我国2012年A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗质量趋势分析及评价

<正>脑膜炎球菌(meningococcus),学名为脑膜炎奈瑟球菌(N.meninyitidis),为流行性脑脊髓膜炎(流脑)的病原菌。脑膜炎球菌性脑膜炎是一种细菌性脑膜炎,因围绕大脑和脊髓的内皮发生严重感染而造成[1]。A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗系用相应群的脑膜炎球菌培养液,分别提取和纯化,获得相应群的荚膜多糖抗原,加入适宜稳定剂后冻干制成,用于预防由相应群脑膜炎球菌引起的疾病。随着我国免疫规划的     

B群流行性脑脊髓膜炎疫苗的研究进展

流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)是一种由革兰阴性的奈瑟双球菌导致的呼吸道传染病,以急性脑膜炎和败血症为主要症状。根据脑膜炎奈瑟双球菌荚膜多糖的特征可将其菌株至少分为12个血清群,其中A、B、C、W135、Y血清群是主要的致病菌群,随着A、C、Y、W135血清群菌株多糖疫苗的广泛应用,有效控制了相应血清群脑膜炎的流行,B血清群成为流脑主要的流行菌群之一,因此研制有效的疫苗对于预防流脑流行至关重要。本文对B血清群流脑疫苗研究所用抗原成分的变异程度、作用机制和免疫原性作一综述,同时对两种已批准上市的B血清群流脑疫苗进行比较。     

流行性脑脊髓膜炎疫苗研究进展

脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)感染可引起流行性脑脊髓膜炎和败血症,病死率约10%,幸存病人可能伴有严重后遗症,如四肢瘫痪、智力发育迟滞、听力丧失等,自发现至今,仍未得到有效控制。近年来,伴随生物技术的发展,流脑多糖疫苗和多糖结合疫苗的研究和开发也取得了诸多进展,有更多疫苗有望通过临床试验进入市场。本文就Nm疫苗及在研疫苗临床试验的研究进展作一综述。     

接种脑膜炎球菌多糖菌苗对其发病率影响的统计学分析

<正> 接种脑膜炎球菌多糖菌苗是控制流行性脑脊髓膜炎(下称流脑)流行的重要措施之一。。我市历年流脑发病率基本呈周期性变化,但从1987年起却呈直线下降,原因是否与接种脑膜炎球菌多糖菌苗有关,作者用回归方法分析,结果如下。 1.资料来源:表1是我市历年的流脑发病率。从1987年起,我市开始在1～14周岁人群中推行脑膜炎球菌多糖菌苗预防     

B群脑膜炎奈瑟菌疫苗的研究进展

随着A、C、W135、Y群脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides,Nm)多糖疫苗和多糖-蛋白结合疫苗的接种使用,相应菌群引起的流行性脑膜炎的发病率和死亡率均得到有效控制,而B群等其他群别引起的流行性脑膜炎发病率有所增加。因B群Nm的荚膜多糖(Capsular polysaccharide,CPS)或多糖-蛋白结合物免疫原性均较低,目前采用常规方法尚未生产出有效的B群Nm疫苗。本文对B群Nm CPS疫苗、外膜囊泡(Out membrane vesicles,OMV)疫苗、脂寡糖(Lipooligosaccharide,LOS)疫苗和重组蛋白疫苗的研究进展作一综述。     

脑膜炎球菌多糖结合疫苗的研究进展

脑膜炎球菌多糖结合疫苗基本采用化学结合方式制备,最常用的方式为酰胺缩合反应,由于多糖与蛋白以共价键形式结合,因此制备的结合疫苗稳定性较高,具有较好的技术优势,在脑膜炎球菌相关疾病预防中发挥重要作用。脑膜炎球菌多糖结合疫苗应用于2岁以内婴幼儿的免疫接种,保护效果持久。本文就脑膜炎球菌多糖结合疫苗制备的影响因素、多糖与载体蛋白的结合方式、国内外现状以及制备过程中存在的问题进行综述。     

A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的研制

目的研制A+C群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗。方法A群和C群脑膜炎球菌多糖在溴化氰(CNBr)的活化下,以1,6己二酰肼(ADH)作为连接子,与精制破伤风类毒素(TT)在碳二亚胺(EDAC)作用下结合,再按一定的比例将两者混合,制成A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗原液,加保护剂冻干后,制成A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。结果经检定,A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗各项指标均达到了质控标准。该疫苗安全性及免疫原性良好。结论已成功研制出冻干A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗,该制备工艺是可行的。     

冰点下降法测定乙型脑炎减毒活疫苗和两种脑膜炎球菌多糖疫苗的渗透压摩尔浓度

目的采用冰点下降法测定乙型脑炎减毒活疫苗、A群脑膜炎球菌多糖疫苗和ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗及相应稀释剂的渗透压摩尔浓度。方法按照《中国药典》三部(2010版)附录渗透压摩尔浓度测定法,采用冰点下降法分别测定市售20批乙型脑炎减毒活疫苗、55批A群脑膜炎球菌多糖疫苗和7批ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗及相应稀释剂的渗透压摩尔浓度。结果 3种疫苗之间的渗透压摩尔浓度存在较大的差异,在260~700 m Osmol/kg之间,其中乙型脑炎减毒活疫苗的批间和批次内渗透压摩尔浓度之间的差异较大,A群脑膜炎球菌多糖疫苗和ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗各自的批间和批次内渗透压摩尔浓度差异不大;3种疫苗稀释剂的渗透压摩尔浓度也存在较大差异。结论在上述3种疫苗质量控制体系中应酌情增加渗透压摩尔浓度检查项。     

冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性

目的观察冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗在2~8℃条件下的稳定性。方法将冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗放置在2~8℃条件下,定期取样,检查其物理外观,检测多糖含量、水分含量和分子大小,并进行鉴别试验以及异常毒性和免疫原性试验,考察其稳定性。结果冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗于2~8℃保存30个月,各项质量控制指标仍符合该疫苗企业注册标准。结论冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗在2~8℃条件下,其质量稳定。     

冻干A、C、W_(135)、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗的稳定性

目的观察冻干A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗在2～8℃保存的稳定性。方法将冻干A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗放置在2～8℃条件下30个月,定期取样,观察其物理外观,进行鉴别试验,并测定多糖含量、分子大小、水分含量、异常毒性等质量控制指标,评价疫苗质量的稳定性。结果冻干A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗于2～8℃30个月保存,各项质量控制指标仍符合该疫苗企业注册标准。结论冻干A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗在2～8℃保存,其质量稳定。     

1-氰基-4-二甲基氨基吡啶·四氟化硼活化A群脑膜炎球菌多糖制备的结合疫苗的免疫原性及其工艺稳定性

目的分析1-氰基-4-二甲基氨基吡啶·四氟化硼(1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate,CDAP)活化A群脑膜炎球菌多糖(group A meningococcal polysaccharide,Men APS)制备的A群脑膜炎球菌结合疫苗的免疫原性及其工艺稳定性。方法用CDAP活化多糖后,己二酰肼(adipic dihydrazide,ADH)衍化,制备多糖-酰肼基衍生物,在碳二亚胺[1-ethyl-3-(3-dimethylaminopmpyl)carbodiimide,EDAC]作用下,与TT偶联,制备A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗原液(Men APSCDAP-TT),考察其免疫特性;将Men A PSCDAP-TT与C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗原液混合,制备A、C群脑膜炎球菌结合疫苗(Men ACPSCDAP-TT),再与市售的采用溴化氰(CNBr)活化多糖制备的A、C群脑膜炎球菌结合疫苗(Men ACPSCNBr-TT)进行抗A群多糖Ig G抗体水平的比较。连续制备12批结合疫苗原液及9批结合疫苗,原液参考《中国药典》三部(2010版)进行各项检定,疫苗进行抗A群多糖Ig G抗体水平的检测。结果 Men APSCDAP-TT具有T细胞依赖性抗原特性;Men ACPSCDAP-TT免疫2次后产生的抗A群多糖Ig G抗体GMT明显高于市售疫苗免疫2次后水平,差异有统计学意义(P均0.01),也高于或相似于市售疫苗免疫3次后水平,但差异无统计学意义(P均0.05);免疫3次后产生的抗A群多糖Ig G抗体GMT仍高于或相似于市售疫苗,但差异无统计学意义(P0.05)。连续制备的12批结合疫苗原液,内毒素含量均低于10 EU/μg多糖,未检出游离蛋白,多糖/蛋白值、结合多糖含量、结合物分子大小分布、EDAC和ADH残留均符合A群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程(试行)YBS01112006的要求,主要检测指标及多糖回收率趋势分析基本在均数±2标准差内;9批Men ACPSCDAP-TT免疫后产生的抗A群多糖Ig G抗体GMT均在A群脑膜炎球菌多糖的60倍以上。结论经CDAP活化多糖后衍化再与载体蛋白结合制备的A群脑膜炎球菌结合疫苗具有良好的免疫原性,制备工艺稳定、可靠,为规模化生产奠定了基础。     

A群流行性脑膜炎球菌多糖含量检测免疫速率比浊方法的建立及验证

目的应用免疫速率比浊方法测定A群流行性脑膜炎球菌多糖含量,并进行验证。方法采用免疫速率比浊方法测定A群脑膜炎球菌多糖标准品多糖含量,绘制标准曲线,对该方法的精密性、准确性、灵敏性进行验证,并进行干扰试验。结果多糖抗原浓度在0~10μg/ml之间,与相应的浊度值呈良好的线性关系,R2=0.984 3;该方法检测结果的日内和日间CV值均小于5%,不同浓度A-DT结合物样品的回收率在99.67%~102.00%之间,最低检出限为0.159μg/ml;加入C群流行性脑膜炎球菌多糖后的A群脑膜炎球菌多糖含量与未添加相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论免疫速率比浊方法测定A群脑膜炎球菌多糖含量具有较高的准确度、精确度及灵敏度,并具有较强的特异性。     

A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗大规模接种后的速发型接种反应观察

目的观察A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗大规模接种后的速发接种反应。方法以A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗为观察组,伤寒Vi多糖疫苗为对照组,按组群随机分层配对的原则,将观察现场分为108个组群,观察组和对照组各分配54个组群进行接种。建立接种反应监测系统,按统一表格和方法对两组的速发接种反应进行监测。结果两组共接种34 543人,其中A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗接种18 167人,伤寒Vi多糖疫苗接种16 376人。A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗速发接种反应率为0.44‰;伤寒Vi多糖疫苗速发接种反应率为0.79‰,二者差异无统计学意义;速发接种反应均出现在接种后15 min内,最早的出现在接种后5 min,速发接种反应中有2例为异常反应,但未出现严重反应。结论A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗速发接种反应发生率低,预后良好。     

A、C、W_(135)、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗的研制

目的研制A、C、W135、Y群脑膜炎球菌四价多糖疫苗,并采用新方法去除细菌内毒素。方法经细菌培养后,分别提取A、C、W135和Y群脑膜炎球菌荚膜多糖,纯化后,采用超速离心和层析技术相结合去除内毒素,按一定的配比制成四价多糖原液,加入保护剂,制成冻干疫苗,并进行检定。结果所研制的A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗各项指标均达到了质控标准,内毒素含量小于10EU/μg,具有良好的安全性及有效性。结论已成功制备了A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗。     

A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性

目的　观察A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性。方法　疫苗放不同温度和不同时间后 ,用乙醇沉淀法测定A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的游离多糖含量 ,SepharoseCL 4B凝胶层析法测定分子大小。结果液体疫苗放置 2～ 8℃ 9个月 ,游离多糖含量为 30 %以上 ;4℃放置 18个月 ,Kd <0 2的多糖回收率 <6 0 %。冻干疫苗放置 2 5℃和 37℃ 12个月 ,或放置 2～ 8℃ 18个月 ,游离多糖含量均不高于 2 5 % ,Kd <0 2的多糖回收率 >6 0 %。结论　冻干A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗具有良好的稳定性。     

2013～2016年A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗质量的一致性分析

目的分析2013~2016年本公司生产的A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗关键质量属性的变化趋势,评价产品质量的一致性。方法根据《中国药典》三部(2010及2015版)规定的方法对2013~2016年本公司生产的520批A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗的多糖含量(A群磷含量、C群多糖N-乙酰神经氨酸含量)、水分及多糖分子大小等关键质量指标进行检测,应用Minitab数据分析软件对产品关键质量指标的检测结果进行I-MR控制图趋势比较分析、方差分析及工艺能力指数分析。结果 2013~2016年A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗的A群磷含量、C群多糖N-乙酰神经氨酸含量、水分及多糖分子大小的检测结果均在国家标准范围内,整体处于稳定状态。结论 A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗生产工艺稳定,产品质量一致性良好。     

高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培法测定四价脑膜炎球菌多糖疫苗的多糖含量

目的采用高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培法(high performance anion exchange chromatography with pulsed amperometric detector,HPAEC-PAD)测定四价脑膜炎球菌多糖疫苗中A、C、Y、W135群多糖含量,并对该方法进行验证。方法用三氟乙酸对四价脑膜炎球菌结合疫苗进行水解,得到各群多糖的水解产物:唾液酸、葡萄糖、半乳糖、6-磷酸葡萄糖胺(ManN-6-P),采用HPAEC-PAD法,CarboPac PA10分离柱分别测定缓冲提取液中的总唾液酸、葡萄糖、半乳糖、ManN-6-P的含量,利用归一化的峰面积计算相应唾液酸系数,再计算C群脑膜炎球菌唾液酸含量。对HPAEC-PAD法进行验证,并与传统火箭电泳法检测结果进行比较。结果四价脑膜炎球菌结合疫苗水解后得到的4群单糖均呈良好线性,分离度和峰形均良好;HPAEC-PAD法检测4群糖的日内和中间精密性的RSD均小于5%;各群多糖峰面积的回收率均在80%¹20%之间;3批四价脑膜炎球菌多糖疫苗水解后,经HPAEC-PAD法测定的各群多糖含量与传统火箭电泳法测定结果相当。结论 HPAEC-PAD法检测四价脑膜炎球菌多糖疫苗中的A、C、Y、W135群多糖含量准确、简便、快速、可靠,对控制该疫苗的质量具有重要意义。     

A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的研制

目的 制备安全有效的Ａ群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。方法 通过碳二亚胺（ＥＤＡＣ）将Ａ群脑膜 炎球菌多糖－ＡＨ衍生物与破伤风类毒素（ＴＴ）蛋白共价结合,制备Ａ群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。结果 所结合 成的多糖－蛋白结合物,具有Ａ群脑膜炎球菌多糖和破伤风类毒素抗原特异性。单独用多糖免疫小鼠未能诱导出 高水平的血清Ｐｓ抗体,而用结合物免疫小鼠却诱导出高水平的血清Ｐｓ抗体及ＴＴ抗体,并有免疫记忆性。结论 为进一步临床评价该疫苗的人群免疫效果提供了实验基础。     

我国ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗趋势分析及质量评价

<正>ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗是我国于21世纪新研制的疫苗,用于预防由相应群脑膜炎球菌引起的疾病[1-2]。我国对疫苗实行批签发监管制度,2007年签发了第1批ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗,迄今为止,由2007年的1家企业至今已有5家企业获得了生产文号,共签发近500批制品约4 000万人份。仅2013年,该疫苗批签发85批次,共计7 484 833人份。     

ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗多糖含量火箭电泳检测方法的建立及其验证

目的建立ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗多糖含量检测的火箭电泳法,并对该方法进行验证。方法分别用A、C、Y、W135群菌液免疫家兔,制备特异性抗血清,加至琼脂糖凝胶平板中,以定量的各群多糖原液作为抗原参考品进行火箭电泳,用已知的多糖浓度及对应的火箭峰高绘制标准曲线,得出直线回归方程,根据样品的火箭峰高计算多糖含量,确定该方法的检测限,并对该方法进行专属性、线性重复性、准确度、精密度验证;用建立的方法检测3批ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗多糖含量。结果根据该方法绘制的标准曲线呈良好的线性关系,R2均≥0.95;该方法确定样品多糖浓度检测范围为3~7μg/ml,回收率在90%~110%范围内;重复性及不同操作者间的精密度试验结果 RSD均小于5%;特异性好,未检出各群抗原之间的交叉反应。3批ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗多糖含量均符合企业内部《ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗制造与检定规程》的要求。结论建立的火箭电泳方法可用来检测ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗的多糖含量。