更迅速有效地促进人KC凋亡.     

双氢青蒿素对骨肉瘤细胞143B影响的研究

目的：研究双氢青蒿素（Dihydroatemisinine,DHA）对人骨肉瘤细胞143B的影响及所导致的形态学变化。方法：采用人骨肉瘤143B细胞株,通过设置对照组和低浓度、中浓度、高浓度的DHA组,H．E染色观察Trandwell小室穿梭能力;划痕愈合实验观察迁移能力;Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡;MTT法检测细胞增殖抑制能力。结果：DHA表现出明显地抑制人骨肉瘤143B细胞的迁移、增殖以及促进凋亡（P〈0．05）,且伴随浓度的递增和时间的延长,抑制作用更明显。结论：DHA具有较强的抗入骨肉瘤作用,其机制可能与DHA诱导骨肉瘤细胞凋亡,并抑制其增殖有关。     

基于动态光镊技术的卵巢癌SKOV3细胞凋亡检测

化学疗法治疗癌症的主要机制是通过药物调控使无限增殖的癌细胞恢复到正常凋亡,因而实时检测用药过程中癌细胞的凋亡情况对于临床治疗具有重要意义。以卵巢癌SKOV3细胞作为研究对象,针对治疗药物(顺铂)不同浓度培养液的条件下,利用搭建的动态光镊系统在微流控芯片上通过测量捕获效率参数对四组细胞的凋亡情况分别进行检测。实验结果表明,该系统对不同药物浓度培养下SKOV3细胞凋亡情况的检测具有良好效果。与传统的检测手段相比,该系统细胞用量小、耗时短、无需标记、并可实现活体细胞检测,因此为细胞凋亡的临床检测提供了重要指导意义。     

ALA-PDT在耐药白血病细胞株HL-60/ADR中的实验研究

目的:本研究观察5-氨基乙酰丙酸介导的光动力疗法(ALA-PDT)对耐药白血病细胞株HL-60/ADR的诱导凋亡作用.方法:以耐药白血病细胞株HL-60/ADR为实验模型.实验分为4组,对照组、单纯ALA组、单纯光照组及ALA PDT组.用MTT法检测细胞的存活率,瑞特染色观察细胞形态学改变,用双染法检测细胞凋亡率,并用共聚焦激光显微镜观察凋亡细胞的特征.结果:ALA PDT组光照后瑞特染色可见凋亡改变;MTT法显示细胞存活率明显下降,24h为(48.67±8.14)%,48h进一步降低至(22.23±6.07)%,两者比较差异有统计学意义;流式细胞仪检测显示细胞凋亡率3h、4h和24h分别为(6.35±1.40)%、(8.07±1.87)%和(57.66±7.55)%,与对照组相比差异有统计学意义;LSCM观察AnnexinV-FITC单阳性及AnnexinV-FITC/PI双阳性细胞均具有典型的凋亡特征,而单纯ALA组、单纯光照组及对照组则无上述改变.结论:ALA-PDT能灭活耐药白血病细胞株HL-60/ADR,主要通过诱导凋亡的方式实现的,并呈一定的时间依赖性.     

新抗癌药物维甲类衍生物-R-81001对白血病细胞作用的电镜组化研究

R-81001是医科院药物所新合成的维甲类衍生物,分子量为454.63。经实验证明它对亚硝胺诱发的小鼠前胃上皮增生癌变有明显的抑制作用,而且它的毒性较同类其他衍生物均低。为探讨其作用原理以及对临床应用可能有指导意义的用药方式,我们用电镜组化方法,从超微结构水平结合细胞生长曲线,研究了R-81001对人早幼粒白血病细胞株(HL-60)的作用,同时进行了联合用药的研究。HL-60细胞培养在RPMI—1640培养液中,加10％小牛血清及适量抗菌素。收集对数生长期的细胞,以2×10~5ml的细胞悬液每瓶5mcl分装在培养瓶内。按种细胞的同时给药。实验分1％DMSO组,1×10~(-6)M-R-81001组,1％OMSO加1×10~(-6)MR-81001联合给药组以及不加上述任何药物的对照组。     

竹红菌素修饰纳米脂质微泡联合LED光源照射对人舌癌细胞Tca8113的作用的实验研究

目的:本实验自制竹红菌素修饰的脂质微泡,联合LED光源对人舌癌细胞Tca8113进行光动力处理后观察细胞.方法:常规培养,取对数生长期的舌癌细胞Tca8113,机械振荡法制备竹红菌素修饰的脂质微泡,联合LED光源对细胞进行光动力治疗,MTT法检测细胞存活率,并用流式分析仪分析其促凋亡作用.结果:MTT法和流式细胞仪显示竹红菌素修饰的脂质微泡联合LED光源照射对Tca8113人舌癌细胞有明显凋亡现象,且在一定浓度范围和光照能量密度范围内,其凋亡作用与HB微泡浓度和能量密度呈正相关.结论:竹红菌素修饰的纳米脂质微泡联合LED光源光动力疗法对人舌癌细胞Tca8113有促凋亡抑制作用.     

反义核酸药物癌泰得对乳腺癌细胞株的体外杀伤作用

目的探讨反义核酸药物癌泰得对乳腺癌细胞株的体外杀伤作用。方法1)MTT法测定不同浓度癌泰得对乳腺癌细胞株BT474的抑制率。2)Annexin/PI双染法,流式细胞仪检测细胞凋亡比率。结果MTT法观察到癌泰得对BT474细胞的杀伤作用,流式细胞仪检测到BT474细胞凋亡率达16.82%,以晚期凋亡为主。结论癌泰得对BT474细胞有抑制作用,抑制率与浓度呈线性相关。     

紫杉醇抑制原代培养人视网膜色素上皮细胞增殖的实验研究

目的研究紫杉醇(Taxol)对体外原代培养人视网膜色素上皮(human Retinal Pigment Epithelium,hRPE)细胞增殖的抑制作用及机制。方法体外分离、原代培养hRPE细胞,采用免疫细胞化学方法对其进行鉴定。不同浓度紫杉醇(0、0.005、0.05、0.5、5mg/L)处理hRPE细胞一定时间,采用形态学观察、细胞生长曲线及MTT法检测药物对hRPE细胞的生长抑制效应,流式细胞术检测药物对hRPE细胞的细胞周期阻滞作用及凋亡诱导作用。结果原代培养的hRPE细胞胞浆富含色素,随传代次数增加,黑色素颗粒逐渐减少直至消失。用抗人细胞角蛋白抗体进行免疫细胞化学鉴定hRPE细胞呈特异的阳性反应。细胞生长曲线及MTT法显示:紫杉醇作用于hRPE细胞24h和72h,其抑制细胞生长增殖的IC50值分别为5.24和3.24mg/L。流式细胞分析术检测结果显示:0.5mg/L紫衫醇作用细胞48h即可显著延迟hRPE细胞G2/M期进展并诱导凋亡(P<0.05)。透射电镜观察显示:0.5mg/L紫杉醇作用后细胞表面微绒毛减少,电子密度增加,细胞器减少,异染色质聚集成团、边聚等。结论紫杉醇通过阻滞G2/M期进展...     

细胞可溶性蛋白准弹性激光散射分析与SDS-PAGE法比较研究

分别采用SDS-PAGE和准弹性激光散射检测柠檬醛作用白血病K562前后细胞可溶性蛋白变化情况。实验结果表明：SDS-PAGE与准弹性激光散射均能检测出可溶性蛋白种类、大小、含量及其变化：但准弹性激光散射法所获取的参数信息反映了可溶性蛋白天然构象下的真实状态及其动态变化,与传统的SDS-PAGE方法相比较,它是研究外界因素（包括药物）对细胞可溶性蛋白尤其是对蛋白聚合体影响的更好表征方法。     

Charge spreading and its effect on AC plasma panel operating margins

Like normal wall charges in an ac plasma panel, the spread charges from neighbor "on" cells to an "off" cell site can cause an increase or decrease in the required write voltage depending on the relative location of the write pulse with respect to sustain pulses. The net changes in write voltage can be accurately measured. The results obtained show that spread charges increase sharply with panel resolution and have a dominant influence over other priming effects on operating margin, e.g., to compensate for the wall voltage due to spread charges, an additional 15.5 V, or 10 percent of the voltage used to write an isolated cell, is required to write a cell which is located in the middle of a cluster of"on" cells on a high resolution 512-60 panel.     

LTE-A系统时域小区间干扰协诟技术标准化研究

异构网络被LTE-A系统视为一种提升单位区域频谱效率的关键技术而得到广泛关注。然而,异构网络会带来严重的小区间干扰,小区间干扰协调因此成为3GPP标准化进程研究的重点。首先总结了异构网络及小区间干扰协调技术,然后介绍了目前3GPP中讨论的小区覆盖扩展（CRE：CellRange Extension）和基于几乎空白子帧（ABS：Almost Blank Subframe）的时域小区间干扰协调技术。最后,基于动态系统级仿真平台,评估了CRE和ABS技术方案系统性能。     

NKG2D配体在视网膜母细胞瘤RB细胞的表达及意义

目的：探讨视网膜母细胞瘤RB细胞株上NKG2D配体的表达情况及其对同种异体NK细胞杀伤活性的影响。方法：采用半定量RT-PCR法检测RB细胞及人红白血病细胞K562细胞上NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3的mRNA表达情况。应用MTT法检测人NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。结果：K562细胞表面表达MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3,RB细胞表面表达MICA、MICB、ULBP2、ULBP3不表达ULBP1。K562细胞表面NKG2D的配体mRNA表达强度明显强于RB细胞（P〈0．05）。当效靶比分别为5：1、10：1、20：1、40：1时NK细胞对K562、RB细胞的杀伤活性分别为28．32％±2．06％、9．11％±0．89％;45．62％±1．17％、22．87％±1．38％;60．79％±1．78％、32．69％±0．37％;73．83％±3．05％、50．29％±2．49％,在各效靶比时NK细胞对K562细胞的杀伤活性较RB细胞明显增强（P〈0．05）。结论：NKG2D配体影响NK细胞对靶细胞的杀伤活性,NKG2D配体表达水平可能决定着NK细胞抗肿瘤免疫应答的强弱,提高NKG2D配体的表达有可能提高NK细胞的抗肿瘤作用。     

双氢青蒿素诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的形态学研究

目的：研究双氢青蒿素（DHA）诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡作用,并观察其形态学变化。方法：以前列腺癌PC-3细胞为研究对象,在体外经不同浓度的DHA处理48小时后,扫描电镜（SEM）观察细胞凋亡;并建立PC-3细胞裸鼠种植瘤模型,20只模型鼠随机分为对照组、溶剂组、DHA大剂量组及DHA小剂量组,经13天干预后,透射电镜（TEM）观察肿瘤组织形态学变化,体视学分析肿瘤微血管密度（MVD）。结果：PC-3细胞经DHA处理后,SEM观察到典型的凋亡细胞;裸鼠种植瘤经治疗后,TEM观察肿瘤组织中散在凋亡细胞及凋亡小体,且DHA大小剂量组MVD均低于对照组（P〈0．05）。结论：DHA具有较强的抗肿瘤作用,其作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

Monoclonal antibodies IGR to nuclear antigens of neutrophilic granulocytes of human blood]

Four monoclonal antibodies (Mabs) of series IGR-1 and IGR-2 to nuclear antigens of neutrophilic granulocytes of human peripheral blood were obtained. Mabs IGR-1 2B8 and IGR-1 6B5 are bound to their specific antigens in the nuclei of all the investigated human cell lines. These Mabs were also specific for metaphase chromosomes of cell lines HL-60 and U-937. Investigations on the ultrastructural level showed that Mabs IGR-1 6B5 reacted with the HL-60 nuclear heterochromatin region. Mabs IGR-1 3D3 and IGR-2 2F1 manifested high specificity only for the nuclei of mature neutrophils and of plasma cells.     

裸鼠人体粒细胞白血病异种移植模型的红外光谱研究

应用傅里叶变换红外光谱法对人体粒细胞白血病（HL-60）裸鼠异种移植模型癌变及癌旁正常组织粉末样品进行了分析研究。结果表明癌变与癌旁正常组织的红外光谱有明显的区别，这反映了组织中蛋白质，核酸和脂类等生物分子在裸鼠癌变和正常组织中的构型与构像以及相对含量上的差别。傅里叶变换红外光谱法可以用于对HL-60细胞进行鉴别诊断，可成为肿瘤红外光谱研究的一种新方法。     

As2O3联合H22源exosome的抗肿瘤作用研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）联合小鼠肝癌（H22）源exosome对小鼠皮下种植性肝癌（H22）模型的抗瘤作用。方法：超速离心及密度梯度离心法提取exosome,Bradford法蛋白定量;建立BALB／c小鼠皮下荷瘤模型．实验分4组：空白成瘤对照组、As2O3组、As2O3联合exoeome组和exosome组。观察As2O3、exosome、及其联合应用的体内抗瘤效应;监测在体肿瘤的生长情况;计算抑瘤率、生存率：免疫组织化学法检测肿瘤组织中浸润的CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞。结果：与空白成瘤对照组比较,As2O3组、及其与exosome联合组的肿瘤生长明显放缓（P〈0．05）。其抑瘤率分别为44．58％、66．27％。As2O3组及As2O3联合exosome组肿瘤组织中浸润的CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞明显增加（P〈0．05）。结论：As2O3与exosome联合应用对小鼠皮下种植性实体性肝癌（H22）有协同治疗效应。     

趋化因子配体18与鼻咽癌相关性研究及意义

目的：探讨趋化因子配体18（CCL18）在鼻咽癌患者血浆中的表达水平及检测在体外对人鼻咽癌细胞株增殖和迁移能力的影响。方法：收集到重庆医科大学附属第二医院就诊并病理诊断为鼻咽癌患者37例,在未接受任何治疗前留取血液标本,另取20例健康体检者外周血液标本作为正常人群对照。以酶联免疫吸附测定（ELIAS）方法检测血浆中CCL18的表达水平。体外实验以人鼻咽癌细胞株HNE-1为研究对象,用噻唑蓝（MTT）比色法检测重组CCL18对细胞增殖能力的影响,用Transwe11体外迁移系统检测CCL18对鼻咽癌细胞的趋化作用。结果：鼻咽癌患者血浆中CCL18的表达水平明显高于健康体检者（P〈0．0001）,伴有颈部淋巴结转移的鼻咽癌患者较未发生颈部淋巴结转移者血浆中CCL18的表达水平显著升高（P〈0．05）。CCL18因子在体外对鼻咽癌细胞无明显促进增殖作用（P〉0．05）。CCL18对鼻咽癌细胞具有明显促进迁移趋化作用,并呈现浓度依赖性。结论：CCL18是鼻咽癌的生物学标志物,其表达与鼻咽癌的侵袭转移相关,对鼻咽癌的诊断和预后判断有一定临床意义。