哌珀霉素(Peptaibols)对储藏期猕猴桃软腐病的防治效果

[目的]研究橘绿木霉(Trichoderma citrinoviride)菌株TR673在液体发酵过程中产生的一种次级代谢物——哌珀霉素(peptaibols)对引起猕猴桃贮藏期间软腐病的病原菌葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)的抑菌效果。[方法]采用菌丝生长速率法测定了不同质量浓度的哌珀霉素对葡萄座腔菌的室内毒力。[结果]哌珀霉素对橘绿木霉具有很好的抑菌效果。其EC_(50)和EC_(90)平均值分别为6.320、6.275 mg/L和51.79、50.734 mg/L。进一步配制含量为50 mg/L哌珀霉素的液体制剂,对采收后的猕猴桃果实进行浸泡处理,测定其对猕猴桃贮藏期软腐病的防治效果。在常温(25℃)下,经浸泡处理的猕猴桃果实在储藏期内,能有效防控由葡萄座腔菌引起的软腐病,防治率达到100%。同时,猕猴桃的保鲜贮藏期也延长了30 d。[结论]哌珀霉素能有效防治猕猴桃软腐病,并对猕猴桃果实具有保鲜效果。     

橘绿木霉菌丝体中哌珀霉素a、b的提取及测定

[目的]建立发酵液中橘绿木霉(Trichoderma citrinoviride)菌丝体所产生的哌珀霉素a、b 2个代谢产物的提取和含量测定方法。[方法]采用单因素试验和正交试验,对浸提过程中所使用的乙醇浓度、液料比、提取时间和温度等影响因素进行筛选。在使用HPLC测定哌珀霉素a、b的含量时,其测定的色谱条件为Venusil MP C18色谱柱;以乙腈-水(体积比60∶40)为流动相;流速1.0 m L/min;柱温40℃;2个组分的检测波长均为205 nm。[结果]经优化的提取条件为乙醇浓度70%;液料比(v/w)=5∶1;温度和时间:室温下100 min。用HPLC测定哌珀霉素a和b的线性范围分别为10~150、9.1~137 mg/L;平均回收率分别为100.1%(RSD=1.6%)和99.6%(RSD=2.0%);哌珀霉素a、b粗提物的含量分别为232、210 mg/g。[结论]在此研究中所开发的提取和测定方法简便、可靠,能准确测定橘绿木霉菌丝体产生的次级代谢物哌珀霉素a、b的含量。     

箬竹叶提取物抗真菌活性研究

采用闪式提取法提取箬竹叶,并通过菌丝生长速率法对箬竹叶粗提物及其萃取相进行抗真菌活性测定。结果表明:箬竹叶粗提物对深绿木霉和烟草链格孢菌菌丝生长的EC_(50)值分别为2.33 mg·mL~(-1)、3.67 mg·mL~(-1)。在粗提物EC_(50)浓度下,各萃取相中,正丁醇相对深绿木霉的抗菌活性最高,菌丝生长抑制率为44.23%;乙酸乙酯相对烟草链格孢菌的抗菌活性最高,菌丝生长抑制率为54.39%。     

雪白弯颈霉C41发酵液稳定性及粗提物的抑菌活性

[目的]研究雪白弯颈霉C41菌株固体发酵粗提物的抑菌活性及其发酵液在不同条件下的稳定性。[方法]采用菌丝生长速率法,以7种植物病原真菌为供试菌,测定雪白弯颈霉C41固体发酵粗提物的抑菌活性;以玉米弯孢菌叶病菌为指示菌,测定发酵液在不同条件下的稳定性。[结果]固体发酵粗提物对玉米灰斑病、玉米弯孢菌叶斑病和玉米大斑病病菌菌丝生长均具有较强的抑制作用,抑制率分别为90%、84.38%和80%。发酵液在25~60℃范围内有较好的热稳定性,温度高于60℃则稳定性降低;有较广泛的酸碱稳定性,在pH值为6时抑菌活性最好;发酵液对日光和紫外线的稳定性较强。[结论]雪白弯颈霉C41菌株的代谢产物具有广谱的抑菌活性和较好的稳定性。     

长枝木霉T6发酵液稳定性及粗提物抑菌活性

[目的]明确长枝木霉T6菌株发酵液在不同环境下的稳定性及其粗提物的抑菌活性。[方法]以苹果树腐烂病菌为指示菌,采用生长速率法测定发酵液在不同条件下的稳定性,并以11种植物病原菌物为供试菌,研究发酵液粗提物的抑菌活性。[结果]稳定性试验表明:发酵液耐121℃高温,耐强酸强碱,自然光及紫外光处理对其抑菌活性无影响;在4℃及常温下可储存至少60 d以上保持活性不变。抑菌试验表明:发酵液粗提物对苹果树腐烂病菌、苹果树斑点落叶病菌、油菜根腐病菌和立枯丝核菌菌丝生长具有较强的抑制作用,其抑制率分别为100%、93.32%、92.35%和91.49%。[结论]长枝木霉T6菌株代谢产物具有较强的稳定性和广谱的抑菌活性。     

一株橘绿木霉TR673原生质体的制备、再生及融合研究

从齐齐哈尔市大豆根围土壤中分离得到1株木霉菌株TR673,经分子生物学及形态学鉴定,确定其为橘绿木霉(Trichoderma citrinoviride)。采用崩溃酶对TR673的菌丝体进行裂解制备原生质体,分别采用50℃水浴5 min和紫外线照射(20 W、40 cm)90 s对原生质体进行灭活,再将灭活的原生质体用聚乙二醇融合法进行融合,并对TR673原生质体的制备和再生条件进行了优化。结果表明,用20 g·L^-1的崩溃酶对培养16 h的TR673菌丝体酶解(裂解)5 h时,原生质体产量最大,达到1.2×10⁶个·mL^-1。用ZS1培养基对原生质体进行再生培养,其再生率可达12.3%。融合菌株TR673-3的哌珀霉素产量达1 282.67 mg·L^-1,较原始菌株TR673的哌珀霉素产量提高了18.11%。本研究为后续的橘绿木霉基因组的编辑、转化以及其它木霉菌原生质体的制备、再生与融合等实验提供了参考依据。     

长枝木霉GF-10的固体发酵条件优化

[目的]探究长枝木霉GF-10的固体发酵条件,并为该菌在田间的应用奠定基础。[方法]通过单因素筛选,Plackett-Burman实验和响应面分析优化该菌的产孢条件,获得影响该菌产孢的主要因素。[结果]以麸皮为基质,加入Mg SO_4 1.6‰、葡萄糖10%、(NH_4)2SO_4 1‰、Ca CO_3 1.6%、Ca SO_4 1%混合为固体培养基,光照12.17 h/d,培养47.36 h后进行搅拌,将获得最大产孢量5.93×109个/g,比优化前提高了234%;响应面分析结果显示光照和搅拌对产孢量影响最显著。[结论]该研究的完成有利于该菌的田间应用和菌剂的商业化生产。     

2-芳基苯(吡啶)并呋喃类化合物的合成及抗真菌活性

[目的]Ni催化偶联关环获得23个2-芳基苯(吡啶)并呋喃类化合物，考察其离体杀菌活性。[方法]通过¹H NMR和¹³C NMR谱确认了目标化合物结构，采用菌丝生长速率法测定了其对茄交链孢、尖孢镰刀菌、灰葡萄孢、链格孢菌4种植物病原真菌抑制活性。[结果]化合物对供试真菌具有不同程度的抑制作用，5l和5s对链格孢的抑制作用显著，处理后96 h抑制率均在94%以上(50 mg/L)。[结论]化合物上取代基R₁和R₂对抑菌活性有较大影响，吡啶环的引入使得抑菌效果显著提高。     

棘孢木霉1285对甲砜甲苯废水的生物处理研究

从化工厂废水中筛选甲砜甲苯降解菌,对菌种进行鉴定,考察菌种对甲砜甲苯的降解特性。分离得到一株能甲砜甲苯为唯一碳源和能源生长的菌株,初步鉴定其为棘孢木霉(Trichoderma asperellum),命名为棘孢木霉1285。菌株棘孢木霉1285最适降解条件为29℃,p H 5.5,30%的菌种培养物添加量,该菌株在5 h内能够将浓度为2 g·L-1的甲砜甲苯降解65%以上,该菌对甲砜甲苯的降解效率高,在芳香族化合物的污染治理中将会有一定的应用潜力。     

藤茶提取物的分析及对茶树叶部病菌的抑菌活性

[目的]植物源农药对非靶标生物安全、环境友好,可克服化学农药的局限性,具有开发潜力。研究了6种方法提取藤茶的活性成分对5种茶树主要叶部病菌的抑菌活性,以期为藤茶在生物农药领域的开发利用提供依据。[方法]采用热水浸提、超声辅助浸提和索氏提取等6种方法提取藤茶中活性成分;采用生长速率法测定不同藤茶提取物对病原菌的抑制作用。[结果]6种方法中以乙醇超声提取法的提取物抑菌效果最好,对拟茎点霉属、茎点霉属、链格孢属、拟盘多毛孢属和刺盘孢属的抑制率分别为80.9%、85.0%、68.3%、24.0%和89.6%。藤茶中主要活性成分二氢杨梅素对5种菌的EC_(50)值为0.3686~4.3560 g/L。[结论]藤茶乙醇超声提取物和二氢杨梅素对供试植物病原菌具有较强的抑制作用,具有开发应用前景。     

箬竹叶提取物对烟草病原真菌的抑制作用

采用菌丝生长速率法和孢子萌发法,对选用无水乙醇、冰乙酸和蒸馏水混合溶剂浸提所得的箬竹叶粗提物以及依次采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行液-液萃取所得的萃取物进行了抑菌活性测试。结果表明:箬竹叶粗提物对烟草链格孢菌和烟草疫霉菌菌丝生长均具有抑制活性,其对两种真菌抑制的EC50值分别为3.98mg·mL-1和0.88mg·mL-1、EC90值分别为7.33mg·mL-1和1.73mg·mL-1;对烟草链格孢菌孢子萌发抑制的EC50值和EC90值分别为4.68mg·mL-1和9.09mg·mL-1。2mg·mL-1的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取物和萃余水相对烟草链格孢菌菌丝生长的抑制率分别为31.27%、36.18%、6.06%和-7.05%;对烟草疫霉菌菌丝生长的抑制率分别为56.82%、81.53%、12.32%和-18.10%。乙酸乙酯萃取物对烟草链格孢菌和烟草疫霉菌菌丝生长的抑制活性明显高于箬竹叶粗提物,其对两种真菌抑制的EC50值分别为2.99mg·mL-1和0.80mg·mL-1、EC90值分别为5.41mg·mL-1和2.83mg·mL-1。乙酸乙酯萃取物对烟草链格孢菌孢子萌发抑制的EC50值和EC90值分别为1.03mg·mL-1和3.54mg·mL-1。     

多种农药对长枝木霉GF-10的毒性效应

[目的]研究3种类型16种农药对生防菌长枝木霉GF-10的毒性效应,以期为该菌的应用研究奠定基础。[方法]通过平板计数法计算孢子的萌发数和抑制率,并采用EC50值对毒性效应进行评估。[结果]杀虫剂对GF-10菌株的抑制效果为啶虫脒高氯·甲维盐高效氯氟菊酯吡虫啉甲氨基阿维菌溴氰菊酯;除草剂的抑制效果为敌草胺二甲戊灵异丙甲草胺砜嘧磺隆仲灵·异松;杀菌剂的抑制效果为多菌灵百菌清代森锰锌醚菊酯霉·稻瘟灵,其中当异丙甲草胺质量浓度为7.2、72μg/L、二甲戊灵质量浓度小于45μg/L、砜嘧磺隆质量浓度小于25μg/L时对GF-10具有促进作用。[结论]田间应用木霉菌GF-10时,可与7.2、72μg/L的异丙甲草胺、质量浓度小于45μg/L二甲戊灵和质量浓度小于25μg/L的砜嘧磺隆混合使用,而应避免与本研究提到的其他农药共同使用。     

贵州水晶葡萄病原真菌分离鉴定及室内抑菌活性测试

[目的]确定引起贵州水晶葡萄采后贮藏病害的病原真菌种类及室内筛选用于该病害的主要防治杀菌剂。[方法]对病原菌进行分离纯化鉴定,通过科赫法则确定致病菌种类;筛选12种商品杀菌剂对炭疽病菌进行抑菌活性测定,筛选出有效药剂,为防治该病害提供一定的理论依据。[结果]从贵州省凯里市水晶葡萄采后贮藏病害分离鉴定出3株病原菌,为青霉菌(Penicillium sp.)、炭疽病菌(Clletotrichum gloeosporioides)和链格孢菌(Alternaria sp.),采用科赫法则,对3株病原真菌进行刺伤回接,发现3株均为水晶葡萄在贮藏过程中的主要致病菌。12种杀菌剂对水晶葡萄炭疽病菌进行室内抑菌活性测试结果表明:均具有较好的抑制活性,其中50%咯菌腈WP、50%苯菌灵WP、42%噻菌灵SC和43%戊唑醇SC对水晶葡萄炭疽病菌抑制活性最好,其EC50值分别为0.1024、0.1386、0.1624、0.1974 mg/L。[结论]凯里水晶葡萄采后病害病菌为青霉菌、炭疽病菌和链格孢菌;筛选出12种药剂针对水晶葡萄采后病害炭疽病菌的药剂,其中50%咯菌腈WP对炭疽病菌具有较好抑制效果,为水晶葡萄采后贮藏病害防治提供理论基础。     

橘黄酮的提取及其抑菌特性

采用乙醇浸提法从橘子皮中提取黄酮,通过正交试验确定提取的最佳条件为：70%乙醇为提取剂,固液比为1︰20(g/mL),提取温度是70℃,提取时间2h,在510nm处测定橘黄酮质量浓度为0.205g/L,从橘子皮中提取的黄酮干重得率为2.938mg/g。本实验探究橘黄酮的抑菌活性,采用牛津杯法测抑菌作用,结果表明,橘黄酮对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、黑曲霉、灰葡萄孢菌和黄枝孢菌均有抑制作用,铜和镁离子可分别增强橘黄酮对细菌和真菌的抑菌作用,低pH和低温可提高抑菌效果,且优化pH和温度的橘黄酮剂型降低了最小抑菌浓度（MIC）20%,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、黑曲霉、灰葡萄孢菌和黄枝孢菌的抑菌作用分别提高了17%、27%、25%、28%、19%,高于对氯间二甲苯酚和甲基托布津的抑菌作用,特别是高于对细菌的抑菌作用。     

烟嘧磺隆高效降解复合菌系的构建及降解特性

[目的]构建烟嘧磺隆高效降解复合菌系并明确其降解特性，为高效修复烟嘧磺隆污染土壤提供理论支撑。[方法]通过富集驯化培养，从山西省不同生态区烟嘧磺隆污染土壤中筛选出5株烟嘧磺隆降解菌，通过16S rDNA和ITS序列分析鉴定降解菌的分类地位。通过全组合构建高效降解复合菌修复体系，并通过单因素试验明确其降解特性。[结果]筛选获得10株具有烟嘧磺隆降解能力的菌株，其中5株菌株降解能力较强。经16S rDNA和ITS序列鉴定和系统发育分析，5株烟嘧磺隆降解菌株分别为A枯草芽孢杆菌、B黑曲霉、C草酸青霉、D土曲霉和E绿木霉。全组合复配结果表明，由3种菌株组成的复合菌系对烟嘧磺隆降解率最好，其中ABD组合对烟嘧磺隆降解能力最高，较单株菌降解率最高的菌株D降解率提高23.74%；将筛选的A、B、D进行不同比例复配，菌株最佳复配比A∶B∶D为2∶3∶1时，烟嘧磺隆降解率最高达98.31%，各菌株对烟嘧磺隆降解的影响效果A>B>D。复合菌系较单一菌株增加了适宜的温度、pH值和烟嘧磺隆初始浓度范围，最适培养降解条件为接种量2%～5%，温度30～40℃，pH 7.0，烟嘧磺隆初始质量浓度50～2...     

蜡梅籽生物碱类成分及其抗氧化和抑菌活性

[目的]研究蜡梅(Chimonanthus praecox)籽中生物碱成分及其抗氧化和抑菌活性。[方法]应用硅胶柱层析法进行分离纯化并鉴定化合物结构。使用ABTS和FRAP法检测抗氧化能力,并考察其对甘蓝链格孢菌、葡萄灰霉菌、番茄叶霉菌的抑菌效果。[结果]分离得到1种化合物,鉴定为洋蜡梅碱(calycanthine)。其对ABTS阳离子自由基清除作用较强,IC_(50)值为(3.24±0.08)mg/L;抑菌结果显示其对3种菌株均具有一定的抑菌活性。[结论]洋蜡梅碱具有较强的抗氧化活性和抑菌活性。     

几种生物制剂对致病疫霉的毒力测定

[目的]筛选有效生物制剂,减少化学农药使用量。[方法]采用菌丝生长法测定7种生物制剂对致病疫霉的毒力。[结果]甲壳胺、乙蒜素和申嗪霉素对致病疫霉具有良好的抑制效果。申嗪霉素的毒力最强,EC_(50)值为2.0243(A1)、1.0028 mg/L(A2),乙蒜素次之,甲壳胺的抑菌效果最差。田间试验中,乙蒜素和申嗪霉素防治效果显著,分别为71.42%和69.63%,甲壳胺次之,防效为52.61%。[结论]申嗪霉素和乙蒜素杀菌效果显著,甲壳胺杀菌效果不显著但具有诱导抗病效果。3种生物制剂可有效防治马铃薯晚疫病。     

不同作用机制杀菌剂对番茄灰霉病菌拮抗木霉菌的毒力测定

[目的]为提高木霉的生防效果,筛选出与木霉联用的杀菌剂。[方法]对峙法、孢子悬浮液法和离体叶片法测定木霉对灰霉病菌的抑制作用。菌丝生长速率法测定10种不同作用机制的杀菌剂对2个病菌的抑制作用,并用EC50比值>1作为筛选标准。[结果]对峙条件下抑制率为69.52%;孢子悬浮液法和离体叶片法的EC50值分别为1.4×108、7.5×1010cfu/L。啶酰菌胺、氟啶胺、嘧菌酯、咯菌腈和啶菌唑对2个病菌的EC50比值>1。[结论]上述5种杀菌剂可作为木霉联用防治灰霉病的理想杀菌剂。     

太子参根腐病菌的分离和鉴定及10种杀菌剂对其毒力测定试验

[目的]鉴定引起太子参根腐病的病原菌种类及室内筛选用于该病害防治的药剂。[方法]采用病原菌培养性状和显微结构观察进行鉴定,生长速率法测定其对10种杀菌剂的药敏性。[结果]分离获得的病原菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和黑白轮枝孢菌(Verticillium albo-atrum);10种杀菌剂中,对尖孢镰刀菌、黑白轮枝孢菌抑菌效果最好的药剂均为10%苯醚甲环唑水分散粒剂,EC50值分别为0.09、0.02 mg/L,其次为80%戊唑醇可湿性粉剂,EC50值分别为0.72、1.35 mg/L。[结论]10%苯醚甲环唑水分散粒剂可作为田间防治太子参根腐病的主选药剂。     

猕猴桃叶斑病防治药剂筛选

[目的]为筛选猕猴桃叶斑病的防治药剂。[方法]采用菌丝生长速率法测定11种药剂对可可毛色二孢菌的室内生物活性,筛选6种抑菌效果较好的药剂进行田间药效试验。[结果]29%吡萘·嘧菌酯SC、36%喹啉·戊唑醇SC对该菌的抑制效果最强,EC₅₀值分别为0.1826、0.6338 mg/L,田间防效分别为78.88%、77.94%,同时提高猕猴桃单果质量。[结论]29%吡萘·嘧菌酯SC和36%喹啉·戊唑醇SC可以作为有效药剂开展猕猴桃叶斑病的防治。