双氢青蒿素体外诱导人乳腺癌细胞凋亡的电镜研究

目的:研究双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)在体外对人乳腺癌细胞的抗癌作用。方法:体外培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,经不同浓度DHA处理后,应用透射电镜观察癌细胞的超微形态学变化。结果:不同浓度DHA处理后的癌细胞,随浓度的增加,呈现典型的细胞凋亡超微结构改变。结论:DHA能诱导乳腺癌MDAMB-231细胞的凋亡,有望成为抗乳腺癌的辅助化疗药物。     

槲皮素对BGC823胃癌细胞p53、Bcl-2/Bax、PCNA表达影响与抑癌作用研究

目的：观察槲皮素对胃癌细胞BGC823生长及p53、Bcl-2／Bax、PCNA的影响。方法：以台盼蓝拒染法计数胃癌细胞的生长抑制率，透射电镜从形态变化上了解凋亡的发生，流式细胞术检测细胞周期变化，免疫细胞化学检测p53、Bcl-2／Bax、PCNA蛋白的表达。结果：台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制BGC823细胞增殖的作用明显，且呈浓度和时间依赖性，槲皮素处理48h后的Ic50为28．12μm。形态学检测显示出细胞凋亡的特征变化，流式细胞仪检测表明经10—20μm／L的槲皮素处理，BGC823细胞周期阻滞于S期，药物浓度呈正相关。细胞呈现核固缩、染色质边集、凋亡小体形成等典型凋亡表现。经槲皮素处理后BGC823细胞株bax蛋白表达明显增加，bcl-2、PCNA、p53蛋白表达降低。结论：槲皮素能抑制胃癌细胞的生长，呈时间剂量依赖性，能诱导BGC823发生凋亡，使细胞周期阻滞于S期，抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调p53、PCNA的表达，降低bcl-2／Bax比值有关。     

反义核酸药物癌泰得对乳腺癌细胞株的体外杀伤作用

目的探讨反义核酸药物癌泰得对乳腺癌细胞株的体外杀伤作用。方法1)MTT法测定不同浓度癌泰得对乳腺癌细胞株BT474的抑制率。2)Annexin/PI双染法,流式细胞仪检测细胞凋亡比率。结果MTT法观察到癌泰得对BT474细胞的杀伤作用,流式细胞仪检测到BT474细胞凋亡率达16.82%,以晚期凋亡为主。结论癌泰得对BT474细胞有抑制作用,抑制率与浓度呈线性相关。     

组蛋白乙酰化/去乙酰化在冬凌草甲素诱导Molt-4细胞凋亡中的作用

目的:探讨组蛋白乙酰化/去乙酰化在冬凌草甲素(oridonin,Ori)诱导Molt-4细胞凋亡中的作用.方法不同浓度Ori(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L)作用于Molt-4细胞,MTT法检测细胞增殖;瑞氏染色光镜下观察细胞形态学变化;Western blot检测Caspase-3、组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylase inhibitor,HDAC1)及组蛋白H3乙酰化水平.结果:Ori抑制Molt-4细胞增殖,诱导细胞凋亡,呈时间-剂量依赖性;光镜下Molt-4细胞染色质固缩,凋亡小体出现.Ori活化Caspase-3,下调HDAC1表达,使组蛋白H3乙酰化水平上调.结论:Orr可能通过提高组蛋白H3乙酰化水平,抑制HDAC1活性诱导Molt-4细胞凋亡.     

柠檬醛对阿糖胞苷抗白血病细胞HL-60强效增敏作用研究

通过对柠檬醛与临床首选药物之一阿糖胞苷联用抗白血病细胞株HL-60的研究,探索二者联用的生物效应及其作用机制。采用MTT和DAPI核染色等方法观察柠檬醛同阿糖胞苷的不等浓度组合HL-60的增殖抑制和诱导凋亡作用,相分析电泳激光散射技术检测联用对细胞表面电荷的影响。柠檬醛显示一定的抑制HL-60增殖,促进其凋亡的效应,并与阿糖胞苷有较显著的协同性,增加柠檬醛浓度与药物阿糖胞苷联合作用可使膜表面电位下降的幅度增大。柠檬醛有联合阿糖胞苷临床治疗潜力。     

基于超短脉冲激光光谱技术诊断癌症的研究

目的:研究用于癌症诊断与治疗的光敏剂血卟啉(HPD)的超快光动力学过程;方法:采用超短脉冲激光光谱技术和皮秒时间相关单光子计数系统,测量经血卟啉培养的活体癌细胞与正常细胞的荧光光谱、荧光寿命特性及荧光峰值强度随时间变化曲线,并测量单一细胞内部不同位置的荧光寿命特性;结果:癌细胞样品在645nm处具有特有的光谱谱峰;癌细胞样品荧光寿命的快成分约150ps慢成分约1200ps,而正常细胞样品快成分约300ps慢成分约2500ps;癌细胞样品的荧光峰值强度经12小时衰减约10%,而正常细胞样品衰减约55%;在细胞内部荧光寿命300ps的快成分十分显著,且中心部位血卟啉浓度最高;结论:癌细胞与正常细胞的荧光光谱、荧光寿命特性及荧光峰值强度随时间变化曲线相差十分明显,反映了癌细胞与正常细胞对血卟啉亲和性有显著的差异;测量结果确认了荧光光谱技术诊断与治疗癌症的可行性,并对发展超短脉冲激光光谱技术早期诊断与治疗癌症具有重要的指导意义和临床应用价值。     

XIAP表达水平对5-Fu诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的研究XIAP mRNA及蛋白表达水平对不同剂量5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-Fu）诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的影响。方法脂质体介导含XIAP基因全长的质粒pef-XIAP转染人肝癌细胞HepG2,采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）及western blotting检测XIAP基因和蛋白表达水平。通过不同剂量5-Fu诱导细胞凋亡,使用CCK-8试剂通过比色法分析检测5-Fu对转染pef-XIAP的HepG2细胞生长活性的抑制作用。结果各组HepG2细胞在不同剂量的5-Fu诱导下发生凋亡、与普通HepG2细胞组比较．转染XIAP基因的HepG2细胞组的凋亡率显著降低。结论XIAP基因在人肝癌细胞HepG2中的高表达可以明显降低化疗药物5-Fu诱导的细胞凋亡,其可能在肝癌化疗耐药中起一定作用。     

姜黄素诱导肺癌A549细胞凋亡

目的：研究姜黄素对A549细胞凋亡的诱导作用,并探讨其可能的分子机制。方法：姜黄素处理A549细胞后,MTT法于不同时间点检测A549细胞的增殖情况;姜黄素处理A549细胞48h后,流式细胞术（Flow CytoMetry,FCM）检测A549细胞的凋亡率;30μmol／L姜黄素处理A549细胞24h、48h、72h后,RT—PCR、Western—Blot检测A549细胞中P53、Bcl2、Bax和cagpase-3基因的表达水平。结果：姜黄素对肺癌A549细胞增殖的抑制作用具有显著的浓度-时间依赖关系,30μmol／L姜黄素可诱导A549细胞凋亡。30μmoL／L姜黄素作用A549细胞24h即可引起A549细胞中P53、Bax和Caspase-3表达水平的上调,48h后可引起Bcl2表达水平的下调,诱导A549细胞凋亡。结论：30μmol／L姜黄素可诱导A549细胞凋亡,其机制可能与促进P53、Bax和Caspase-3基因的表达,抑制Bcl2基因的表达有关。     

竹红菌素修饰纳米脂质微泡联合LED光源照射对人舌癌细胞Tca8113的作用的实验研究

目的:本实验自制竹红菌素修饰的脂质微泡,联合LED光源对人舌癌细胞Tca8113进行光动力处理后观察细胞.方法:常规培养,取对数生长期的舌癌细胞Tca8113,机械振荡法制备竹红菌素修饰的脂质微泡,联合LED光源对细胞进行光动力治疗,MTT法检测细胞存活率,并用流式分析仪分析其促凋亡作用.结果:MTT法和流式细胞仪显示竹红菌素修饰的脂质微泡联合LED光源照射对Tca8113人舌癌细胞有明显凋亡现象,且在一定浓度范围和光照能量密度范围内,其凋亡作用与HB微泡浓度和能量密度呈正相关.结论:竹红菌素修饰的纳米脂质微泡联合LED光源光动力疗法对人舌癌细胞Tca8113有促凋亡抑制作用.     

Salubrinal保护心肌细胞内质网应激凋亡的实验研究

目的探讨Salubrinal对衣霉素诱导的乳鼠原代心肌细胞凋亡的保护作用及机制。方法采用消化贴壁法获得乳鼠原代心肌细胞,分别给与不同浓度的Salubrinal(10μmol、20μmol、40μmol)预处理,30min后加入TM(5μg/ml),继续培养24h后通过流式细胞和TUNEL检测方法对乳鼠心肌细胞凋亡进行检测;Western印迹法检测凋亡过程中Caspase-12蛋白酶的表达变化。结果经Salubrinal预处理的细胞同单独使用衣霉素相比,细胞凋亡率和细胞凋亡指数均显著下降;Caspase-12表达明显减少。结论Salubrinal对衣霉素诱导的乳鼠原代心肌细胞凋亡具有保护作用,其机制可能是通过抑制内质网应激凋亡通路。     

汉防己甲素对兔眼角膜基质细胞增殖和凋亡作用的比较研究

目的：探讨汉防己甲素（Tet）对离体兔眼角膜基质细胞抑制增殖作用,及其对增殖率和凋亡率的作用程度比较。方法：选用原代及传代兔角膜基质细胞,实验组加入含不同浓度Tet的培养液,对照组加入含等量PBS的培养液。通过免疫细胞化学技术了解细胞的PCNA表达来枪测细胞增殖情况,计算增殖率并测定变化;流式细胞仪（FCM）测定细胞周期和凋亡率的变化。结果：Tet质量浓度为2μg／ml,3μg/ml,4μg／ml时,作用48h,随着Tet浓度的增大,PCNA阳性细胞数明显减少,角膜基质细胞的增殖率呈递减趋势,存在剂量一效应关系（P〈0．05）;FCM结果显示,随着Tet的浓度增大,实验组G0／G1期细胞增加,细胞删期阻滞在G1期,见细胞凋亡峰,凋亡率也随浓度增大而升高（P〈0．05）;Tet对增殖率影响的曲线斜率绝对值明显大于对调亡率作用的斜率绝对值,结论：Tet对角膜基质细胞的PCNA的表达具有明显抑制作用,随Tet浓度增大,角膜基质细胞的增殖率下降,Tet通过将细胞阻滞在G1期而发挥其抗增殖作用,且存在剂量效应关系;Tet诱导细胞凋亡,且也存在剂量效应关系,随浓度增大,凋亡率增加;在2μg/ml．3μm/ml,4μg／ml的浓度内,Tet对角膜基质细胞同时具有抑制增殖和诱导凋亡作用,但以抑制增殖作用为主.     

优化ALA-PDT对正常人角质形成细胞凋亡的影响

目的:本文通过不同浓度的ALA与不同用药时间对体外培养的人角质形成细胞(KC)PDT的生物效应研究,观察PpⅨ荧光强度及KC凋亡和生长周期的影响,优化ALA最佳药物浓度和用药时间,探讨ALA-PDT抑制银屑病KC异常增生的可行性和最佳效果.方法:将新鲜包皮组织经两次酶消化法进行KC分离与培养,分设KC对照组、单纯ALA组、单纯照光组及0.1、0.6、1.2、1.8、3.6mmol/L ALA五个浓度组,经0.5、1、3、5h四个避光孵育时间后PDT.FCM、酶标仪、荧光显微镜检测KC中PpⅨ荧光强度,确定ALA最佳药物浓度和最佳用药时间;Hoechst33342 / PI双染法和Annexin V / PI双染法检测KC凋亡率和对生长周期的影响.结果: 0.6mmol/L ALA(用药1h)-PDT组为最佳药物浓度和最佳用药时间, 显示PpⅨ荧光强度表达与KC凋亡率最高,能明显抑制S期与G2期的细胞增值,使细胞增殖指数降为最低,与其他各组相比差异显著(P<0.05).结论: 0.6mmol/L ALA(用药1h)-PDT能明显抑制KC增殖,优化后的ALA-PDT更迅速有效地促进人KC凋亡.     

癌细胞的激光荧光光谱特性研究

研究用于癌症诊断与治疗的光敏剂血卟啉(hematoporphyrin derivative,HPD)对人体癌细胞与正常细胞的亲和性,采用超短脉冲激光光谱技术和皮秒时间相关单光子计数系统,测量经血卟啉培养的活体癌细胞与正常细胞的荧光光谱,观测到癌细胞样品在645nm处具有特有的光谱谱峰;测量不同浓度血卟啉荧光光谱,观测到随着血卟啉浓度的逐渐增大,在645nm处出现的光谱峰也随之显著增强。对荧光光谱的二阶导数光谱进行分析,发现癌细胞与浓度2×10-1mg/ml血卟啉的二阶导数光谱图形状相似,说明在癌细胞内部血卟啉浓度增大了约2个数量级。测量数据表明癌细胞对血卟啉有很强的亲和性,同时还得到了亲和性的量化值。测量结果确认了荧光光谱技术诊断与治疗癌症的可行性,并对化疗注射光敏剂药液浓度的计量提供参考。     

HPD加激光对细胞周期中不同时期Hela细胞的杀伤作用的比较

血卟啉衍生物(HPD)因其独特的自发荧先和光毒作用以及能选择性地潴留于癌细胞中,而被作为光敏药物应用于癌症的临床诊断和治疗,至今已发展成肿瘤光动力学治疗这一新领域。大量临床治疗的结果表明,HPD-光动力学疗法具有定位准确、对肿瘤杀伤力强、同时对周围组织损伤小的优点。 人们已知辐射、高热和某些化疗药物等的作用皆受细胞周期的影响。Christensen等研究了体外培养的NHIK 3025细胞在细胞周期不同时期对血卟啉光敏作用的敏感性差异,发现各时期细胞对光敏作用的敏感性差异很大,王代树等也对MG3-803胃癌细胞进行了类     

半导体激光诱导细胞凋亡脱毛及除腋臭的研究

目的 :通过动物实验观察能否诱导细胞凋亡导致脱毛 ,并探索激光诱导细胞凋亡的机制。同时 ,观察和探讨在脱腋毛的同时 ,大汗腺细胞有无因激光的光热作用或诱导的细胞凋亡受到破坏 ,为治疗腋臭寻找一新的无创伤的治疗方法。方法 :分别用半导体激光以不同剂量对黑毛狗进行脱毛。分别在治疗即刻、治疗后不同时期通过电镜、流式细胞术、TdT介导的RdUTP缺口末端标记法 (Tunel法 )对比治疗效果 ,观察组织变化及其可能存在的凋亡改变 ,并初步探讨诱导细胞凋亡的机制及临床治疗意义。结果 :半导体激光照射后毛囊上皮细胞及大汗腺腺体细胞中出现凋亡细胞 ;低剂量重复治疗凋亡现象增加。结论 :激光照射后 ,毛囊上皮细胞及大汗腺细胞中有细胞凋亡现象。     

刚地弓形虫培养上清对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的作用

目的:研究刚地弓形虫RH株培养上清对体外培养的肝癌细胞HepG2增值的影响,并探讨其可能的影响机制.方法:取对数生长期的HepG2细胞,分别接种于96孔细胞培养板及50mL培养瓶中,加入200μL不同数量(3×107/mL、6×107/mL、12×107/mL)弓形虫RH株速殖子培养上清孵育24、48、36、72h后,四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测其对HepG2细胞增殖抑制作用;不同浓度弓形虫培养上清作用HepG2细胞48h后,DAPI染色,荧光显微镜观察细胞核形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度([Ca2+]i),Western-blot检测凋亡HePG2细胞内Caspase-3的表达.结果弓形虫培养上清能抑制HepG2细胞株增殖和诱导其凋亡,且呈时间剂量依赖性,各实验组与对照组比较有统计学意义(P＜0.05);HepG2细胞凋亡率和[Ca2+]i随浓度增加逐渐增加,12×107/mL时凋亡率和[Ca2+]i分别达到41.46％、128.4(荧光计数单位);Caspase-3的表达随上清浓度增加表达增强.结论:刚地弓形虫培养上清能够抑制肝癌HepG2细胞增殖,其诱导HepG2细胞凋亡可能与细胞内钙离子浓度上调和Caspase-3的表达增强相关.     

双氢青蒿素诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的形态学研究

目的：研究双氢青蒿素（DHA）诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡作用,并观察其形态学变化。方法：以前列腺癌PC-3细胞为研究对象,在体外经不同浓度的DHA处理48小时后,扫描电镜（SEM）观察细胞凋亡;并建立PC-3细胞裸鼠种植瘤模型,20只模型鼠随机分为对照组、溶剂组、DHA大剂量组及DHA小剂量组,经13天干预后,透射电镜（TEM）观察肿瘤组织形态学变化,体视学分析肿瘤微血管密度（MVD）。结果：PC-3细胞经DHA处理后,SEM观察到典型的凋亡细胞;裸鼠种植瘤经治疗后,TEM观察肿瘤组织中散在凋亡细胞及凋亡小体,且DHA大小剂量组MVD均低于对照组（P〈0．05）。结论：DHA具有较强的抗肿瘤作用,其作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

新型光敏剂BF01光动力治疗人肝癌的实验研究

探讨光敏剂BF01光动力对人肝癌细胞株bel- 7402体外杀伤效应和体内抑瘤效 应及其作用机制。CCK-8法检测同一激光强度不同给药浓度的(0、0.8、3.2 μmol·L－1)BF01光动力(激光剂量2.4 J/cm²,光照时间 :1min/well,激光波长652 nm)处 理下对bel-7402细胞的抑制率和IC50,流式 细 胞术检测bel-7402细胞死亡方式,DAPI染色 观察细胞凋亡特征,光动力后检测bel-7402活性氧、共聚焦显微镜 观察亚细胞定位,建立 裸鼠人肝癌细胞模型,绘制肿瘤生长曲线,观察治疗效果。BF01-PDT治疗组能明显 抑制bel-7402肿瘤细胞增殖,BF01的浓度为6.4 μmol·L－1时,其杀伤率到86%,半数杀伤 浓度IC50 μmol·L－1,检测细 胞死亡方式主要是以晚期凋亡为主,BF01-PDT作用 bel-7402细胞后,经DAPI染色细胞核的形态呈现出凋亡的特征,活 性氧水平随给药浓度 增加而增加,亚细胞定位在线粒体,体内实验表明BF01-PDT可以明显抑制人肝癌肿瘤生长 。光敏剂BF01介导的光动力疗法对人肝癌细胞及小鼠体内肿瘤生长抑制作用明显,光 动力疗法以细胞凋亡为主,其机制可能与光敏剂BF01定位在肿瘤细胞的线粒体,增加 bel-7402细胞中ROS含量有关。     

雷帕霉素对绒癌JEG-3细胞株的影响

用雷帕霉素对人绒癌层细胞株JEG-3进行处理,探讨其对JEG-3的作用。分别采用MTT法、流式细胞术、Transwell技术检测雷帕霉素处理前后JEG-3细胞在增殖、凋亡和侵袭能力的改变。结果显示雷帕霉素对绒癌细胞的增殖、侵袭能力起着抑制作用,并对凋亡起促进作用。     

青蒿琥酯诱导活性氧依赖性的细胞凋亡

一般认为青蒿琥酯(ART)引起细胞凋亡是因为产生了活性氧(ROS),从而启动多种凋亡途径。利用荧光染料2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)和罗丹明(Rhodamine)123分别表征细胞中ROS的水平以及线粒体的膜电位,然后采用动态显微荧光成像技术在单个活细胞中实时监测ART诱导人类肺腺癌细胞(ASTC-a-1)凋亡过程中ROS的产生和线粒体膜电位的下降。结果显示0~50μg/mL质量浓度的ART均能引起细胞活力的降低,40μg/mL质量浓度的ART能明显产生ROS,并且引起细胞线粒体膜电位的显著下降;CCK-8试剂对细胞活性的检测结果表明,ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)可以显著抑制ART诱导的细胞凋亡和线粒体膜电位下降,证明ART诱导了ROS依赖性的细胞凋亡和线粒体膜电位下降。